Um modelo de Mouse hiperandrogénicas para estudar a síndrome do ovário policístico
Summary
Descrevemos o desenvolvimento de um modelo de mouse SOP, como magro com diidrotestosterona pelota para estudar a fisiopatologia da síndrome do ovário Policístico e a prole dessas barragens, como síndrome do ovário Policístico.
Abstract
Hyperandrogenemia desempenha um papel crítico na função reprodutiva e metabólica em mulheres e é a marca da síndrome do ovário policístico. Desenvolvimento de um modelo de rato de SOP, como magro que imita as mulheres com SOP é clinicamente significativa. Neste protocolo, descrevemos um modelo deste tipo. Inserindo um comprimento de 4 mm de pelota de pó de cristal DHT (dihidrotestosterona) (comprimento total da pelota é 8 mm), e substituí-lo mensalmente, somos capazes de produzir um modelo do rato de SOP, como com dobra de soro níveis 2 DHT mais elevado do que os ratos não implantados com DHT (n-DHT). Observamos uma disfunção metabólica e reprodutiva sem alterar o peso corporal e composição corporal. Enquanto exibindo um elevado grau de infertilidade, um pequeno subconjunto destes ratos fêmeas de SOP, como posso engravidar e sua prole puberdade atrasada e testosterona aumentada de adultos. Este modelo de rato magra como SOP é uma ferramenta útil para estudar a fisiopatologia da síndrome do ovário Policístico e a prole dessas barragens, como síndrome do ovário Policístico.
Introduction
Hiperandrogenismo é a marca da síndrome do ovário policístico (SOP) de acordo com os critérios do NIH e do excesso de andrógenos e síndrome do ovário Policístico (SOP-AE) da sociedade. Mulheres com SOP têm dificuldade em engravidar e tem aumentado o risco de complicações de gravidez1. Mesmo se elas engravidam, sua prole feminina tem um resultados de saúde adversos2,3. Modelos animais foram desenvolvidos utilizando várias estratégias4,5,6,7,8,9,10,11 , 12 e exibindo muitas características da síndrome do ovário Policístico (anovulação, e ou tolerância deficiente de glicose e insulina) com aumento de peso e obesidade associada com hiperplasia dos adipócitos de tamanho e peso do aumento dos adipócitos. Existem duas estratégias principais para produzir modelos animais que são usados para estudar a síndrome do ovário Policístico. Um é o tratamento com níveis elevados de andrógenos diretamente (injeção/inserção de andrógenos exógenos) ou indiretamente (por exemplo, bloqueando a conversão de andrógeno em estrógeno com inibidor de aromatase) após nascimento13. Outra é por hyperexposure fetal de andrógenos durante gestação14,15 estudar a prole. Por exemplo, a prole fêmea de macaco rhesus16,17, ovelha18e roedores expostos a níveis masculinos de andrógeno durante o período intra-uterino desenvolve traços de SOP, como mais tarde na vida. Estes modelos aprimorado significativamente nossa compreensão de efeitos de andrógeno elevado, programação fetal e uterinos efeitos ambientais. No entanto, estes modelos têm suas próprias limitações: 1) animais desenvolvem obesidade e, por conseguinte, é difícil separar os efeitos da hyperandrogenemia de obesidade induzida reprodutivos e disfunções metabólicas; 2) antes da gravidez, as mulheres com SOP já apresentam níveis elevados de andrógenos, assim oócitos foram expostos a andrógeno em excesso antes de fertilização; 3) as doses farmacológicas de testosterona (T) ou dihidrotestosterona (DHT) usado após o nascimento ou durante a gestação podem não refletir o ambiente de andrógeno de SOP. Foram medidos os níveis de testosterona e DHT no fluido folicular ovariano e/ou soro, e a testosterona e os níveis DHT são 1.5 para 3,9 vezes maior em mulheres com SOP5,19,20,21 ,22,23 , quando comparadas com mulheres não afetadas. Criamos um rato adulto modelo23,24,25 que desenvolve disfunção metabólica e reprodutiva dentro de duas semanas a contar do início da exposição crônica de DHT de inserção de um pellet com 4 mm de comprimento de pó de cristal DHT (comprimento total da pelota é 8mm). Este modelo produz níveis séricos DHT que são cerca de 2 dobras superior (designado 2xDHT) do que o de ratos controle sem tratamento de DHT. Os ratos 2xDHT não apresentam alterações de estradiol basal soro, testosterona, LH e não desenvolver obesidade e mostrar o peso ovariano semelhante, os níveis séricos de colesterol, ácidos graxos livres, leptina, TNFa e IL-623,24, 25 , relativo a controla mesmo até 3,5 meses após a inserção de DHT23,24,25. Além disso, pelo acasalamento de fêmeas que já desenvolveram características da síndrome do ovário Policístico, podemos estudar o impacto de um ambiente de hiperandrogénicas materna sobre a saúde reprodutiva e metabólico da prole15.
Neste novo paradigma (relevante para os critérios NIH e sociedade AE-SOP) modela a doença através da produção relativamente semelhantes níveis de andrógenos para aqueles das mulheres com SOP 2 – a 3 vezes mais testosterona ou níveis DHT, quando comparados com mulheres não afetadas. No entanto, este modelo é mantido por DHT exógena contínua e não de hiperandrogenismo endógeno programado uma vez DHT é retirado. O objetivo geral deste artigo é se concentrar em 1) como fazer a pelota DHT; 2) como gerar um SOP-incline-se como um modelo do rato; 3) estratégias para avaliar a prole fêmea dessas barragens. Outras medições e avaliação dos fenótipos não são abordados neste manuscrito, mas podem ser encontradas em5,15,23,24,25,26.
Protocol
Representative Results
Discussion
Hiperandrogenismo é uma característica fundamental da síndrome do ovário Policístico. A DHT sérica (duas vezes mais alto nos ratos DHT do que nos ratos não-DHT) usada neste protocolo é inferiores aos relatados por outros pesquisadores em estudos anteriores e é calibradas para imitar proporcionalmente as mulheres com SOP5,19, 20,21. Ao contrário de outros modelos, este modelo DHT 2 ve…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of Health (R00-HD068130 subsídios para S.W.) e o centro de pesquisas de Diabetes de Baltimore: pilotos e viabilidade Grant (S.W.).
Materials
| Crystalline 5α-DHT powder | Sigma-Aldrich | A8380-1G | ||
| Dow Corning Silastic tubing | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter | |
| Medical adhesive silicone | Factor II, InC. | A-100 | ||
| Goggles, lab coats, gloves and masks. | ||||
| 10 µL pipette tips without filter | USA Scientific | 11113700 | ||
| Microscope slide for smear | Fisher Scientific | 12-550-003 | ||
| Diff Quik for staining cells | Fisher Scientific | NC9979740 | ||
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | ||
| 3 mL Syring | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | ||
| attached needle: 20G | BD | 305176 | ||
| Ruler: any length than 10cm with milimeter scale. | ||||
| Xylazine | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100mg/ml | |
| Ketamine Hydrochloride | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100mg/ml | |
| Surgical staple | AutoClip® System, Fine Science Tool | 12020-00 | ||
| Insulin syringe | BD | 329461 | 1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe | |
| Trochar | Innovative Research of America | MP-182 | ||
| Microscope | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Germany | |
| Ear punch | Fisher Scientific | 13-812-201 | ||
| Testosterone rat/mouse ELISA kit | IBL | B79174 | ||
| DHT ELISA kit | Alpha Diagnostic International | 1940 | ||
| One touch ultra glucometer | Life Scan, Inc. | |||
| One touch ultra test stripes | Life Scan, Inc. | |||
| Eppendorf tube | Fisher Scientific | 05-402-18 | ||
| Razor blade | Fisher Scientific | 12-640 | ||
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | ||
| surgical underpad | Fisher Scientific | 50587953 | 
|
|
| Betadine Antiseptic Solution | Walgreens | |||
| 3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate) | 3M Science. Applied to Life | |||
| Animal tattoo ink paste | Ketchum manufacturing Inc. | Brockville, Ontario, Canada | ||
| Scale | Ohaus Corporation | HH120D | Pine Brook, NJ | |
| Electronic digital caliper | NEIKO Tools USA | 01407A | available from Amazon |
References
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