Ferramentas caseiras simples para lidar com moscas de frutas —Drosophila melanogaster

Summary

Descrito aqui é o uso de várias ferramentas caseiras para transferir, Chill, e matar a Drosophilaadulta, bem como para limpar frascos de cultura de vidro e coletar ovos. Estas ferramentas são fáceis de fazer e são bastante eficientes no manuseio da Drosophila.

Abstract

A mosca-das-frutas, Drosophila melanogaster, é amplamente utilizada tanto na pesquisa biológica quanto na educação em biologia. Manipulação de moscas adultas é comum, mas difícil na prática, como moscas adultas voam. Demonstrado aqui é como fazer algumas ferramentas simples e rentáveis para abordar problemas difíceis no manuseio da Drosophila. Furos em rolhas de espuma são feitas e pontas de pipeta ou funis são inseridos nos furos. As moscas movem-se então somente em uma direção na ponta da pipeta/assemblage do funil, permitindo o controle eficiente da transferência da Drosophila adulta dentro ou fora de um frasco. Protocolos existentes foram modificados para cool-anestesiando moscas por refrigeração em gelo esmagado e transferi-los para uma superfície fria, dura IcePack. O IcePack é coberto com uma parte de gaze médica que mantem moscas imobilizadas da água condensada quando examinado um stereomicroscope. As moscas são finalmente eutanasiado para a contagem e triagem ou descartados por microondulação. Uma gaiola em forma de garrafa também foi desenvolvida para a coleta de ovos, bem como um dispositivo de poupança de mão de obra e protocolo de acompanhamento para frascos de cultura de vidro de limpeza.

Introduction

A mosca-das-frutas, Drosophila melanogaster, é um organismo modelo amplamente utilizado na educação biológica de pesquisa e biologia para estudar uma ampla gama de tópicos^1,2. Os problemas básicos de manipulação de Drosophila são a transferência de adultos de frasco para injetáveis e imobilização das moscas para que eles são mais fáceis de manusear, como todos os adultos (exceto para alguns mutantes^3,4) pode voar.

Convencionalmente, um pesquisador transfere moscas de um frasco para outro, segurando dois frascos boca-a-boca, batendo as moscas para baixo ou permitindo moscas para voar em outro frasco, em seguida, separando e reconectando ambos os frascos⁴. Obviamente, isso requer que a abertura de dois frascos com o mesmo diâmetro, e é difícil controlar a quantidade de moscas transferidas. Enquanto isso, isso requer mãos rápidas para conseguir o trabalho feito, e escapar moscas perdidas pode resultar em problemas para o laboratório ou sala de aula. Adicionar moscas virgens extras ou moscas masculinas a uma cruz já preparada é outra tarefa rotineira em experimentos de Drosophila . Convencionalmente, as moscas devem ser imobilizadas no frasco cruzado antes da adição de moscas extra.

A Drosophila adulta é rotineiramente anestesiada por éter, co₂ou refrigeração⁵. Em comparação com a exposição ao éter e ao co₂ , o resfriamento é o agente mais eficiente em termos de custo para imobilizar a Drosophila adulta e o menos prejudicial para as moscas e pesquisadores (especialmente estudantes jovens)^6,7. No entanto, a água que se condensa continuamente sobre a superfície fria ou câmara molha as moscas. É difícil determinar os fenótipos de moscas molhadas, e podem facilmente tornar-se danificados durante a manipulação^8,9. Isso manteve o método de refrigeração de se tornar mais amplamente aceito.

As ferramentas para o transferência da mosca e um método para refrigerar da mosca foram descritas previamente¹⁰. Nisto, uma técnica de refrigeração modificada da anestesia é relatada que é segura, de confiança, e praticável para experimentos de Drosophila . Também descrito neste artigo são 1) métodos para matar adultos para a contagem, triagem, ou descartando, 2) dispositivos e protocolos de poupança de trabalho para a limpeza de frascos de cultura de vidro, e 3) uma gaiola simples para a coleta de ovos. As ferramentas facilmente projetadas e rentáveis descritas aqui podem ser usadas para abordar as difíceis questões de manuseio de mosca, e esses métodos foram testados e são comprovados para serem robustos, confiáveis e fáceis de manusear para pesquisadores experientes e novatos.

Protocol

1. preparando ferramentas e acessórios Pontas/rolhas de funil Obter duas fichas de esponja (o diâmetro das fichas deve ser ligeiramente maior do que o diâmetro interno dos frascos utilizados para transferir moscas). Faça um furo nos centros das fichas de esponja com um ferro de solda elétrico aquecido. Obter duas pontas de pipeta de 1 mL, cortar um ao meio transversalmente com uma faca afiada, e descartar a extremidade pontiaguda. Em seguida, corte 1,5 cm da extremidad…

Representative Results

As rolhas T e F foram desenvolvidas como um conjunto de ferramentas simples que podem ser adaptadas e utilizadas em qualquer atividade de transferência de mosca. A transferência de moscas de uma cultura antiga em várias culturas frescas envolve a remoção dos plugues dos frascos frescos, substituindo-os por F-rolhas, em seguida, batendo as moscas no frasco velho, removendo rapidamente o plugue, e substituindo-o por um T-rolha. Se o alimento velho é compacto, a seguir é importante la…

Discussion

Algumas ferramentas caseiras para lidar com atividades básicas envolvidas na criação e experimentação de Drosophila são descritas neste artigo. Estas ferramentas são simples, mas bastante eficaz. Virtualmente, qualquer laboratório pode fazer essas ferramentas com facilidade, e uma pesquisa ou um laboratório de ensino não precisa encontrar uma alternativa pronta que talvez não esteja disponível localmente.

Fly transferência é a prática mais comum e uma tarefa difícil em…

Materials

a pair of pliers
cordless drill driver			max speed: 500 rpm
electric soldering iron
file
funnel			diameter of disk<60mm
ice box
insect pins
infrared thermometer			HCIYET HT-830
long cuff rubber gloves
mechanical pencils
medical gauze
microcentrifuge tube			100 ul
microwave oven
Parafilm
peri dish			internal diameter 60 mm
pipette tips			1 ml
plastic film
plastic peri dish			Φ36 mm used to cover the empty vial
point tweezers
protective work gloves
re-freezable hard icepacks			26.5×14.5×2.5 cm or larger
rubber air blower
snap cutter
soft drink bottle			500 ml, internal diameter c.a. 65 mm
sponge stopper
stainless steel sponges
tube brush
vial			Φ34 mm × 90 mm