La prova di infezione di pianta: Spray e ferita-mediata di inoculazione con la pianta patogeno Magnaporthe Grisea
Summary
Qui, presentiamo un protocollo per testare la virulenza della pianta con la pianta patogeno Magnaporthe grisea. Questa relazione contribuirà alla proiezione su grande scala di patotipi di funghi isolati e servire come un ottimo punto di partenza per la comprensione dei meccanismi resistenti delle piante durante l’allevamento molecolare.
Abstract
Piante possiedono un potente sistema per difendersi contro le minacce potenziali dei funghi patogeni. Per piante sul piano agricolo importanti, tuttavia, attuali misure di lotta contro tali agenti patogeni hanno dimostrato troppo conservatore e, quindi, non sufficientemente efficaci e possono potenzialmente rappresentare rischi ambientali. Pertanto, è estremamente necessario identificare i fattori di resistenza ospite per assistere nel controllo malattie delle piante naturalmente attraverso l’identificazione di germoplasma resistente, l’isolamento e caratterizzazione di geni di resistenza e l’allevamento molecolare di cultivar resistenti. A questo proposito, c’è bisogno di stabilire un metodo di inoculazione accurata, rapida e su larga scala per allevare e sviluppare i geni di resistenza della pianta. Il riso blast agente patogeno fungoso Magnaporthe grisea cause sintomi di grave malattia e le perdite di rendimento. Recentemente, M. grisea è emerso come organismo modello per lo studio dei meccanismi delle interazioni pianta-fungo patogeno. Quindi, segnaliamo lo sviluppo di un metodo di test di virulenza di pianta che è specifico per M. grisea. Questo metodo fornisce per inoculazione di spruzzo con una sospensione conidial e ferendo inoculazione con cubetti di micelio o goccioline di conidial sospensione. Il passaggio chiave del metodo ferentesi inoculazione per foglie di riso indipendente è di rendere le ferite sulle foglie delle piante, che evita qualsiasi interferenza causata da resistenza di penetrazione ospite. Questo spray/ferendo protocollo contribuisce per lo screening rapido, accurato e su larga scala di patotipi degli isolati di M. grisea . Questo integrato e metodo di infezione sistematica impianto servirà come punto di partenza eccellente per ottenere una prospettiva ampia di problemi in patologia vegetale.
Introduction
Esplosione di riso, causata da M. grisea, è una delle malattie più gravi per riso varietà in tutto il mondo1,2. Il processo mediante il quale M. grisea infetta piante ospiti comprende una produzione di conidi e collegamento di superficie, una germinazione di conidi e appressorium formazione, una formazione del peg di penetrazione e differenziazione di IFA infettiva, e una malattia diffusa 3. tutte queste fasi sono comuni in molti altri funghi patogeni vegetali e, infatti, un blocco di ogni singola fase previene l’infezione delle piante ospiti. Grazie alla sua importanza economica e trattabilità genetica, M. grisea è emerso come organismo modello per lo studio dei meccanismi delle interazioni pianta-fungo patogeno1,4. Pertanto, studiare la base molecolare di questi stadi di sviluppo in M. grisea contribuirà a delucidare i meccanismi molecolari sottostanti fungine patogenicità e l’identificazione di geni bersaglio candidato per lo screening e il romanzo di progettazione fungicidi5.
Recenti rapporti riguardo M. grisea infezione si sono concentrati sui meccanismi molecolari delle fasi pre-penetrazione, soprattutto il conidiation, la formazione di appressorium, i pioli di penetrazione e la crescita infettive3, 6. Pertanto, è essenziale per sviluppare un protocollo dettagliato per eseguire il test M. grisea infezione. Qui, presentiamo un metodo dettagliato per un test di infezione che utilizza l’analisi di un’infezione dello spruzzo-mediata con una sospensione conidial e l’inoculazione delle ferite con spine miceliale di M. grisea. In questo rapporto, il protocollo si concentra sulla cultura dei ceppi, la preparazione della soluzione conidiation per la spruzzatura e l’inoculazione micelio spina-mediata delle piante con M. grisea. Questi passaggi vengono descritti in dettaglio qui di seguito e una vista schematica che mostra l’intero flusso di lavoro del metodo e una lesione tipica sono riportati nelle figure 1 e 2, rispettivamente.
Protocol
Representative Results
Discussion
Geni di resistenza di malattia pianta svolgono un ruolo essenziale nella prevenzione delle infezioni da agenti patogeni, tra cui funghi patogeni1,12. Esplosione di riso è stato utilizzato come modello per comprendere la natura delle strutture di popolazione dell’agente patogeno e per identificare geni della pianta resistenza4. Pertanto, è necessario esaminare il genotipo di resistenza di malattia e genotipi di avirulenza delle principali…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato sostenuto il progetto speciale di ricerca scientifica dell’Università di agricoltura di Pechino (YQ201603) e il progetto scientifico del Comitato educativo di Pechino (KM201610020005).
Materials
| Agar | AOBOX Biotechnology（China） | 01-023 | |
| Filter paper | GE Healthcare brand(Sweden) | 10311387 | |
| 50-mL tube | CORNING(Amercia) | 430290 | |
| Centrifuge | Eppendorf(Amercia) | 5804R | |
| Tween-20 | Coolaber（China） | CT11551-100ml | |
| Culture dish | Thermofisher(Amercia) | 150326 | |
| 0.5-5 mL pipette | Eppendorf | 4920000105 | |
| 100-1000uL pipette | Eppendorf | 4920000083 | |
| Vacuum pump | Leybold | D25B | |
| Dissection needle | FST | 26000-35 | |
| Incubator | MEMMERT | PYX313 | |
| Inoculation ring | Greiner Bio One | 731175 |
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