In Vivo Imagerie multimodale et analyse du modèle de néovascularisation choroïdienne souris induite par Laser

Summary

Nous présentons ici l’utilité de longitudinal en vivo imagerie dans le suivi des modifications morphologiques de la néovascularisation choroïdienne induite par laser chez les souris.

Abstract

Induite par laser de néovascularisation choroïdienne (NVC) est un modèle bien établi pour imiter la forme humide de la dégénérescence maculaire liée à l’âge (DMLA). Dans ce protocole, notre objectif est de guider le lecteur non pas simplement par le biais de considérations techniques de générer des lésions induites par le laser pour déclencher des processus néovasculaire, mais plutôt se concentrer sur l’information puissants qui peut être obtenue au multimodal longitudinale in vivo imagerie tout au long de la période de suivi.

La souris induite par laser modèle CNV a été générée par une administration de laser de diode. Techniques d’imagerie multimodale en vivo ont été utilisés pour surveiller l’induction, la progression et la régression CNV. Tout d’abord, tomographie à cohérence optique domaine spectral (SD-OCT) ont été effectuée immédiatement après la lasering pour vérifier une rupture de la membrane de Bruch. Subséquent en vivo imagerie utilisant l’angiographie à la fluorescéine (FA) a confirmé des dommages réussi de la membrane de Bruch de série images acquises au niveau choroïdienne. Suivi longitudinal de la prolifération de la CNV et régression sur 5, 10 et 14 jours après le lasering a effectué un SD-OCT et FA. Simple et fiable de classement de leaky leasions CNV d’images de FA sont présenté. Segmentation automatique pour la mesure de l’épaisseur totale de rétine, combinée avec application de calibre manuel pour le mesurage de l’épaisseur rétinienne aux sites de la CNV, permettent une évaluation impartiale de la présence de le œdème. Enfin, vérification histologique du CNV est effectuée à l’aide d’isolectine GS-IB4 coloration sur flatmounts choroïdienne. La coloration est binariser, et la zone isolectine-positif est calculée avec ImageJ.

Ce protocole est particulièrement utile dans les études thérapeutiques nécessitant haut-débit comme dépistage de pathologie de la CNV, car elle permet de vite, multimodal et classification fiable de l’oedème de pathologie et de la rétine CNV. En outre, haute résolution SD-OCT permet l’enregistrement d’autres caractéristiques pathologiques, tels que l’accumulation de liquide sous-rétinienne ou remaniements. Cependant, cette méthode n’offre pas la possibilité d’automatiser CNV volume analyse des images SD-OCT, qui doit être effectuée manuellement.

Introduction

La première tentative réussie pour imiter la pathologie de la CNV humaine chez les rongeurs a été démontrée il y a près de trois décennies avec un laser krypton de rats Long-Evans¹. Par la suite, un laser krypton servait à rompre la membrane de Bruch dans la souche de souris plus populaire, C57BL/6J^2,3,4. Le taux de réussite de l’induction de la CNV a été vérifié avec FA et taches histologiques. Un développement rapide des modalités d’imagerie non invasives, tels que les PTOM, favorisé la croissance du champ des modèles précliniques de rongeurs. La cap....

Protocol

Tous les animaux ont été traités conformément à la déclaration d’ARVO sur l’utilisation des animaux ophtalmique et Vision Research et la Directive européenne 86/609/CEE pour l’expérimentation animale, à l’aide de protocoles approuvé et contrôlé par le Conseil finlandais Animal Experiment.

1. induite par laser souris CNV modèle ⁵

1. Inspecter les yeux de l’animal macroscopiquement pour toute anomalie.
2. Peser la souris.
3. Calculer et préparer une quantité appropriée d’anesthésiques à utiliser, basé sur le poids de l’animal, par exemple un mélange de médétomidine (1 mg/kg), la kétamine (....

Results

Une bulle ou subretinal saignement immédiatement après lasering n’est pas toujours visible. SD-OCT est donc particulièrement important pour vérifier les dommages de la membrane de Bruch. Figure 1 montre un exemple de l’imagerie OCT à des moments différents après l’administration de laser.

Figure .......

Discussion

Imagerie multimodale offre des outils précieux pour l’évaluation de pathologie CNV. Ici, nous avons présenté un protocole d’imagerie consistant en FA, SD-OCT et segmentation automatique pour l’évaluation rapide, reproductible et fiable de la pathologie de la CNV. Une rupture de la membrane de Bruch après que administration de laser a été confirmée. En outre, l’utilisation du SD-OCT à ce stade a également permis une visualisation immédiate de possibles hémorragies remaniements et sous-rétinienne, qui peuvent entraîner l’i.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Médétomidine (nom commercial Domitor)	Orion	Vnr 01 56 02	Anesthésie
Kétamine	Intervet	Vnr 51 14 85	Anesthésie
0,9 % NaCl	B Braun	357 0340	Anesthésie
Xylazine (nom commercial Rompun vet)	Bayer	vnr 14 89 99	Anesthésie
Tropicamide	Santen	Vnr 04 12 36	Mydriatique agent
Viscotears	Alcon	Vnr 44 54 81	Lubrifiant
Systane	Alcon	;-	Lubrifiant
5 % Fluorescéine sel sodique	Sigma Aldrich	F6377-100G	Agent fluorescent
Atipamezole (nom commercial Antisedan)	Orion	Vnr 47 19 53	Anesthésie