Method Article

Un modèle de souris Hyperandrogenic d’étudier le Syndrome des ovaires polykystiques

DOI:

10.3791/58379

⸱

October 2nd, 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Pediatrics, Johns Hopkins University School of Medicine, 2Department of Health, Beijing Military General Hospital, 3Southern Medical University, 4Department of Molecular and Cellular Physiology, Johns Hopkins University School of Medicine, 5Department of Gynecology and Obstetrics, Johns Hopkins University School of Medicine

In This Article

Summary

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Les auteurs décrivent le développement d’un modèle de souris SOPK type maigre avec une boulette de dihydrotestostérone afin d’étudier la physiopathologie du SOPK et la progéniture de ces barrages de SOPK-like.

Abstract

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Hyperandrogénie joue un rôle essentiel dans la fonction de reproduction et le métabolisme chez les femmes et est le signe distinctif du syndrome des ovaires polykystiques. Élaboration d’un modèle de souris de SOPK type maigre qui imite les femmes atteintes de SOPK est cliniquement significative. Dans ce protocole, nous décrivons un tel modèle. En insérant une longueur de 4 mm de pastille de poudre cristal DHT (dihydrotestostérone) (longueur totale de pellet est 8 mm), et remplacer tous les mois, nous sommes en mesure de produire un modèle de souris de SOPK type avec pli de niveaux 2 de DHT sérique plus élevé que les souris ne pas implantés avec DHT (no-DHT). Nous avons observé des dysfonctions métaboliques et reproduction sans changer le poids corporel et la composition corporelle. Bien que présentant un degré élevé de l’infertilité, un petit sous-ensemble de ces souris femelles de type SOPK peut tomber enceinte et leur progéniture montre la puberté retardée et une augmentation de testostérone en tant qu’adultes. Ce modèle de souris maigre SOPK-like est un outil utile pour étudier la physiopathologie du SOPK et la progéniture de ces barrages de SOPK-like.

Introduction

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Hyperandrogénie est la marque distinctive du syndrome des ovaires polykystiques (SOPK) selon des critères de NIH et de la société SOPK (AE-SOPK) et de l’excès d’androgènes. Les femmes atteintes de SOPK ont du mal à tomber enceinte et ont augmenté le risque de complications de grossesse1. Même si elles tombent enceintes, leur progéniture femelle aurait une santé résultats2,3. Des modèles animaux ont été développés en utilisant diverses stratégies4,5,6,7,

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Protocol

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Nous présentons ici des protocoles détaillés pour une insertion et préparation de boulette DHT et pour tester les reproducteurs et métaboliques. Les souris utilisées dans cette étude ont un fond mixte (C57/B6, CD1, 129Sv) et ont été maintenues avec de la nourriture et eau ad libitum dans un cycle lumière/obscurité de 14/10 h à 24 ° C dans l’animalerie de Broadway Research Building à la Johns Hopkins University School of Médecine. Toutes les procédures ont été approuvées par le Comité de l’emploi et de Johns Hopkins University animalier.

1. Créez le modèle murin de SOPK-like

  1. Préparation de boulette DHT <....

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Results

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Sérique de la DHT et test de tolérance au Glucose

Les niveaux de DHT sont mesurées de sérum prélevé par les deux ELISA et par LC-MS selon protocole 1,24 – 1,25 et 2.9, 3.0. Les valeurs absolues DHT sont différents entre la spectrométrie de masse et ELISA, cependant, le pli relative (environ 2 fois) de DHT vs insertion no-DHT est similaire de deux essais et à travers des expériences15,

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Discussion

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Hyperandrogénie est une caractéristique essentielle du SOPK. Les niveaux DHT de sérum (deux fois supérieur chez les souris de la DHT que chez les souris no-DHT) utilisés dans le présent protocole sont inférieurs à ceux rapportés par d’autres chercheurs dans des études antérieures et sont étalonnés pour imiter proportionnellement les femmes atteintes de SOPK5,19, 20,21. Contrairement aux autres.......

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Disclosures

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Rien à divulguer.

Acknowledgements

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Ce travail a été soutenu par le National Institutes of Health (subventions R00-HD068130 à S.W.) et le centre de recherches de diabète Baltimore : pilotes et subvention de faisabilité (à S.W.).

....

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Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
Poudre cristalline 5&alpha ;-DHTSigma-AldrichA8380-1G
Tube Silastic Dow CorningFisher Scientific11-189-15DDiamètre intérieur 0,04 po/1 mm x 0,085 po/2,15 mm diamètre extérieur
Adhésif médical siliconeFacteur II, InC.A-100
Lunettes de protection, blouses de laboratoire, gants et masques.
10 et micro ; Pointes de pipette L sans filtreUSA Scientific11113700
Lame de microscope pour frottisFisher Scientific12-550-003
Diff Quik pour coloration des cellulesFisher ScientificNC9979740
LancetFisher ScientificNC9416572
3 mL SeringueBecton, Dickinson and Company (BD),30985
aiguille attachée : 20 GBD305176
Règle : toute longueur supérieure à 10 cm avec échelle millimétrique.
XylazineVet one AnnSeA LA, MWI, BoiseNDC13985-704-10100 mg/mL
Chlorhydrate de kétamineHospira, IncNDC 0409-2051-05100 mg/mL
Agrafe chirurgicaleAutoClip® ; Système, outil scientifique fin12020-00
Seringue à insulineBD3294611/2 CC, faible dose Seringue à insuline U-100
TrocarInnovative Research of AmericaMP-182
MicroscopeCarl Zeiss Primo Star415500-0010-001Allemagne
Poinçon d’oreilleFisher Scientific13-812-201
Testostérone rat/souris ELISA kitIBLB79174
DHT Kit ELISAAlpha Diagnostic International1940
Ultra-glucomètre à une toucheLife Scan, Inc.
Bandes de test ultra à une toucheLife Scan, Inc.
Tube EppendorfFisher Scientific05-402-18
Lame de rasoirFisher Scientific12-640
ClidoxFisher ScientificNC0089321
coussin chirurgicalFisher Scientific50587953Fabricant : Andwin Scientific 56616018
Betadine Solution antiseptiqueWalgreens
3M Vetbond (cyanoacrylate de n-butyle)3M Science. Appliqué à la vie

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
  2. Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implicati....

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