Combinant les dosages quantitatifs-la prise alimentaire et activation par la force des neurones pour étudier l’appétit chez la drosophile

Résumé

Dosages quantitatifs-la prise alimentaire avec de la nourriture teint fournissent un robuste et haut débit moyens d’évaluer la motivation alimentation. Combinant le dosage de la consommation de nourriture avec thermogenetic et optogenetic écrans est une approche puissante pour enquêter sur les circuits neurones sous-tendant l’appétit chez les adultes Drosophila melanogaster.

Résumé

La consommation d’aliments est sous le contrôle étroit du cerveau, qui intègre l’état physiologique, la saveur et le contenu nutritionnel des aliments et des commandes de questions pour démarrer ou arrêter l’alimentation. Décrypter les mécanismes sous-jacents à la prise de décision en temps opportun et modérée l’alimentation comporte des implications majeures dans notre compréhension des troubles physiologiques et psychologiques liés au contrôle de l’alimentation. Méthodes quantitatives, simples et robustes sont nécessaires pour mesurer l’ingestion d’aliments des animaux après la manipulation expérimentale, tels que force augmentant les activités de certains neurones de la cible. Ici, nous avons introduit des tests alimentaires étiquetage-teintée pour faciliter l’étude neurogénétique de contrôle d’alimentation chez la drosophile adulte. Nous examinons les tests alimentaires et ensuite décrire nos méthodes étape par étape de l’installation d’analyse qui combine thermogenetic et optogenetic manipulation des neurones contrôlant l’alimentation motivation avec test d’admission marqués au colorant alimentaire. Nous discuterons les avantages et les limites de nos méthodes, par rapport aux autres tests alimentaires, pour aider les lecteurs à choisir un test approprié.

Introduction

Quantifier la quantité de nourriture ingérée est importante pour évaluer les aspects multiples de l’alimentation des contrôles par le cerveau pour répondre aux besoins internes (tels que les États de la faim) et facteurs externes (tels que la qualité des aliments et la palatabilité)^{1, 2 , 3 , 4 , 5 , 6 , 7 , 8 , 9}. ces dernières années, les efforts de déchiffrage les su....

Protocole

1. préparation de la chambre d’alimentation

Remarque : La chambre d’alimentation pour marquage colorant alimentaire test se compose de deux parties : le conteneur extérieur (comme un couvercle) et l’intérieur conteneur (comme source de nourriture).

1. Modifier le conteneur à l’extérieur d’un flacon de verre pour la culture des Drosophila (d’un diamètre intérieur de 31,8 mm) et une hauteur de 80 mm (Figure 1 a, 1C). Couverture du fond du récipient avec une couche d’agarose à 1 % (5 mL) pour garder la configuration alimentation correctement humidifiée et servir un....

Résultats

Écran thermogenetic.

Appétit anormalement élevé provoque la prise alimentaire élevée, indépendamment des besoins physiologiques. Nous avons utilisé ce régime à un haut débit de conception comportementale écran pour obtenir des handles génétiques des neurones liés à la faim et rassasiés des États (Figure 1). L’écran a donné Taotie-Gal4²⁴. Lorsque les neurones Taot.......

Discussion

Ce rapport met l’accent sur le processus technique de tests alimentation colorant-étiquetage de la consommation alimentaire dans le contexte de thermogenetic et optogenetic activation pour manipuler des neurones contrôlant l’alimentation. Ce protocole simple et fiable vous aidera à élucider la fonction des neurones de candidat dans l’alimentation de contrôle, pour mesurer les préférences alimentaires des mouches et d’identifier de nouveaux joueurs dans l’alimentation des circuits de contrôle via écrans génétique axée sur.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
UAS-CsChrimson	Bloomintoon	55135
UAS-dTrpA1	Bloomintoon	26263
TDC1-GAL4  ;	Bloomintoon	9312
TDC2-GAL4	Bloomintoon	9313
sNPF-GAL4			Fourni par Z. Zhao
NPF-GAL4			Fourni par Y. Rao
TH-GAL4			Fourni par Y. Rao
5-HT-GAL4			Fourni par Y. Rao
AKH-GAL4			Fourni par Y. Rao
dip2-GAL4			Fourni par Y. Rao
Taotie-GAL4			Fourni par J. Carlson
Agarose	Biowest	G-10
Saccharose	Sigma	S7903
Sel disodique d’érioglaucine	Sigma	861146
tout-trans-rétinal  ;	Sigma  ;	R2500	stocké dans l’obscurité
Triton X-100	Amresco	9002-93-01
Nourriture pour		mouches 1 L la nourriture contient : 77,7 g de semoule de maïs, 32,19 g de levure, 5 g d’agar, 0,726 g de CaCl2, 31,62 g de saccharose, 63,2 g de glucose, 2 g de sorbate de potassium, pH  ;   ;   ;
; 1x tampon PBS  ;		1 L 1X PBS contient : 8 g de Nacl, 0,2 g de Kcl, 1,44 g de Na2HPO4, 0,24 g de KH2PO4, pH 7,4
Tampon		1X PBS avec 1 % de Triton X-100
; Broyage	Shang Hai Jing Xin	Tissuelyser-24
Incubateur	Ning Bo Jiang Nan	HWS-80
Agitateur magnétique avec plaque chauffante	Chang Zhou Bo Yuan	CJJ 78-1
Spectromètre	Thorlabs	CCS200/M
Spectrophotomètre à microplaques	Thermo Scientific  ;	Multiskan GO Type : 1510, REF 51119200
Stéréomicroscope à fluorescence  ;	Leica	; M205FA
Stéréomicroscope	Leica  ;	S6E
Récipient extérieur	Jiang Su Hai Men	flacon en verre d’un diamètre de 31,8 mm et d’une hauteur de 80 mm (dimension intérieure)
Récipient intérieur  ;	Usine de machines Beijing Yi Ran	plat en plastique d’un diamètre de 13,6 mm et d’une hauteur de 7,5 mm (dimension intérieure)
1,5 mL tubes Eppendorf	Hai Men Ning Mong
; Plaque à 96 puits	Corning Incorporated	; Costar 3599
LED	Xin Xing Yuan Guangdian	607 nm, 3W  ;	https://item.taobao.com/item.htm?id=20158878058

PBST