Isolement des cellules dendritiques myéloïdes et les cellules épithéliales du thymus humain

Christina Stoeckle; Ioanna A. Rota; Eva Tolosa; Christoph Haller; Arthur Melms; Eleni Adamopoulou

doi:10.3791/50951

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Article de méthode

Isolement des cellules dendritiques myéloïdes et les cellules épithéliales du thymus humain

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DOI :

10.3791/50951

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19 septembre 2013

Christina Stoeckle¹^,² , Ioanna A. Rota¹ , Eva Tolosa³ , Christoph Haller⁴ , Arthur Melms⁵ , Eleni Adamopoulou¹

¹Department of General Neurology, Hertie Institute for Clinical Brain Research, ²Institute of Pharmacology, University of Bern, ³Department of Immunology, University Medical Center Hamburg-Eppendorf, ⁴Department of Thoracic and Cardiovascular Surgery, University Clinic Tuebingen, ⁵Department of Neurology, University Hospital Erlangen

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit en détail une méthode pour isoler des cellules présentant l'antigène à partir de thymus humain par l'intermédiaire de différentes étapes de digestion enzymatique du tissu suivie d'une centrifugation de densité de la suspension de cellules individuelles et enfin le tri magnétique et / ou FACS des populations de cellules d'intérêt.

Résumé

Dans ce protocole, nous fournissons un procédé pour isoler des cellules dendritiques (DC) et les cellules épithéliales (TEC) à partir du thymus humain. DC et TEC sont la principale cellule présentatrice d'antigène (APC) de types trouvés dans un thymus normal et il est bien établi que ils jouent des rôles distincts lors de la sélection thymique. Ces cellules sont localisées dans des micro-environnements distincts dans le thymus et chaque type APC ne constitue qu'une petite population de cellules. Pour mieux comprendre la biologie de ces types de cellules, la caractérisation de ces populations de cellules est très souhaitable, mais en raison de leur basse fréquence, l'isolement de l'un de ces types de cellules nécessite une procédure efficace et reproductible. Ce protocole détaille une méthode pour obtenir des cellules appropriées pour la caractérisation des propriétés cellulaires divers. Tissu thymique est mécaniquement perturbé et après différentes étapes de digestion enzymatique, la suspension de cellules résultante est enrichi à l'aide d'une étape de centrifugation par densité de Percoll. Pour l'isolement des myéloïde DC (CD11c <sup> +), des cellules provenant de la fraction de faible densité (LDF) sont immunosélectionné par tri cellulaire magnétique. Enrichissement des populations de TEC (mTEC, la technologie cTEC) est réalisé par déplétion des hématopoïétiques (CD45 ^hi) des cellules de la fraction cellulaire de faible densité Percoll permettant leur isolement subséquent par tri cellulaire activé par fluorescence (FACS) en utilisant des marqueurs cellulaires spécifiques. Les cellules isolées peuvent être utilisées pour différentes applications en aval.

Introduction

Le thymus est l'organe dans lequel le développement des cellules T se produit. Sa taille relative et absolue diminue avec l'âge quand il est remplacé successivement par de la graisse bien que l'activité du thymus peut encore être détecté dans la vieillesse. Son importance pour la réponse immunitaire a été démontrée dans le début des années 1960 ^1.

Le répertoire des cellules T est façonnée par l'interaction des récepteurs des cellules T avec des complexes peptide-MHC sur les différents types de thymus APC, qui assurent la survie ou la mort des indices de développement de cellules T, ce qui entraîne un répertoire ....