כאן אנו מציגים עיבוד של בהירות פסיבי, שיטת שחזור תלת-ממד עבור ויזואליזציה של השחלות להערכת, נימים הזקיקים השחלות העכבר ללא פגע.
השחלה הוא האיבר הראשי של מערכת הרבייה הנשית, חיוני לייצור של גמטות הנשי ולבקרה המערכת האנדוקרינית, אבל את מערכות היחסים המורכבות מבני תלת מימד (3D) להערכת ארכיטקטורות של השחלה מתוארים לא טוב. על מנת להמחיש את חיבורי 3D ואדריכלות של כלי הדם בשחלה ללא פגע, הצעד החשוב הראשון היא להפוך את השחלה שטיחות ברורה. כדי למנוע התכווצות של רקמות, היינו את הידרוג המבוסס על קיבוע בהירות פסיבי (החלפת השומנים נקה קשיח hybridized אקרילאמיד הידרוג רקמות הדמיה / Immunostaining/ב באתרו הכלאה-תואם) פרוטוקול השיטה כדי לנקות שחלה ללא פגע . Immunostaining קונפוקלית multiphoton מתקדמות, תמונות 3D-שחזורים ואז שימשו את הפריט החזותי של כלים השחלות נימים הזקיקים. באמצעות גישה זו, אנחנו הראו מתאם חיובי משמעותי (P < 0.01) בין האורך נימים הזקיקים, נפח של הקיר הזקיקים.
הזקיק הוא יחידת מבניים ופונקציונליים של השחלה, התפתחותו קשורה מאוד להערכת בתוך השחלה. כלי הדם לספק תזונה והורמונים לנשירה, וכך לשחק תפקידים חשובים גדילה, התבגרות של זקיקי1.
שילוב של טכנולוגיות, כולל כלי דם סלקטיבי סמני עכבר הטרנסגניים מודלים, פיתוח פרמצבטי, הגדילו את הידע שלנו אודות רשתות כלי דם השחלות, אנגיוגנזה את תפקוד כלי הדם folliculogenesis. השחלה מכונה איבר פעיל כי זה remodels שונים רקמות, רשתות כלי דם במהלך folliculogenesis, ביוץ. כזה שיפוץ פעיל ב גודל ומבנה של כלי נדרש עבור הפונקציה הביולוגי של פיתוח, גיוס זקיקים.
שיטות היסטולוגית ו histomorphometric מסורתיות באמצעות סעיפים השחלות ו immunolabeling של כלי הדם מוגבלות דו-ממדית (תמונות דו-ממד)2. עם התפתחות טכנולוגיות שחזור תלת מימדי (3D), תמונות דו-ממד של רקמות פרוסות יכול להיות חופף כדי להפוך מבנה תלת-ממדי, אך לשיטה זו יש עדיין כמה מגבלות — חלוקתה של הרקמה יכול להרוס את מזערים, חלקים מסוימים לעתים קרובות חסרים רקמות, עבודה משמעותית מעורב בביצוע שחזורים תלת-ממדיים מתמונות המתקבל פרוסות. כל רקמה הדמיה תלת-ממדית עם מיקרוסקופיה קונפוקלית יכול להתגבר על רבות מההגבלות הללו, אך שיטות אלה מוגבלות להערכת אנגיוגנזה של השחלה עובריים3. השימוש ברקמה כל ניקוי שיטות כגון בהירות4 יכול להגביר את עוצמת מטמיעים כדי לפתור את הבעיות האלה של השחלות כמחנכת, למבוגרים, שיטות כאלה לספק אישור אופטי של השחלה ללא כל העיוותים מבנית. הדמיה של הארכיטקטורה תלת-ממד של השחלה שלם מספק מסד נתונים של תמונה מדויקת עבור תוכנת ניתוח התמונה, כגון חבילת התוכנה Imaris נעשה שימוש בעבודה זו.
שיפוץ של השחלה ברחבי לבגרות הוא חלק מערכת פיזיולוגית דינאמית, וזה יהפוך השחלה מודל מצוין עבור חקירות ברגולציה של אנגיוגנזה. יתר על כן, להעריך את התפקיד של כלי הדם השחלות בתנאים פיפטות של מערכת הרבייה הנשית כגון תסמונת שחלות פוליציסטיות או סרטן השחלות יכול להילמד דרך רקמות השחלה כל הדמיה. הפיתוח של שיטת בהירות פסיבית ושימוש של תמונה מתקדם ניתוח תוכנה סיפקו מידע מרחבי מפורט על הקשרים בין כלי הדם ולא השחלה מבנים כמו זקיקי.
במחקר הנוכחי, אנו מציגים 3D הדמיה כדי להעריך את קשרי הגומלין בין נימים זקיקים גידול בודדים. בעבודה הקודמת שלנו באמצעות פרוטוקול זהה 9, למדנו את התפקידים של להערכת גדולים, האינטראקציות בין זקיקים, ואת המיקום של זקיקים של השחלות העכבר ללא פגע. הגישה בהירות פסיבי אפשר לנו ללמוד מיק…
The authors have nothing to disclose.
מחקר זה נתמך על ידי מענקים מקרן מיוחד סינית עבור והפוסט-דוקטורנטים (2014T70392 מס כדי YF), את נבחרת מדעי הטבע קרן של סין (81673766 מס כדי YF), הקרן החדשה הטרמה המורה, היסוד Zuoxue של אוניברסיטת פודאן (fudan), לבין ההתפתחות פרויקט לרפואה אינטגרטיבית-דיסציפלינות שיא שנגחאי (20150407).
Acrylamide | Vetec | v900845 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/vetec/v900845 |
Alexa Flour 488 (Dilution 1:50) | Life Technologies | A11039 | https://www.thermofisher.com/antibody/product/Goat-anti-Chicken-IgY-H-L-Secondary-Antibody-Polyclonal/A-11039 |
Alexa Flour 594 (Dilution 1:50) | Life Technologies | A11012 | https://www.thermofisher.com/antibody/product/Goat-anti-Rabbit-IgG-H-L-Cross-Adsorbed-Secondary-Antibody-Polyclonal/A-11012 |
Bisacrylamide | Amresco | 172 | http://www.amresco-inc.com/BIS-ACRYLAMIDE-0172.cmsx |
Black wall glass bottom dish (Willco-Dish) | Ted Pella | 14032 | http://www.tedpella.com/section_html/706dish.htm#black_wall |
Boric acid | Sinopharm Chemical Reagent | 10004818 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=10004818 |
Disodium hydrogen phosphate dodecahydrate (Na2HPO4 12H2O) | Sinopharm Chemical Reagent | 10020318 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=10020318 |
FocusClear | Celexplorer | FC-102 | http://www.celexplorer.com/product_list.asp?MainType=107&BRDarea=1 |
Parafilm | Bemis | PM996 | http://www.parafilm.com/products |
Paraformaldehyde | Sinopharm Chemical Reagent | 80096618 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=80096618 |
PECAM1/CD31, platelet-endothelial cell adhesion molecule 1 (Dilution 1:10) | Abcam | ab28364 | http://www.abcam.com/cd31-antibody-ab28364.html |
Photoinitiator VA044 | Wako | va-044/225-02111 | http://www.wako-chem.co.jp/specialty/waterazo/VA-044.htm |
Sodium azide | Sigma | S2002 | http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/s2002?lang=en®ion=US |
Sodium chloride (NaCl) | Sinopharm Chemical Reagent | 10019318 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=10019318 |
Sodium dihydrogen phosphate dihydrate (NaH2PO4 2H2O) | Sinopharm Chemical Reagent | 20040718 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=20040718 |
Sodium dodecyl sulfate | Sinopharm Chemical Reagent | 30166428 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=30166428 |
Sodium hydroxide (NaOH) | Sinopharm Chemical Reagent | 10019718 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=10019718 |
Triton X-100 | Sinopharm Chemical Reagent | 30188928 | http://en.reagent.com.cn/enshowproduct.jsp?id=30188928 |
Tyrosine hydroxylase (TH, Dilution 1:50) | Abcam | ab76442 | http://www.abcam.com/tyrosine-hydroxylase-phospho-s40-antibody-ab51206.html |