Cep işgali ve geçiş işlemi değerlendirilmesi: Video mikroskop esaslı çizik karşılaştırılması tahlil ve Boyden odası tahlil yara
Summary
Bu çalışmada cep işgali ve geçiş analizi için iki farklı yöntem raporları: Boyden odası tahlil ve vitro video mikroskobu tabanlı yara iyileşmesi tahlil. Bu iki deney protokollerde açıklanmış ve kendi yararları ve dezavantajları karşılaştırılır.
Abstract
Tümör hücreleri istila ve geçiş yeteneklerini kanser ilerlemesi ve yineleme için ana katkı kaynağı sağlamaktadır. Birçok çalışma nasıl kanser hücrelerinin yaymak yeni tedavi stratejileri geliştirmek amacı ile anlamak için geçiş ve işgal yeteneklerini incelemiş bulunuyoruz. Bu yeteneklerin hücresel ve moleküler temeli analizi hücre hareketlilik karakterizasyonu ve fizikokimyasal özellikleri sitoiskeleti ve hücresel microenvironment yol açmıştır. Uzun yıllar boyunca, Boyden odası tahlil ve sıfırdan yara tahlil cep işgali ve geçiş eğitim için standart teknikleri olmuştur. Ancak, bu iki teknik kısıtlamalar bulunmaktadır. Boyden odası tahlil zor ve zaman alıcı ve düşük tekrarlanabilirlik sıfırdan yara tahlil vardır. Mikroskobu, özellikle de modern teknolojilerin geliştirilmesini sıfırdan yara tahlil tekrarlanabilirlik artmıştır. Güçlü analiz sistemleri kullanarak, bir “içinde-kuluçka” video mikroskobu hücre göç ve işgal otomatik ve gerçek zamanlı analiz sağlamak için kullanılabilir. Amacı bu kağıt, rapor ve hücre işgali ve geçiş eğitim için kullanılan iki deneyleri karşılaştırın etmektir: Boyden odası tahlil ve bir en iyi duruma getirilmiş vitro video mikroskop esaslı çizik tahlil yara.
Introduction
Cep işgali ve geçiş direnci tedavi1 ana nedeni kanser hücrelerinin, yayılması yer alırlar ve lokal veya metastatik yineleme sonra kanser tedavi2yol açabilir. Mezenkimal epitel geçiş (EMT) hücre Invasion-geçiş hangi kanser hücreleri bir epitel Mezenkimal bir fenotip geçiş ilk işlemidir. E-Cadherin epitel fenotip3hücre dışı bir işaretleyicidir ve artan N-cadherin ve vimentin Mezenkimal fenotip4karakteristik ifadesidir. Geçiş de matris metalloproteases5eylem yoluyla iç kapasite kanser hücrelerinin temel hücre dışı Matriks (ECM) işgal bağlıdır.
Bu istila-geçiş mekanizması kanser birçok yerlerde, özellikle baş ve boyun kanser6‘ için tanımlanmıştır. Pek çok araştırmacı nasıl bu bilgi için yeni tedavi stratejileri götürecek umuduyla kanser hücrelerinin yaymak daha iyi anlamak için göç ve işgal işlemleri üzerinde odaklanmıştır. Bu çalışmalar güvenilir ve tekrarlanabilir deneyleri kullanarak gerçekleştirilen çok önemlidir.
Hücre hareketliliği vitro analizine zor olabilir. Uzun yıllar önce geliştirilen, Boyden odası tahlil Invasion-geçiş analiz7için standart olarak kabul edilir. Ancak, zaman alıcı ve sık sık yanlıştır. İkinci bir test bir hücre monolayer kültürü üzerinde bir çizik bile yapma ve esir alma imge cep işgali ve göç sabit zaman aralıklarında içerir yara iyileşmesi tahlil8‘ dir. Bu teknik yaygın olarak iki ardışık test sonuçları arasında büyük farklılıklar nedeniyle eleştirildi. Ancak, mikroskopi, özellikle de modern teknolojilerin uygulama sıfırdan yara tahlil tekrarlanabilirlik geliştirdi. Video mikroskoplar kolayca İnkübatörler içinde tanıttı olabilir ve hücre göç gerçek zamanlı görüntü oluşturabilirsiniz. Bu cihazlar mikroskobik verileri kaydetmek ve zaman içinde yara hücre izdiham otomatik olarak analiz sağlar. Bu kağıt Boyden odası tahlil ve en iyi duruma getirilmiş sıfırdan yara tahlil tarif ve avantajları ve her yaklaşımın zayıf yönlerini tartışmak için amaçtır.
Protocol
Representative Results
Discussion
Biz burada iki farklı yöntemler cep işgali ve geçiş işlemi çalışma raporu Bu süreç analizi bir subpopulation kanser kök hücreleri10,11adı verilen kanser hücrelerinin artan hareketliliği tarafından açıkladı metastatik yineleme katılan faktörler anlamak için önemlidir.
Boyden odası deneyi biridir en sık kullanılan teknikler keşfetmek için hücre işgali ve geçiş. Bu yaklaşımın bir avantajı, tekrarlanabi…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu teknikler LabEx ASAL (ANR-11-LABX-0063), ETOILE (CPER 2009-2013) ve lirik Grant İnka-DGOS-4664 bilimsel çerçevesinde Kervansaray’a planı-Etat-bölge (CPER) desteği ile geliştirilmiştir.
Materials
| Fetal Calf Serum Gold | GE Healthcare | A15-151 | |
| Hydrocortisone water soluble | Sigma-Aldrich | H0396-100MG | |
| Penicillin/Streptomycin 100 X | Dominique Dutscher | L0022-100 | |
| DMEM | Gibco | 61965-026 | |
| F12 Nut Mix (1X) + GlutaMAX-I | Gibco | 31765-027 | |
| EGF | Promega | G5021 | The solution must be prepared just before use because it is very unstable |
| Z1 coulter particle | Beckman Coulter | 6605698 | |
| Optical microscope | Olympus | CKX31 | |
| SQ20B cell line | Gift from the John Little’s Laboratory | – | |
| Wound Maker | Essen Bioscience | 4494 | Store in safe and dry place |
| 96-well ImageLock Plate | Essen Bioscience | 4379 | |
| CoolBox 96F System with CoolSink 96F | Essen Bioscience | 1500-0078-A00 | |
| CoolBox with M30 System | Essen Bioscience | 1500-0078-A00 | |
| Boyden Insert | Dominique Dutcher | 353097 | |
| Boyden Coated Insert | Dominique Dutcher | 354483 | Store at -20 °C |
| Companion 24-well Plate | Dominique Dutcher | 353504 | |
| BD Matrigel standard | BD BioScience | BD 354234 | Store at -20°C. |
| RAL 555 Staining Kit | RAL Diagnostics | 361550 | Store in safe and dry place |
| Microcentrifuge tubes | Eppendorf | 33511 |
References
- Friedl, P., Wolf, K. Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms. Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).
- Moncharmont, C., et al. Radiation-enhanced cell migration/invasion process: A review. Crit Rev Oncol Hematol. , (2014).
- Burdsal, C. A., Damsky, C. H., Pedersen, R. A. The role of E-cadherin and integrins in mesoderm differentiation and migration at the mammalian primitive streak. Development. 118 (3), 829-844 (1993).
- Chen, C., Zimmermann, M., Tinhofer, I., Kaufmann, A. M., Albers, A. E. Epithelial-to-mesenchymal transition and cancer stem(-like) cells in head and neck squamous cell carcinoma. Cancer Lett. 338 (1), 47-56 (2013).
- Nelson, A. R., Fingleton, B., Rothenberg, M. L., Matrisian, L. M. Matrix metalloproteinases: biologic activity and clinical implications. J Clin Oncol. 18 (5), 1135-1149 (2000).
- Smith, A., Teknos, T. N., Pan, Q. Epithelial to mesenchymal transition in head and neck squamous cell carcinoma. Oral Oncol. 49 (4), 287-292 (2013).
- Chen, H. -. C. Boyden chamber assay. Meth Mol Biol. 294, 15-22 (2005).
- Rodriguez, L. G., Wu, X., Guan, J. -. L. Wound-healing assay. Meth Mol Biol. 294, 23-29 (2005).
- Piaton, E., et al. Technical recommendations and best practice guidelines for May-Grünwald-Giemsa staining: literature review and insights from the quality assurance. Ann Path. 35 (4), 294-305 (2015).
- Moncharmont, C., et al. Targeting a cornerstone of radiation resistance: cancer stem cell. Cancer lett. 322 (2), 139-147 (2012).
- Moncharmont, C., et al. Carbon ion irradiation withstands cancer stem cells’ migration/invasion process in Head and Neck Squamous Cell Carcinoma (HNSCC). Oncotarget. 7 (30), 47738-47749 (2016).
- Gilormini, M., Wozny, A. -. S., Battiston-Montagne, P., Ardail, D., Alphonse, G., Rodriguez-Lafrasse, C. Isolation and Characterization of a Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Subpopulation Having Stem Cell Characteristics. J Vis Exp: JoVE. (111), (2016).
