נהלי ייצור יון לנתניד קשוב מאוד דיסקות chelating הרכבות polymolecular מוצגים. התגובה מגנטי מוכתב על ידי גודל ההרכבה, אשר מותאם על ידי ההבלטה דרך ממברנות nanopore. של ההרכבות alignability מגנטיות, טמפרטורה-induced שינויים מבניים המפוקחים על-ידי שבירה כפולה מדידות, טכניקה ללא תשלום תהודה מגנטית גרעינית, פיזור ניוטרון זווית קטנה.
Bicelles הם מכלולים polymolecular דמוי דיסק tunable נוצר מגוון רחב של תערובות השומנים. מגוון יישומים ממחקרים קרום חלבונים מבניים על ידי תהודה מגנטית גרעינית (NMR) להתפתחויות nanotechnological כולל היווצרות של ג’לים האקטיביות דיסקות להחלפה שטיחות. לטכנולוגיות אלו דורשים שליטה גבוהה של גודל ההרכבה, תגובה מגנטית התנגדות תרמית. תערובות של 1, 2-dimyristoyl –sn– glycero-3-phosphocholine (DMPC) ויון לנתניד שלה (בעוד3 +) chelating פוספוליפיד המספר המשלים, 1, 2-dimyristoyl –sn(triaminepentaacetate – glycero-3-פוספו-ethanolamine-דיאטילן DMPE-DTPA), להרכיב לתוך הרכבות קשוב מאוד מגנטית כגון DMPC/DMPE-DTPA/בתוך3 + (יחס טוחנת 4:1:1) bicelles. הקדמה של כולסטרול (חול-OH) ונגזרות סטרואידים בתוצאות bilayer בערכת אחר מכלולים מציעים מאפיינים ייחודיים הכימי פיזיקלי. עבור הרכב השומנים נתון, alignability מגנטי הוא יחסי לגודל bicelle. Complexation של Ln3 + תוצאות בתגובות מגנטי חסר תקדים מבחינת סדר הגודל והיישור כיוון. קריסת זאזא תרמו הדיסק-מבני לתוך שלפוחית על חימום ומאתגרות של הממדים של ההרכבות על ידי ההבלטה דרך ממברנה מסננים עם גדלים נקבובית מוגדרים. Bicelles מגנטית alignable נוצרות על ידי קירור עד 5 מעלות צלזיוס, והתוצאה היא מכלול המידות שמגדיר את מבשרי שלפוחית. במסמך זה, הליך ייצור זה מבואר, alignability המגנטי של ההרכבות הוא לכמת על ידי שבירה כפולה המידות תחת שדה מגנטי T 5.5. בהמשך, האות שבירה כפולה, שמקורם bilayer פוספוליפיד, מאפשר מעקב אחרי polymolecular שינויים המתרחשים bilayer. טכניקה פשוטה זו היא משלימה ולניסויים NMR, זה בדרך כלל המועסקים לאפיין bicelles.
Bicelles הם מכלולים כמו דיסק polymolecular המתקבל תערובות השומנים רבים. 1 , 2 , 3 , 4 , 5 הם נמצאים בשימוש נרחב עבור אפיון מבניים ממברנה מולקולות על ידי NMR ספקטרוסקופיה. 6 , 7 . עם זאת, מאמצי שואפים להרחיב בתחום היישומים האפשריים. 5 , 8 , 9 מערכת bicelle הכי נחקרות מורכבת תערובת של 1, 2-dimyristoyl –sn– glycero-3-phosphocholine (DMPC), המהוות את החלק מישוריים של ההרכבה, 1, 2-dihexanoyl –sn– glycero-3-phosphocholine (DHPC) פוספוליפיד המכסים את הקצה. 1 , 2 , 3 מבנה מולקולרי של פוספוליפידים להלחין את bilayer להכתיב את הארכיטקטורה של המבנה שהורכב עצמית polymolecular. 4 , 5 החלפת DHPC עם DMPE-DTPA מייצרת מערכות מאוד דיסקות עדיב וחברותי tunable bicelle. 10 , 11 DMPC/DMPE-DTPA/בתוך3 + (יחס טוחנת 4:1:1) bicelles לקשר עם רבים יותר לנתניד פאראמגנטיים יונים (בעוד3 +) על פני השטח של bilayer, וכתוצאה מכך מענה מגנטי משופרת. זאת ועוד 10 , החלפת מולקולות DHPC מסיסים במים עם DMPE-DTPA/בעוד3 + מאפשרת היווצרות של דילול עמידים bicelles. 11
Alignability מגנטי מכלולים polymolecular מישורי היא מוכתבת על ידי אנרגיה מגנטית הכולל שלהם,
(1)
כאשר B הוא עוצמת שדה מגנטי, מגנטי קבוע, n המספר צבירת ו
חיזקו הרגישות דיאמגנטית מולקולרית של ליפידים להלחין את bilayer. לכן, התגובה של DMPC/DMPE-DTPA/בעוד3 + bicelles לשדות מגנטיים המותאמות לפי גודל שלהם (n מספר צבירה) Δχ חיזקו את הרגישות דיאמגנטית מולקולרית. האחרון ברצון מושגת על ידי שינוי אופי chelated בעוד3 +. 12 , 13 , 14 , 15 החדרת כולסטרול (חול-OH) או נגזרות סטרואידים אחרים ב- bilayer מציעה את האפשרות של כוונון של n מספרים צבירה והן את Δχ המגנטית של ההרכבות. 11 , 16 , 17 , 18 , 19 עבור הרכב השומנים נתון, מכלולים גדולים יותר מכילים יותר שומנים מסוגל לתרום Eמג (גדול צבירה מספר n), וכתוצאה מכך מינים יותר alignable. לדוגמה, בגודל של bicelles DMPC/DHPC, כמקובל נשלטת באמצעות אופטימיזציה של ההלחנה השומנים יחס או סך הריכוז. 20 , 21 , 22 למרות שזה אפשרי ב- DMPC/DMPE-DTPA/בעוד3 + bicelles, וטרנספורמציה התרמו-הפיך מן bicelle אל שלפוחית על חימום מציע להוסיף אפשרויות ולביא. מכונות פירושו כגון הבלטה דרך ממברנה מסננים מאפשרת עיצוב של השלפוחיות המוגלתיות. Bicelles מגנטית alignable נוצרות מחדש לאחר הקירור עד 5 מעלות צלזיוס, מידות שלהם מוכתבים של סימנים מקדימים שלפוחית. 11 שעל זה, אנו נתמקד על הפוטנציאל של תהליכי ייצור מכני עם DMPC/DMPE-DTPA/Tm3 + (יחס טוחנת 4:1:1) או DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm3 + (יחס טוחנת 16:4:5:5) כמו מערכות יחוס. התהליך עובד באנלוגיה בעת עבודה עם אחרים בתוך3 + 3 +Tm. המגוון הרחב של האפשרויות המוצעות על ידי טכניקות אלה מודגש באיור 1, בהרחבה במקום אחר. 23
איור 1: סקירה סכמטי של ההליכים פבריקציה נוספת אפשרית. למדה מגנטית alignable Ln3 + chelating polymolecular ההרכבות מורכבים או DMPC/DMPE-DTPA/Tm3 + (יחס טוחנת 4:1:1) או DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm3 + (יחס טוחנת 16:4:5:5). הסרט השומנים יבש הוא להתייבש באמצעות בופר פוספט 50 מ מ על ערך ה-pH של 7.4, ריכוז השומנים הכולל 15 מ מ. הידרציה יעיל של הסרט השומנים דורש גם להקפיא שהביקושים מחזורים (FT) או חימום וקירור מחזורים (H & C). H & מחזורי C יש צורך להתחדש דגימות לאחר אחרונה ההקפאה מפשיר שלב או להתחדש דגימות המשיך קפוא על פני תקופה ממושכת של זמן אם הם רוצים לשמש ללא נוסף ההבלטה. שלבים אלה נידונות בהרחבה על-ידי Isabettini et al. 23 polymolecular alignable מקסימאלית הרכבות מושגות, אספקת ארכיטקטורות הרכבה שונים בהתבסס על הרכב השומנים. Alignability מגנטי וגודל bicelle הוא tunable על ידי ההבלטה (Ext) דרך מסננים הממברנה nanopore. גורמים Af היישור הציג חושבו דפוסי הפיזור (SAN) נויטרון 2D זווית קטנה של מדגם3 + (יחס טוחנת 16:4:5:5) DMPC/חול-הו/DMPE-DTPA/Tm extruded דרך 800, 400, 200, או 100 ננומטר נקבוביות. SANS המידות הם אמצעי משלים לכמת יישור bicelle זה לא יכוסה באופן מפורט במסמך זה. 11 , 16 Af נע מ-1 (פיזור ניוטרון מקבילים או יישור אנכי bicelles ביחס לכיוון השדה המגנטי) כ- 0 עבור פיזור isotropic.אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
המבנה של bicelles נחקרה בהרחבה על-ידי מגוון רחב של שיטות אפיון. 13 יש כבר לכמת את היישור של bicelles נחשף לשדה מגנטי באמצעות NMR ספקטרוסקופיה או זווית קטנה ניוטרון פיזור (SAN) ניסויים. 5 , 10 , 11 , 12 , 13 , 16 , 17 , 18 , 19 , 24 , 25 . אולם, המשמרת מרחיבה פסגות NMR, המתרחשת בנוכחות בעוד3 + הם מגבלות רציניות לשיטה. 15 , 26 , 27 , 28 SANS למרות ניסויים אינם סובלים מ מגבלה זו, אלטרנטיבית, טכניקות נגיש יותר רצוי על כימות שגרתית של יישור דיסקות המושרה מכלולים בפתרון. שבירה כפולה המידות הן חלופה מעשית ופשוטה יחסית. באנלוגיה כדי הניסויים NMR, מדידות שבירה כפולה לחשוף מידע חשוב על השומנים rearrangements, השומנים שלבים המתרחשים bilayer. יתר על כן, שינויי צורה גיאומטריים המתרחשים מכלול polymolecular עם שינוי תנאים סביבתיים כגון טמפרטורה מנוטרים. 11 , 12 , 13 , 16 Δn′ מגנטית המושרה שבירה כפולה שימש ללמוד סוגים שונים של מערכות פוספוליפיד. 13 , 29 , 30 מדידות שבירה כפולה המבוססת על טכניקת אפנון פאזה של השדה המגנטי היא שיטה מעשית כדי לזהות את הכיוון של bicelles. 12 , 16 , 18 , 29 , 31 , 32 האפשרות של חוקרים bicelles עם שבירה כפולה בשדות מגנטיים גבוהה עד 35 T הודגם גם על ידי מ Liebi. et al. 13
כאשר אור מקוטב מזין של חומר אנאיזוטרופי, זה להיות נשברת בגל (אקסטרא). 11 הגלים שני יש במהירויות שונות, יוזזו בשלב על ידי אלפא פיגור. מידת פיגור אלפא נמדדים וישנה להמיר אות שבירה כפולה לכמת את מידת חיזקו באמצעות חומרים
(2)
איפה λ הוא אורך הגל של הלייזר ו- d הוא העובי של המדגם. פוספוליפידים הם אניסוטרופי אופטים, ציר אופטי שלהם עולה בקנה אחד עם צירים מולקולריות ארוכות שלהם, במקביל הזנב של פחמימנים. 11 , 12 . אין פיגור נמדד אם פוספוליפידים הם חוקיים באופן אקראי בפתרון. פיגור נמדד כאשר פוספוליפידים המיושרים במקביל אחד לשני. שבירה כפולה דיסקות המושרה יכול לקבל סימן חיובי או שלילי בהתאם הכיוון של המולקולות בתוך השדה המגנטי; ראה איור 2. פוספוליפידים המיושרים במקביל ציר ה-x תגרום שלילי
, ואילו התוצאה האלה מסודרים לאורך ציר z חיובי
. אין שבירה כפולה הוא ציין מתי לציר האופטי עולה בקנה אחד עם הכיוון של הפצת אור כפי פוספוליפיד יישור במקביל ציר ה-y.
איור 2: יישור של פוספוליפידים, המתאימים סימן שבירה כפולה דיסקות המושרה . סימן נמדד
תלוי בכיוון פוספוליפיד בשדה מגנטי. קווים מקווקווים מציינים את הציר האופטי של המולקולה. האור הוא מקוטב-45° והפצת בכיוון y. השדה המגנטי B נמצאת בכיוון z. איור זה השתנה מ מ Liebi. 11 אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של הדמות הזאת.
במקרה ראש צמיגי איזוטרופיות של bicelles, כיוון המושרה על ידי הסידור של פוספוליפידים ב- bilayer תהיה אבודה, מכוונת את אלפא פיגור. Bicelles עליך ליישר גם על מנת להתמצא פוספוליפידים שטיחות פעיל ב- bilayers שלהם, גורם של אלפא פיגור של אור מקוטב. כתוצאה מכך, שבירה כפולה הוא כלי רגיש לכמת את alignability מגנטי מכלולים polymolecular. Bicelles יישור מאונך השדה המגנטי תניב דבר חיובי , בעוד אלה המיושרים במקביל תניב תוצאה שלילית
. השלט תלויה היישור של ההתקנה, ייתכן ניתן לבדוק באמצעות דגימת.
דין וחשבון מפורט איך שבירה כפולה המידות שימשו בשילוב עם SANS ניסויים כדי להעריך את שיטות ליצירת קשוב מאוד דיסקות Ln3 + chelating פוספוליפידים הרכבות נמצא Isabettini. et al. 23 הפרוטוקולים פבריקציה נוספת המוצעת חלים גם עבור הרכבות מורכב יותר DPPC ו- DPPE-DTPA פוספוליפידים או עבור אלה המכיל…
The authors have nothing to disclose.
המחברים להכיר קרן המדע הלאומית השוויצרית למימון SMhardBi (פרויקט מספר 200021_150088/1). SANS הניסויים בוצעו spallation שוויצרי ניוטרון במקור SINQ, פול Scherrer Instute, Villigen, שוויץ. המחברים מודים בחום ד ר יואכים Kohlbrecher על הדרכתו עם הניסויים SANS. הגדרת מדידה שבירה כפולה תחת שדות מגנטיים גבוה קיבל השראה מן הכיוונון הקיים במעבדה גבוהה-שדה מגנטי HFML, ניימכן, הולנד. אנו מודים ברונו Pfister על עזרתו בפיתוח האלקטרוניקה של ההתקנה שבירה כפולה, יאן Corsano, דניאל Kiechl לבניית מסגרות המתיר יישור בסדר ולא נתיישב לייזר ו ד ר קולר ברנהרד לתמיכה טכנית שוטפת.
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phosphocholine (DMPC) | Avanti Polar Lipids | 850345P | >99% |
1,2-dimyristoyl-sn-glycero-3-phospho-ethanolamine-diethylene triaminepentaacetate acid hexammonium salt (DMPE-DTPA) | Avanti Polar Lipids | 790535P | >99% |
Thulium(III) chloride | Sigma-Aldrich | 439649 | anhydrous, powder, 99.9% trace metals basis |
Dysprosium(III) chloride | Sigma-Aldrich | 325546 | anhydrous, powder, 99.9% trace metals basis |
Ytterbium(III) chloride | Sigma-Aldrich | 439614 | anhydrous, powder, 99.9% trace metals basis |
Chloroform | Sigma-Aldrich | 319988 | contains ethanol as stabilizer, ACS reagent, ≥99.8% |
Methanol | Sigma-Aldrich | 34860 | ≥99.9% |
Cholesterol | Amresco | 433 | Ultra pure grade |
D2O | ARMAR chemicals | 1410 | 99.8 atom % D |
Ultrapure water | Millipore | Synergy pak2 (SYPK0SIX2), Millipack GP (MPGP02001) | |
electronic pH meter | Metrohm | 17440010 | |
Whatmann Nuclepore 25 mm 100nm membrane filter | VWR | 515-2028 | |
Whatmann Nuclepore 25 mm 200nm membrane filter | VWR | 515-2029 | |
Whatmann Nuclepore 25 mm 400nm membrane filter | VWR | 515-2030 | |
Whatmann Nuclepore 25 mm 800nm membrane filter | VWR | 515-2032 | |
Whatmann Filter paper | VWR | 230600 | |
25 ml round bottom flask | VWR | 201-1352 | 14/23 NS |
3 ml glass snap-cup | VWR | 548-0554 | ND18, 18x30mm |
2.5 ml glass syringe | Hamilton | ||
Sodium dihydrogen phosphate dihydrate | Merk | 1.06342 | Salt used to make phosphate buffer |
di-Sodium hydrogen phosphate | Merk | 1.06586 | Salt used to make phosphate buffer |
Liquid Nitrogen | Carbagas | – | |
Pressurized Nitrogen gas | Carbagas | – | 200 bar bottle |
Lipid Extruder 10 ml | Lipex | – | Fully equipped with thermobarrel |
High-pressure PVC tube | GR NETUM | – | must resist more than 4 MPa |
Serto adaptors | Sertot | – | |
Nitrile gloves | VWR | – | |
2 ml glass pipettes | VWR | 612-1702 | 230 mm long |
Diode Laser | Newport | LPM635-25C | |
DSP Dual Phase Lock-in Amplifier | SRS | SR830 | |
Photodiode Detector | Silonex Inc. | SLSD-71N5 | 5mm2, Silicon, photo-conductive |
5.5 T Cryogenic Magnetic | Cryogenic/Oerlikon AG | – | 12 bar He-cooled. RW4000/6000 compressor, RGD 5/100 TA cryo-head |
Second order low pass filter | home-built | – | Linear power supply 24V DC, second order, Sallen Key, cut-off frequency 360 Hz, +/- 12V, max 10 mA |
Photoelastic modulator | Hinds instruments | PEM-90 | |
Glan-Thompson Calcite Polarizer | Newport | 10GT04 | 25.4mm diameter |
Quartz sample cuvette | Hellma | 165-10-40 | temperature controlled cell, 0.8 ml, 10mm path length |
Temperature probe | Thermocontrol | – | Type K, 0.5mm diameter, Thermocoax |
Non-polarizing mirrors | Newport | 50326-1002 | 25.4mm |
RS 232 cables | National Instruments | 189284-02 | For Connecting to the RS-232 Port on the front of Compact FieldPoint Controllers |
BNC 50 Ω cable and connectors | National Instruments | 763389-01 | |
cFP-AI-110 | National Instruments | 777318-110 | 8-Channel Analog Voltage and Current Input Module for Compact FieldPoint |
cFP-CB-1 | National Instruments | 778618-01 | Integrated Connector Block for Wiring to Compact FieldPoint I/O |
cFP-CB-3 | National Instruments | 778618-03 | Integrated Isothermal Connector Block for Wiring Thermocouples to the cFP-TC-120 Module |
cFP-TC-120 | National Instruments | 777318-120 | 8-Channel Thermocouple Input Module for Compact FieldPoint |
cFP-1804 | National Instruments | 779490-01 | Ethernet/Serial Interface for NI Compact FieldPoint |
LabView 2010 | National Instruments | – | |
Industrial power supply | Traco Power | TCL 060-124 | 100-240V AC |
Waterbath | Julabo | FP40-HE | refrigerated/Heating Circulator |