성인 zebrafish (Danio rerio)에서 독 소 루비 유발 심근 모델을 생성 하는 메서드는 여기에 설명 되어 있습니다. 복 주입의 2 개의 다른 방법을 제시 하 고 다른 실험적인 그룹 사이 변이 줄이기 위해 조건을 설명.
유전자 액세스할 수 성인 제 브라 (Danio rerio) 점점 척추 모델 심근과 같은 인간의 질병을 이해 하기 위한를 사용 했다. 편의 및 높은 처리량 유전자 조작에 순종 획득된 심근 모델의 세대 성인 zebrafish, 독 소 루비 유도 심장 근육 병 증 (DIC) 모델 등은 문을 열고 새로운 연구도로에 앞으로 유전자 검사를 통해 심근 한정자를 발견 포함 하 여. 다른 배아 zebrafish DIC 모델, 초기 급성 및 만성 단계 후 심근의 무대-종속 신호 메커니즘 및 치료 전략의 연구를 활성화 성인 zebrafish DIC 모델에서 확인할 수 있습니다. 그러나, 경험 있는 수 사관의 손 에서도 현재 모델 변수 결과 얻을 수 있습니다. DIC 모델의 미래 구현을 촉진 하기 위하여 성인 zebrafish이 DIC 모델을 생성 하 고 복 (IP) 주입의 두 가지 대체 방법을 설명 하는 방법에 자세한 프로토콜을 선물이. 우리는 더 신뢰할 수 있는 결과 얻을 결과 적절 하 게 해석 하는 방법에 제안을 제공 하는 유사에 옵션을 논의.
독 소 루비 (DOX), Adriamycin, 라는 1960 년대1,2이후는 항 종양 약 약물으로 개발 되었습니다. 그것은 지금 아직도 적극적으로 광범위 한 종양에 대 한 중요 한 화학요법 약물으로 사용. 그러나, DOX의 임상 응용의 복용량 의존 독성에 의해 방해 되었다, 특히 cardiotoxicity asymptomatic electrocardiographic 변경에서 pericarditis에 배열 하는 가변 증상이 특징 및 decompensated 심장 근육 병 증 1 , 2. 현재까지, 적어도 3 개의 주요 가설 일어났습니다 DIC, 활성화 된 반응성 산소 종 (선생님)1,3,,45, topoisomerase II-β (의 억제를 포함 하 여 설명 하 TOP2β)6,7, 그리고 세포내 칼슘의 릴리스1,,89. 또한 DIC10,11,,1213대 중요 위험 요인으로 유전적 제안 증거를 축적. 그러나 이러한 DIC 선천적인 유전자 정체성 관련, 크게 알려지지 않은 남아 있다. Dexrazoxane 유일한 보조 에이전트는 하지만 제한 된 구현14,,1516, DIC, 치료 하는 미국 식품 및 의약품 안전 청 (FDA)에 의해 승인 추가 확인 하는 필요를 강조 치료 전략입니다. DIC의 동물 모델 따라서 이러한 목적에 대 한 탐구 된다. 때문에 그들의 접근 및 단순, DIC 모델에 기계 연구 수 잠재적으로 영향을 미칠 광범위 한 cardiomyopathies의 다른 종류에: 일반적인 병 인 수 들 간에 공유 될 다른 etiologies의 cardiomyopathies에서 특히 나중 병 적인 단계17,18,,1920.
DIC의 설치류 모델, 뿐만 아니라 더 높은 처리량을 가진 zebrafish DIC 모델 새로운 유전적 요인 및 치료의 발견을 촉진 하기 위하여 개발 되었습니다. 배아 DIC 모델 치료 화합물21심사 투명 zebrafish 태아에 설립 되었습니다. 감안할 때 그는 cardiomyopathies는 진보적인 병을 가진 성인 개시 질병, 성인 zebrafish 심근 모델 되었습니다22,,2324,,2526개발. 만성 빈 혈24, DIC 성인 zebrafish23의 두 번째 인수 심근 모델 뒤에서 발생 하는 심근에 대 한 첫 번째 인수 모델을 생성 되었습니다. 우리는 성인 zebrafish에 DOX의 단일 bolus 주사 뒤 심장 근육 병 증의 만성 단계 6 개월 후 주입 약 1 주 후 주입 (wpi), 이내 급성 단계 구성 된 cardiotoxicity 유도 발견. Rapamycin의 기계적 대상의 haploinsufficiency 동안(mtor) 심근을 살펴볼 만성 단계에서 그것은 과장 물고기 사망률 급성 단계에 단계-종속 분별을 성인 DIC 모델의 가치를 강조 메커니즘23. 우리 성인 DIC 모델 스트레스 zebrafish insertional 심장 (ZIC) 돌연변이의27insertional mutagenesis transposon 기반 접근 통해 생성 되는 컬렉션을 사용할 수 있습니다 입증 되었습니다. 3 알려진된 심근 유전자로 DnaJ (Hsp40) 체, 인도의 B, 및 회원 6b 파일럿 화면 확인 (dnajb6b) 새로운 DIC 민감성 유전자28. 따라서, zebrafish에 성인 DIC 모델의 세대 주도 체계적으로 보완 기존 게놈 넓은 협회 연구 결과 (GWAS) 및 양이 많은 특색 소재 시 (QTL DIC에 대 한 유전 한정자의 식별을 가능 하 게 하는 새로운 방법론 ) 분석.
생성 및 성인 zebrafish DIC 모델의 구현 동안 우리는 다른 연구자 들 사이 또는 다른 주사 같은 조사에 의해 수행 중 에서도 상당한 변화 것으로 나타났습니다. 모델의 경도 특성 도전 다른 조사에서 결과 등록 하 고 순차 문제 해결 과정을 부과 한다. 이 간단한 심근 유도 스트레스 방법의 연구 공동체에 의해 사용을 촉진, 하 우리 자세히, 현재 두 가지 유형의 IP 주입, 우리의 프로토콜을 설명 하 고 다른 연구자 들 사이 유사를 줄이기 위해 고려 사항에 대해.
진보적인 DIC 모델, DOX 20 mg/kg의 복용량은 물고기 죽음에 1 wpi 하지만 여전히 결과 중 중요 한 물고기 죽음 및 4 wpi (그림 3 및 후 심장 기능의 감소를 발생 하지 않는 가장 높은 복용량으로 실험적으로 결정 그림 4C). 이 복용량은 설치류 DIC 모델 (15-25 mg/kg)에서 자주 사용 되 고 인간 (550 m g/m2는 15 mg/kg에 해당)에 누적 복용량을4,…
The authors have nothing to disclose.
이 작품에서 미국 심장 협회 과학자 개발 교부 금에 의해 부분적으로 지원 되었다 (14SDG18160021 야드), 미국 NIH R01 보조금 HL 81753와 HL 107304 xx, xx 메이 요 재단.
Crossing tank | Aquaneering | ZHCT100 | Fish breeding |
Incubator | ThermoFisher | Maintaining embryo | |
3 L medium tank | Aquaneering | ZT280 | Maintaining fish |
Paramecia | Carolina | 131560 | Food for juvenile fish |
Live hatched brine shrimp | in house | Food for adult fish | |
Doxorubicin hydrochloride | Sigma | D1515-10MG | |
1.5 ml safe-lock tube | Eppendorf | No. 022363204 | For drug storage |
Aluminum foil paper | Fisher | 1213104 | For preventing light exposure |
Proteinase K | Roche | No. 03115887001 | For dechorionating embryo |
Hank's balanced salt solution (HBBS) | ThermoFisher | 14025076 | Vehicle for DOX |
100 mm petri dish | Falcon | 431741 | |
10 μL NanoFil micro-syringe | WPI | NANOFIL | For injection |
34 gauge needle | WPI | NF34BV-2 | For injection |
Tricaine | Argent | MS-222 | Anesthetizing fish |
96 well plate | Costar | 3539 | For embryo drug treatment |
Transfer pipette | Bel-art product | F37898 | For transfering embryo |