Um modelo de peito fechado para induzir a constrição da aorta transversa em ratos
Summary
Aqui, apresentamos um protocolo de constrição transversal da aorta (TAC) através de uma toracotomia lateral. Esta técnica é um procedimento cirúrgico minimamente invasivo, fechado no peito, com o objetivo de simular a sobrecarga de pressão e de insuficiência cardíaca em ratos utilizando as configurações padrão de laboratório de TAC.
Abstract
Pesquisa sobre a hipertrofia cardíaca e insuficiência cardíaca baseia-se frequentemente a modelos de rato sobrecarga de pressão induzidos pela TAC. O procedimento padrão é a realização de uma toracotomia parcial para visualizar o arco aórtico transverso. No entanto, o trauma cirúrgico causado pela toracotomia em modelos de peito aberto altera a fisiologia respiratória como as costelas são dissecadas e deixou solteira após fechamento do peito. Para evitar isso, estabelecemos uma abordagem minimamente invasiva, fechado no peito através de toracotomia lateral. Aqui nos aproximamos da aorta através do espaço intercostal 2nd sem entrar nas cavidades torácica, deixando o mouse com uma lesão menos traumática para recuperar. Realizamos esta operação usando as configurações padrão de laboratório para procedimentos de peito aberto TAC com as taxas de sobrevivência igual. Além de manter os padrões de respiração fisiológica devido a abordagem de peito fechado, os ratos parecem beneficiar, mostrando recuperação rápida, como a técnica menos invasiva aparece para facilitar um processo de cura rápido e reduzir a resposta imune após trauma.
Introduction
Modelos de mouse são frequentemente usados para imitar doenças humanas1. Constrição da aorta transversa (TAC) é usada para induzir sobrecarga de pressão e hipertrofia de ventrículo esquerdo2. O modelo de TAC de peito aberto em camundongos foi validado por Rockman et al 3 e o procedimento cirúrgico é descrito em detalhes por DeAlmeida et al 4. faixas da aorta transversa é mais favorável em comparação com a constrição da aorta abdominal, porque uma parcela maior da circulação pode compensar os efeitos negativos deste último procedimento2.
A borda da aorta transversa leva a um aumento da pressão arterial na aorta ascendente e artéria Braquiocefálica mas deixa suficiente perfusão dos órgãos através dos vasos distais (ou seja, a artéria carótida comum esquerda, a subclávia esquerda artéria e aorta descendente). Isto leva a uma aumentada pós-carga cardíaca e um estresse de parede cardíaca elevada. O estresse de parede posteriormente diminui devido ao espessamento de fibra5. A alteração hemodinâmica cardíaca crônica resulta em alostática e dilatação do ventrículo esquerdo. Desta forma o TAC cria um modelo reproduzível de hipertrofia cardíaca levando a insuficiência cardíaca.
O procedimento padrão para TAC como descrito por DeAlmeide et al . 4 aproxima-se da aorta através de uma toracotomia parcial superior através de dissecação de costelas ou do esterno e entrar do mediastino, bem como a cavidade pleural. Isto permite uma boa visão da aorta e seus ramos colaterais. Infelizmente, as costelas dissecadas não podem ser recolocadas, o que deixa-los flutuar livremente e, assim, alterar a dinâmica da respiração.
Nós, portanto, estabelecida uma abordagem minimamente invasiva de peito fechado para o arco aórtico, usando uma abordagem cirúrgica lateral através do espaço intercostal 2nd . A maior vantagem deste modelo é a capacidade de executar o TAC sem mesmo corte pelas costelas. O trauma cirúrgico é limitado para a incisão da pele e a dissecação dos músculos intercostais. Este procedimento minimiza o trauma em si e ajuda a manter a estabilidade adequada no peito.
Aqui descrevemos um procedimento passo a passo detalhado para realizar cirurgia de TAC em camundongos sem executar o total ou a toracotomia superior. Doppler de alta frequência foi usado para garantir o sucesso do TAC como descrito anteriormente, 6,7.
Protocol
Representative Results
Discussion
O início rápido da hipertensão devido TAC difere clinicamente relevante hipertrofia causada por estenose aórtica ou hipertensão. No entanto, o uso de modelos animais pequenos para induzir insuficiência cardíaca tem muitas vantagens e é, portanto, escolhido por muitos investigadores11. Este modelo de peito fechado melhora os modelos já existentes da técnica cirúrgica para induzir a constrição da aorta transversa em ratos4.
O passo mai…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Agradecemos Stilla Frede e Susanne Schulz por sua assistência técnica. Este estudo não recebeu nenhum financiamento.
Materials
| Pressure-volume catheter | Millar Instruments, USA | SPR-839 | |
| Mouse ventilator | Harvard Apparatus GmbH, Germany | Minivent – TYPE 845 | |
| Mouse ventilator | Harvard Apparatus GmbH, Germany | Y-connection with intubation cannula OD 1.2mm 73-2844 | |
| Vaporizer | Dräger Medical AG&CO.KG, Germany | 19.3 Isofluran-Vaporizer (a newer version is available under catalog number D-877-2010) | |
| Microscope | Leica Microsystems, Germany | MZ 7.5 | |
| Light source | Schott AG, Germany | KL 1500 LCD | |
| 6-0 Prolene | Ethicon, USA | Polypropylene suture BV-1 9.3 mm 3/8c | suture for surgery |
| Seraflex | Serag Wiessner, Germany | USP 5/0 schwarz; IC108000 | suture for constriction |
| Homoeothermic Controlled Operating Tables | Harvard Apparatus GmbH, Germany | Typ 872/3 HT with tripod stand and homoeothermic controller Type 874; 73-4233 | |
| Flexible Rectal Probe | Harvard Apparatus GmbH, Germany | 1.6 mm OD; 55-7021 | |
| Doppler Signal Visualisation Instrument | Indus Instruments, USA | Doppler Signal Processing Workstation (DSWP) with 20MHz Pulsed Doppler Module | |
| Doppler Probe | Indus Instruments, USA | 20MHz Tubing-mounted Probe |
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