Nous présentons un protocole visant à enquêter sur les biomarqueurs d’expression ARNm de cellules dérivées de périoste (PDC) induites par la vitamine C (vitamine C) et 1, 25-dihydroxy vitamine D [1,25-(OH)2D3]. En outre, nous évaluons la capacité de PDC à se différencier en ostéocytes, les chondrocytes et les adipocytes.
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Article de méthode
Isolement des cellules souches mésenchymateuses du périoste alvéolaire humaine et les effets de la vitamine D sur activité ostéogène du périoste dérivées des cellules
Dans cet article
Résumé
Résumé
Cellules souches mésenchymateuses (CSM) sont présentes dans divers tissus et peuvent être différenciés dans nombreux types de cellules, y compris les ostéoblastes. Parmi les sources dentaires de MSCs, le périoste est un tissu facile d’accès, ce qui a été identifié pour contenir les MSCs dans la couche de cambium. Toutefois, cette source n'a pas encore été largement étudiée.
Vitamine D3 et 1,25-(OH)2D3 ont été démontrés pour stimuler la différenciation in vitro de MSCs en ostéoblastes. En outre, vitamine C facilite la croissance cellulaire osseuse et de la formation de collagène. Cependant, aucune étude n’a encore étudié les effets de la vitamine D3 et la vitamine C sur MSCs.
Nous présentons ici une méthode permettant d’isoler les MSCs du périoste alvéolaire humaine et examiner l’hypothèse que 1,25-(OH)2D3 pourraient exercer un effet ostéo-inducteurs sur ces cellules. Nous avons également enquêter sur la présence de MSCs dans le périoste alvéolaire humaine et évaluer la prolifération et l’adhérence de cellules souches. Pour évaluer la capacité de la vitamine C (sous forme de contrôle) et de diverses concentrations de 1,25-(OH)2D3 (10−10, 10−9, 10−8et 10−7 M) pour influer sur les biomarqueurs d’ARNm clés dans MSCs ARNm isolés de la phosphatase alcaline (ALP), OS sialoprotéine osseuse (BSP), liaison de base le facteur alpha-1 (CBFA1), collagène-1 et ostéocalcine (OCN) sont mesurés à l’aide de la PCR en temps réel (RT-PCR).
Introduction
Bien que les nombreuses techniques pertinents ont été développés ces dernières années, os des restes de reconstruction limité par des contraintes multiples et estimer que l’étendue de la nécessaire reconstruction est souvent impossible. Augmentation des tissus-dur est requis pour atteindre les objectifs esthétiques et fonctionnels en plus un taux de réussite à long terme favorable. Méthodes couramment utilisées pour ces procédures comprennent une greffe osseuse autogène et allogène, xénogreffe et alloplastique une greffe osseuse. Parmi les différents types de greffe osseuse, greffe osseuse autogène est considérés comme les plus efficaces. Cependant, morbidité site don....
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Protocole
Le protocole de l’étude a été approuvé par le Conseil institutionnel d’examen de Chang Gung Memorial Hospital. Tous les participants eu consentement éclairé.
1. préparation du tissu
- Récolter les tissus périostique de patients au cours de la chirurgie dentaire (Figure 1). Après réflexion de Rabat sous anesthésie locale, prenez un morceau de tissu du périoste de l’os alvéolaire, à l’aide d’un séparateur périostique31.
- Après la récolte, rangez les tranches de tissus périostique d’environ 5 mm x 2 mm dans de Dulbecco tamponné phosphate salin (SPD) avec 300 U/mL de pénicil....
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Résultats
Pour tous les dosages quantitatifs, les données sont présentées comme moyenne ± écart-type (SD). Toutes les analyses statistiques ont été réalisées à l’aide de Student t-test. Au total, 34 échantillons ont été obtenus avec un âge moyen de participants de 48,1 ± 12,3 y. onze de ces échantillons provenaient de patients de sexe masculin et 23 de patientes. Vingt-huit échantillons ont été prélevés les régions molaires et 6 par les régions antérieures ; 26 ont été extraites de la maxi.......
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Discussion
Une modalité thérapeutique développée récemment, à savoir les tissus techniques entraînant MSCs, offre de nombreux avantages. MSCs, qui sont présents dans plusieurs types de tissus, sont des cellules multipotentes qui peuvent se différencier en divers tissus mésodermiques fonctionnelle des cellules37 et autres cellules comme les ostéoblastes.
Le périoste sert une niche de cellules progénitrices et comme un approvisionnement riche vascularisation de l’OS, il enveloppe
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Déclarations de divulgation
Les auteurs n’ont rien à divulguer.
Remerciements
L’Institutional Review Board a approuvé le protocole d’étude pour clinique recherche de Chang Gung Memorial Hospital (IRB99-1828B, 100-3019C, 99-3814B, C 102-1619, 4728B-101 et 103-4223C). Cette étude a été financée par Chang Gung Memorial Hospital (CMRPG392071, CMRPG3A1141, CMRPG3A1142 et NMRPG3C0151). Ce manuscrit a été édité par Wallace édition académique.
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Matériaux
| Nom | Entreprise | Numéro de catalogue | Commentaires |
|---|---|---|---|
| 0,25 % trypsine-EDTA | Gibco | 25200-056 | |
| 2-phospho-L-ascorbique acide trisodique | Sigma | 49752 | |
| Boîtes de culture de 35 mm | Corning | 430165 | |
| 3-isobutyl-1-méthylxanthine | Sigma | I5879 | |
| Plaque à 6 puits | Corning | 3516 | |
| Phosphatase alcaline | ABI | Hs01029144_m1 | |
| Alkaline Phosphatase Activity Colorimetric Assay Kit | BioVision | K412-500 | |
| la myéloblastose aviaire transcriptase inverse | Roche | 10109118001 | |
| CD146 | BD | 561013 | |
| CD19 | BD | 560994 | |
| CD34 | BD | 560942 | |
| CD44 | BD | 561858 | |
| CD45 | BD | 561088 | |
| CD73 | BD | 561014 | |
| CD90 | BD | 561974 | |
| Cell banker1 | ZEAOAQ | 11888 | |
| facteur de liaison du noyau alpha-1 | ABI | Hs00231692_m1 | |
| dexaméthasone | Sigma | D4902 | |
| DPBS | Gibco | 14190250 | |
| FBS | Gibco | 26140-079 | |
| GAPDH | ABI | Hs99999905_m1 | |
| HLA-DR | BD | ||
| indométacine | Sigma | I7378 | |
| insuline | sigma | 91077C | |
| insuline&ndash ; transferrin&ndash ; selenium-A | Sigma | I1884 | |
| MicroAmp Fast 96 well reaction plate(0.1ml) | Life | 4346907 | |
| MicroAmp film adhésif optique | Life | 4311971 | |
| Minimum Essential Medium 1X Alpha Modification | HyClone | SH30265.02 | |
| Pénicilline/Streptomycine | Gibco | 15140-122 | |
| Tampon de perméabilisation | eBioscience | 00-8333-56 | |
| Pyruvate de sodium | Gibco | 11360070 | |
| STRO-1 | BioLegend | 340103 | |
| SYBER Green PCR Master Mix | AppliedBiosystems | 4309155 | |
| TaqMan Master Mix | transformant | 4304437 | |
| vie-&beta ; | Sigma | T7039° ; | |
| Réactif de trizol (pour l’isolement de l’ARN) | Life | 15596018 | |
| &beta ;-glycérophosphate | Sigma | G9422 | |
| collagen-1 | Invitrogen | forward primer 5' CCTCAAGGGCTCCAACGAG-3 reverse primer 5'-TCAATCACTGTCTTGCCCCA-3'OCN | |
| Invitrogen | amorce avant 5'-GTGCAGCCTTTGTGTCCAAG-3' amorce inversée 5'-GTCAGCCAACTCGTCACAGT-3'BSP | ||
| Invitrogen | amorce avant 5' AAAGTGAGAACGGGGAACCT-3' amorce inversée 5'-GATGCAAAGCCAGAATGGAT-3'Amorces | ||
| commerciales CBFA1 |
Références
- Kao, R. T., Murakami, S., Beirne, O. R. The Use of Biologic Mediators and Tissue Engineering in Dentistry. Periodontol. 50, 127-153 (2000).
- Rosenbaum, A. J., Grande, D. A., Dines, J. S. The Use of Mesenchymal Stem Cells in Tissue Engineering: A Global Assessment. Or....
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Réimpressions et autorisations
