Summary
Detta dokument ger en detaljerad beskrivning av hur man bygger en djurmodell av den anhepatiska fasen (lever ischemi) hos råttor för att underlätta grundforskning om ischemi-reperfusionsskada efter levertransplantation.
Abstract
Ortopisk levertransplantation (OLT) hos råttor är en beprövad djurmodell som används för preoperativa, intraoperativa och postoperativa studier, inklusive ischemi-reperfusionsskada (IRI) av extrahepatiska organ. Den här modellen kräver många experiment och enheter. Varaktigheten av anhepatic fasen är nära besläktade med tiden att utveckla IRI efter transplantation. I detta experiment använde vi hemodynamiska förändringar för att inducera extrahepatiska organskador hos råttor och bestämde den maximala toleranstiden. Tiden fram till den allvarligaste organskadan varierade för olika organ. Denna metod kan enkelt replikeras och kan också användas för att studera IRI av de extrahepatiska organen efter levertransplantation.
Introduction
Ischemi-reperfusion skada (IRI) är en vanlig komplikation efter lever transplantation. Lever IRI är en patologisk process som omfattar ischemi-medierad cell skada och onormal försämring av lever reperfusion. Lever IRI och det lokala medfödda immunsvaret kan delas in i varm och kall IRI, enligt skillnader i den kliniska miljön1. Varm IRI induceras av stamcellsskada, vanligtvis till följd av levertransplantation, chock och trauma2. Kall IRI är en komplikation av lever transplantation orsakas av endotelceller och periferacirkulation 3. Kliniska rapporter har visat att lever IRI är associerad med 10% av tidiga organsvikter och kan öka incidensen av akut och kroniskavstötning 4,5. Dessutom kan lever IRI också inducera flera organ dysfunktion syndrom eller systemisk inflammatoriska svar syndrom, med hög dödlighet6. Patienter med extrahepatic organ engagemang tenderar att stanna längre på sjukhuset, spendera mer pengar och ha en sämre prognos7. Utvecklingen av komplikationer är nära besläktad med längden på den anhepatiska fasen av levertransplantation8.
Ortopisk levertransplantation (OLT) hos råttor rapporterades först av den amerikanska professorn Lee 1973. Den experimentella operationen simulerade stegen för klinisk levertransplantation och anastomos hos blodkärl och den gemensamma gallgången (CBD) med suturmetoden. Förfarandet är svårt och tidskrävande med en låg framgångsgrad9. År 1979 gjorde Kamada m.fl. en betydande förbättring av OLT hos råttor genom att kreativt använda "tvåmanschettmetoden" för anastomos i portal venen för att kontrollera den anhepatiska fasen inom 26 minuter10. Samma år föreslog Zimmermann "single biliary stent method". På grundval av Lees arbete använde Zimmermann polyetenrör för att direkt anastomosera givarens och mottagarens CBD, förenklade återuppbyggnaden av CBD och bevarade sfinkterens funktion, och denna metod blev standard för gallrekonstruktion av OLT-modeller11. År 1980 föreslog Miyata m.fl. "tremanschettmetoden" där portalvenen (PV), suprahepatic vena cava (SVC) och intrahepatic vena cava (IVC) var anastomosed av manschettmetoden. Det finns dock risk för snedvridning av kanylen med denna metod, vilket kan leda till obstruktion av sämre vena cava reflux12. År 1983 föreslogs "två-manschettmetoden" med manschettmetoden för anastomos hos solcells- och IVC- och suturmetoden för SVC13. Denna metod antogs av forskare globalt för att etablera OLT-modeller. Sedan dess har manschetten anastomos steg förbättrats för att förkorta anhepatic fasen och förbättra överlevnaden förråttorna 14. På samma sätt används förbättrade metoder i klinisk praxis för att förkorta den anhepatiska fas15. Grundforskning om IRI efter levertransplantation har dock visat att överlevnadsgraden är omvänt relaterad till graden av skada på extrahepatiska organ. Därför krävs ytterligare forskning, och en enkel och reproducerbar djurmodell behövs för att simulera IRI efter levertransplantation.
Baserat på definitionen av den anhepatiska fasen simulerade vi de hemodynamiska förändringarna i levertransplantation som resulterar i IRI av extrahepatiska organ hos råttor. Häri ger vi en detaljerad beskrivning av hur man bygger en djurmodell av den anhepatiska fasen (lever ischemi) hos råttor för att underlätta grundforskning om IRI efter levertransplantation.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Djuretikkommittén godkände försöket vid Guangxi Medical University (No20190920). Alla djur levererades av Animal Experiment Center of Guangxi Medical University. Vi använde SPF manliga Sprague Dawley råttor (200-250 g, 10-12 veckor), hålls under rumstemperaturen 25 ± 2°C och fuktighet på 50 ± 10%. Utfodring stoppades 24 timmar före operationen; Vatten tillhandahölls dock.
OBS: En operatör kan utföra alla operationer utan mikrokirurgisk bas eller kirurgiskt mikroskop.
1. Drift
- Efter vägning, bedöva råttorna med isofluran (5%) med hjälp av en djurbedövningsmaskin.
- Efter 1-2 minuter, kläm försiktigt fast råttans tår med pincett. Om råttan inte svarar efter klämning har den gått in i anestesitillstånd. Använd vet salva på ögonen för att förhindra torrhet. Använd djurvärmelampor för att hålla råttornas kroppstemperatur vid 37-38 °C.
- Efter bukdesinfektion (povidone jodlösning), fixa råttan på djurets dissekeringsbord. Gör ett mediansnitt på 3 cm under xiphoidprocessen med tång och sax.
- Öppna bukhålan, exponera levern med hjälp av ett upprullningsdon och mobilisera det hepatogastriska ligamentet. Använd bomullspinne för att vända leverns mittlob försiktigt och vrid den uppåt för att exponera porta hepatis. Identifiera CBD, PV och HA.
- Tryck tunntarmen mot vänster nedre bukhåla med bomullspinne, täck den med våt gasväv och flytta den intrahepatiska ven cava till höger njurven.
- Isolera portalvenen, leverartären och den sämre ven cava ovanför rätt njurven med en intraokulär lins och tång markerade med 3-0 silketråd, var och en med en glidknut.
- Skär upp vänster och höger nedre extremitetshud och exponera lårbens venen med hjälp av oftalmiska tångar. Injicera långsamt låg molekylvikt heparin 625 IE/kg genom lårbens venen för att heparinisera hela kroppen.
- Ligate portal venen, lever gatan och sämre vena cava ovanför rätt njurlymfknutor anda med nr 3-0 suturer, varar 45 minuter (Figur 1). Byt ut tunntarmen i bukhålan och täck den med gasväv. Minska inandningsbedövningen under dessa perioder.
- Efter 45 minuter, släpp portal venen, lever gatan och sämre vena cava ovanför rätt njurlymfknutor anda.
- Suturera muskeln och huden, lager för lager, och avsluta inhalationell anestesi. Ge postoperativ analgesi med subkutan morfin på 5 mg/kg var 4:e timme.
- Observera råttan tills den är vaken och mata under en temperatur av 25 ± 2 °C och fuktighet på 50 ± 10%. Djurvärmelampor är nödvändiga.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Råttors tolerans mot lever ischemi
I denna djurmodell visas de platser där blodkärlen ligaterades under drift i figur 1. Råttorna delades slumpmässigt in i 5 grupper för ischemi i 15 minuter (I15-gruppen), 30 minuter (I30-gruppen), 45 minuter (I45-gruppen), 60 minuter (I60) och sham group, med 10 råttor i varje grupp. Överlevnadsgraden för varje grupp observerades 14 dagar efter operationen. Alla råttor överlevde i I15-gruppen, I30-gruppen och sham-gruppen. Åtta överlevde i 14 dagar i I45-gruppen, och endast 2 överlevde i I60-gruppen. Dessa resultat tyder på att råttorna kan tolerera den anhepatiska fasen i högst 45 minuter (tabell 1).
Effekter av vaskulär ligatur på cirkulationen hos råttor
Under experimentet registrerade Biosystems hjärtfrekvensen och blodtrycket (rätt inre halspulsåderintubering) före och efter anhepatisk fas. Vi fann att hjärtfrekvensen och medelvärdet av artärtrycket (MAP) hos råttor förändrades dramatiskt efter vaskulär ligatur (Figur 2).
Effekter på extrahepatiska organ
Lever ischemi trängsel och ödem hittades i tarmarna, mag varices och splenomegaly efter ligatur. Åttio råttor delades slumpmässigt in i 8 grupper för ischemi i 45 minuter (T0), reperfusion i 6 timmar (T6), 12 timmar (T12), 24 timmar (T24), 48 timmar (T48), 72 timmar (T72), 7 dagar (D7) och 14 dagar (D14). Efter att råttorna offrats togs vävnad från njure, bukspottkörtel, tunntarmen, hjärtat och lungan och färgades med hematoxylin-eosin (HE). Hela färgningsprocessen består av fem steg: dewaxing, färgning, uttorkning, transparens och tätning. Förutom hjärtat tilldelades patologiska poäng som tidigarebeskrivits 16,17,18,19.
Tiden fram till maximal skada på de extrahepatiska organen varierade; det var 6-24 timmar efter operationen för bukspottkörteln och 24-48 timmar för lungorna. Tarmkanalen och njuren skadades allvarligast efter 45 minuters ischemi. det fanns ingen uppenbar onormal av intestinala slemhinnan 24 timmar efter operationen, och njurarna återhämtade sig efter 48 timmar. Efter reperfusion hittades lokal hjärtmuskelcellsnekros, cellfragmentering och upplösning, inflammatorisk cellinfiltration och lokal vasodilatation och trängsel i hjärtat 24-48 timmar efter operationen (Figur 3).
Lungorna
Neutrophil infiltration hittades i lungvävnaden efter ischemi. Med ökningen av reperfusionstid (T0,T6), slem av bronkial lumen kunde också ses i lungvävnaden. Inflammatoriska cell infiltration inträffade i alveolar väggen, som blev allvarligt förtjockad. Alveolar kollaps och försvinnande av alveolar hålighet kunde också hittas i vissa vävnader. det fanns ingen betydande alveolar ödem eller kapillär trängsel i alveolar väggar. De skadades svårast 24-48 timmar efter operationen, med några råttor som visar dyspné och andra manifestationer 7 dagar efter operationen. HE färgning resultat föreslog lymfadenit i luftvägarna, mild inflammatorisk cell infiltration i den alveolära väggen och lokala blödning (Figur 3A, Figur 4).
Njurar
En liten mängd eosinofila substans hittades i njurlymfknutor tubules efter ischemi i fas T0, men ingen inflammatorisk cell infiltration och andra avvikelser sågs. Svullna njurlymfknutor tubulära epitelceller, porösa eller vacuolated cytoplasma, necrotic celler i få lumen, karyopyknosis, fragmentering, penselgräns förlust och rör-formad sura grupp i många lumen sågs dock 6-48 timmar efter operationen. Dessutom sågs ett litet antal njurlymfknutor tubulära epitelial celler med granulat degeneration och porösa och lätt färgade cytoplasma sett 48 timmar efter operationen. Signifikant interstitiell telangiectasia, men ingen allvarlig inflammatorisk cell infiltration, hittades (Figur 3B, Figur 5).
Tunntarmen
Tunntarmen skadades svårast efter ischemi (T0). det fanns allvarliga inflammatoriska cell infiltration, mucosa epitel shedding och telangiectasia. Med ökningen av reperfusionstiden läkte skadan snabbt. Slemhinnan epitel återställdes helt 24 timmar efter operationen, och endast mild inflammatorisk cell infiltration sågs (Figur 3C, Figur 6).
Bukspottkörteln
Allvarliga inflammatoriska celler infiltrerade runt bukspottskörteln vävnad vid fas T0. Bukspottskörteln organskador var dock inte enhetliga. Sex av 10 hade bukspottskörteln nekros och inflammatorisk infiltration 24 timmar efter kirurgi, och de andra 4 hade inga uppenbara avvikelser. Tjugofyra timmar efter operationen, förutom infiltration av inflammatoriska celler, fanns ödem, breddning av interlobular utrymme, blödning, nekros av ett litet antal acinar celler, oklar avgränsning av cellerna, nukleär fragmentering och upplösning och mild inflammatorisk cell infiltration i synfältet. Sedan försvann inflammationen långsamt (Figur 3D, Figur 7 ).
Hjärtat
Vid fas T0 arrangerades hjärt myocyter regelbundet med tydlig avgränsning, normala cell morfologi, lokala interstitiell trängsel och mild brungul pigment nedfall. Dessutom observerades inflammatorisk cell infiltration i skador interstitiell och perivaskulära regioner. Med ökningen av reperfusionstid hittades lokala hjärtinfarkt cell nekros, cell fragmentering och upplösning, inflammatorisk cell infiltration, lokala vasodilation och trängsel i vävnader 24-48 timmar efter operationen. Ventrikulär dilatation, porös struktur, ökad skador interstitium och mild inflammatoriska cell infiltration sågs i vissa exemplar. Efter 48 timmar försvann lokala kardiomyocyter och ersattes av en liten mängd fibrös bindväv med mild inflammatorisk cell infiltration. Vid det här tiden sågs inga andra uppenbara avvikelser (figur 8).
Effekter av hemodynamiska förändringar på lever-, njur-, bukspottkörtel- och hjärtserologiska index
Serum samlades in, och nivåerna av alanin aminotransferase(ALT), aspartate aminotransferase(AST), kreatinin och amylas upptäcktes av en automatisk biokemiska analyzer. Alla indikatorer nådde en topp på 24-48 timmar, till skillnad från de patologiska förändringarna. Även om dessa nivåer var normala 48 timmar efter operationen fortsatte patologiska skador (figur 9).
Bild 1: Ligaturens placering: PV, HA, IVC övre högra njurvenen. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| Grupp | N | överlevnad vid 24 h, n (%) | överlevnad vid 7 d, n (%) | överlevnad vid 14 d, n (%) |
| Bluff | 10 | 10 | — | — |
| Jag 15 min | 10 | 10/10 | 10 (100) | 10 (100) |
| Jag 30 min | 10 | 10/10 | 10 (100) | 10 (100) |
| Jag 45 min | 10 | 8/10 | 8/10 (80) | 8/10 (80) |
| Jag 60 min | 10 | 2/10 | 2/10 (20) | 2/10 (20) |
Tabell 1: Råttors tolerans mot lever ischemi
Bild 2: Hemodynamiska förändringar i I45 min grupp. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3: Poäng av organ histologi. (A) lunga; B)Njure. C)Tarm. D)Bukspottkörtel. *Statistiskt signifikant jämfört med bluffgruppen (P < 0,05). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 4: Patologiska förändringar i lungorna efter operationen. A)Sham-gruppen. B)Ischemigruppen (T0-gruppen). C)Reperfusion 6 timmar (T6) grupp; D)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; E)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; F)Reperfusion 24 timmar (T24) grupp; G)Reperfusion 48 timmar (T48), H)Reperfusion 7 dagar (D7) grupp; (I) Reperfusion 14 dagar (D14) grupp (skala 50 μm). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 5: Patologiska förändringar i njurarna efter operationen. A)Sham-gruppen. B)Ischemigruppen (T0-gruppen). C)Reperfusion 6 timmar (T6) grupp; D)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; E)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; F)Reperfusion 24 timmar (T24) grupp; G)Reperfusion 48 timmar (T48), H)Reperfusion 7 dagar (D7) grupp; (I) Reperfusion 14 dagar (D14) grupp (skala 50 μm). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 6: Patologiska förändringar i tunntarmen efteroperationen. B)Ischemigruppen (T0-gruppen). C)Reperfusion 6 timmar (T6) grupp; D)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; E)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; F)Reperfusion 24 timmar (T24) grupp; G)Reperfusion 48 timmar (T48), H)Reperfusion 7 dagar (D7) grupp; (I) Reperfusion 14 dagar (D14) grupp (skala 50 μm). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 7: Patologiska förändringar i bukspottkörteln efteroperationen. B)Ischemigruppen (T0-gruppen). C)Reperfusion 6 timmar (T6) grupp; D)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; E)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; F)Reperfusion 24 timmar (T24) grupp; G)Reperfusion 48 timmar (T48), H)Reperfusion 7 dagar (D7) grupp; I)Reperfusion 14 dagar (D14) grupp (A och D skala 50 μm; BCEFGHI skala 50 μm). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 8: Patologiska förändringar i hjärtat efter operationen. A)Sham-gruppen. B)Ischemigruppen (T0-gruppen). C)Reperfusion 6 timmar (T6) grupp; D)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; E)Reperfusion 12 timmar (T12) grupp; F)Reperfusion 24 timmar (T24) grupp; G)Reperfusion 48 timmar (T48), H)Reperfusion 7 dagar (D7) grupp; I)Reperfusion 14 dagar (D14) grupp (A skala 50 μm; BCDEFGHI skala 100 μm). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Figur 9: Ändringar av ALT, AST, kreatinin (Cr) och amylas i varje grupp. *Statistiskt signifikant jämfört med bluffgruppen (P<0,05). Klicka här om du vill visa en större version av den här figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
OLT hos råttor är en idealisk modell för att studera organbevarande vid levertransplantation, IRI, transplantationsavstötning, immuntolerans, transplantationspatologi och farmakologi, homotransplantation och xenotransplantation. För närvarande används det ofta i experimentell forskning av levertransplantation.
Under pilotstudier administrerade vi först pentobarbital natrium intraperitoneal anestesi och fann att detta ledde till hög postoperativ dödlighet och kort tolerans mot hemodynamic förändringar. Således använde vi inandning anestesi i efterföljande prövningar för snabb uppkomsten av åtgärder och snabb uteslutning av in vitro egenskaper. Övergången till inandningsbedövning förbättrade avsevärt toleranstiden och råttornas postoperativa överlevnad. Utredare bör vara uppmärksamma på råttornas andning och hjärtfrekvens för att förhindra överdosering av bedövningsmedel. Biosystem kan användas för att övervaka hjärtfrekvens och blodtryck. Vi observerade också effekten av kirurgisk sutur tjocklek på ligaturen av blodkärl. Även om linjer mindre än 3-0 kunde perfekt ligate blodkärlen, de var svåra att lossa och kan leda till bristning av blodkärl. Tvärtom kan linjer större än 3-0 resultera i ofullständig vaskulär ocklusion, vilket förhindrar hemodynamiska förändringar. Dessa materiella problem kommer att förbättras i framtida experiment. Det finns vissa begränsningar i vårt protokoll. Värmelampor rekommenderas inte för temperaturunderhåll på grund av deras potential för överhettning; alternativa uppvärmningsförslag, såsom återcirkulerande vattenfiltar, rekommenderas till djurets fördel.
Det finns många orsaker till distala organ skada efter OLT. För det första kan skada orsakas av kallt bevarande av donatorlever in vitro20. För det andra kan IRI uppstå och orsaka vävnadsskador när blodtillförseln återgår till vävnad (reperfusion) efter en lång period av ischemi. Ischemi är den främsta orsaken till skada, och reperfusion är processen där skadan uppstår. Efter att samtidigt ha blockerat IVC och PV under den anhepatiska fasen inträffade en stor mängd blod stasis i de nedre extremiteterna och inre organ. Den effektiva cirkulationsvolymen (ECV) minskade kraftigt och MAP minskade. På grund av vagus nerv stimulering, det fanns dock ingen kompensatorisk ökning av hjärtfrekvensen hos råttor. I detta experiment fann vi att råttor genomgick betydande hemodynamic förändringar inom 5 minuter efter ligatur och fartyg release, som uppfyllde definitionen av ischemi-reperfusion syndrom.
Ischemi inträffade i vissa vävnader utanför levern. Efter den anhepatiska fasen ökade ECV. MAP återgår till det normala efter att IVC och PV avblockerats, med skada som inträffar utanför levern efter reperfusion. Dessutom producerade IRI av donatorns lever inflammatoriska medlare (TNF-α, interleukin-1, interleukin-6, interleukin-8) som attackerade de distalaorganen 21. I detta experiment simulerades hemodynamiken under den anhepatiska fasen, vilket orsakade passiv överbelastning av IVC och njure, skador på mag-tarmbarriären, bakteriell flyttning, ischemi i organen (t.ex. lunga, hjärta, bukspottkörtel, njure etc.) där SVC ligger och IRI till de extrahepatiska organen.
De patologiska resultaten visade att toppen av skandinaviska skada och återhämtningstiden var olika i varje organ. Även om kall lagring och skador orsakade av immunfaktorer inte kunde simuleras i denna studie, kan anhepatisk IRI replikeras och jämföras med andra djurmodeller för att undersöka extrahepatisk organskada. Vår modell och OLT-modell kan jämföras och observeras för att ge en grund för forskningen om extrahepatisk organskada. Dessutom liknar vår modell vissa kliniska leveroperationer, såsom den för Hilar cholangiocarcinoma. Hilar cholangiocarcinoma är en elakartad tumör som ofta invaderar PV eller IVC och ofta kräver PV klämning under kirurgi22. Lever portal återuppbyggnad utfördes. När tumör invaderar IVC, intraoperativ fastspänning av IVC krävs också, och de resulterande hemodynamic förändringarna överensstämmer med vår modell.
Sammanfattningsvis är vår modell hos råttor lätt att använda och enkel, utan mikrokirurgi, och ger grunden för grundforskning om IRI av extrahepatiska organ efter lever ischemi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna till detta manuskript har inga intressekonflikter att avslöja.
Acknowledgments
Vi vill erkänna de användbara förslagen från Dr. Wen-tao Li och Dr. Ji-hua Wu vid det andra anslutna sjukhuset vid Guangxi Medical University. Författarna vill tacka våra lagkamrater för användbara kommentarer och diskussioner. Författarna vill också tacka de anonyma granskarna och redaktörerna för JoVE för deras kommentarer. Särskilt tack bör gå till Dr Yuans föräldrar för deras kontinuerliga stöd och uppmuntran. Arbetet stöddes av Ningbo Natural Science Foundation (2014A610248).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 4% paraformaldehyde solution | Shanghai Macklin Biochemical Co.,Ltd | P804536 | |
| air drying oven | Shanghai Binglin Electronic Technology Co., Ltd. | BPG | |
| Alanine aminotransferase (ALT)Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K235-S | |
| ammonia | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10002118 | |
| amylase Kit | Elabscience Biotechnology Co.,Ltd | E-BC-K005-M | |
| anhydrous ethanol | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 100092183 | |
| Animal anesthesia machine | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | R640 | |
| aspartate aminotransferase (AST)kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03040 | |
| automatic biochemical analyzer. | SIEMENS AG FWB:SIE, NYSE:SI Co., Ltd. | 2400 | |
| Biosystems (when nessary) | Chengdu Taimeng Electronics Co., Ltd. | BL-420F | |
| Centrifuge | Baiyang Medical Instrument Co., Ltd. | BY-600A | |
| cover glass | Jiangsu Shitai Experimental Equipment Co. Ltd | 10212432C | |
| creatinine Kit | Rayto Life and Analytical Sciences Co., Ltd. | S03076 | |
| dewatering machine | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Donatello Series 2 | |
| embedding machine | Hubei Xiaogan Kuohai Medical Technology Co., Ltd. | KH-BL1 | |
| frozen machine | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| hematoxylin-eosin dye solution | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G1005 | |
| high-efficiency paraffin wax | Shanghai huayong paraffin wax co., Ltd | Q/YSQN40-91 | |
| hydrochloric acid | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 10011018 | |
| intraocular lens (IOL)forceps | Guangzhou Guangmei Medical Equipment Co., Ltd. | JTZRN | |
| Isoflurane | Shenzhen Ruiwode Life Technology Co. Ltd | — | |
| micro Scissors(when nessary) | Shanghai Surgical Instrument Factory | WA1010 | |
| needle holders | Shanghai Surgical Instrument Factory | J32010 | |
| neutral gum | Shanghai Huashen Healing Equipment Co.,Ltd. | — | |
| normal optical microscope | Nikon Instrument Shanghai Co., Ltd | Nikon Eclipse CI | |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | J3CO30 | straight |
| ophthalmic forceps | Shanghai Surgical Instrument Factory | JD1060 | bending |
| ophthalmic Scissors | Shanghai Surgical Instrument Factory | J1E0 | |
| pathological slicer | Shanghai Leica Instrument Co., Ltd | RM2016 | |
| pipettes | Dragon Laboratory Instruments Co., Ltd. | 7010101008 | |
| retractors | Beijing Jinuotai Technology Development Co.,Ltd. | JNT-KXQ | |
| scanner | Hungary 3DHISTECH Co.,Ltd | Pannoramic 250 | |
| slide | Wuhan Saiwell Biotechnology Co., Ltd | G6004 | |
| xylene | Sinopharm Chemical Reagents Co. Ltd | 1330-20-7 |
References
- Dar, W. A., Sullivan, E., Byon, J. S., Eltzschig, H., Ju, C. Ischaemia reperfusion injury in liver transplantation: Cellular and molecular mechanisms. Liver International. 39 (5), 788-801 (2019).
- Qiao, P. F., Yao, L., Zhang, X. C., Li, G. D., Wu, D. Q. Heat shock pretreatment improves stem cell repair following ischemia-reperfusion injury via autophagy. World Journal of Gastroenterology. 21 (45), 12822-12834 (2015).
- Liu, Y., et al. Activation of YAP attenuates hepatic damage and fibrosis in liver ischemia-reperfusion injury. Journal of Hepatology. 71 (4), 719-730 (2019).
- Hirao, H., Dery, K. J., Kageyama, S., Nakamura, K., Kupiec-Weglinski, J. W. Heme Oxygenase-1 in liver transplant ischemia-reperfusion injury: From bench-to-bedside. Free Radical Biology and Medicine. 157, 75-82 (2020).
- Motiño, O., et al. Protective role of hepatocyte cyclooxygenase-2 expression against liver ischemia-reperfusion injury in mice. Hepatology. 70 (2), 650-665 (2019).
- Guo, W. A. The search for a magic bullet to fight multiple organ failure secondary to ischemia/reperfusion injury and abdominal compartment syndrome. Journal of Surgical Research. 184 (2), 792-793 (2013).
- Elham, M., Mahmoudi, M., Nassiri-Toosi, M., Baghfalaki, T., Zeraati, H. Post liver transplantation survival and related prognostic factors among adult recipients in tehran liver transplant center; 2002-2019. Archives of Iranian Medicine. 1 (23), 326-334 (2020).
- Kim, E. H., Ko, J. S., Gwak, M. S., Lee, S. K., Kim, G. S. Incidence and clinical significance of hyperfibrinolysis during living donor liver transplantation. Blood Coagulation and Fibrinolysis. 29 (3), 322-326 (2018).
- Czigány, Z. Improving research practice in rat orthotopic and partial orthotopic liver transplantation: a review, recommendation, and publication guide. European Surgical Research. 55 (1-2), 119-138 (2015).
- Kamada, N., Calne, R. Y. Orthotopic liver transplantation in the rat. Technique using cuff for portal vein anastomosis and biliary drainage. Transplantation. 28 (1), 47-50 (1979).
- Zimmermann, F. A., et al. Techniques for orthotopic liver transplantation in the rat and some studies of the immunologic responses to fully allogeneic liver grafts. Transplantation Proceedings. 11 (1), 571-577 (1979).
- Miyata, M., Fischer, J. H., Fuhs, M., Isselhard, W., Kasai, Y. A simple method for orthotopic liver transplantation in the rat. Cuff technique for three vascular anastomoses. Transplantation. 30 (5), 335-338 (1980).
- Kamada, N. A., Calne, R. Y. Surgical experience with five hundred thirty liver transplants in the rat. Surgery. 93 (1), 64-69 (1983).
- Yang, L. F., et al. A rat model of orthotopic liver transplantation using a novel magnetic anastomosis technique for suprahepatic vena cava reconstruction. Journal of Visualized Experiments. 19 (133), e56933 (2018).
- Liu, L. X., He, C., Huang, T., Gu, J. Development of a new technique for reconstruction of hepatic artery during liver transplantation in sprague-dawley rat. PLoS One. 10 (12), 0145662 (2015).
- Paller, M. S., Hoidal, J. R., Ferris, T. F. Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure In the rat. Journal of Clinical Investigation. 74 (4), 1156-1164 (1984).
- Schmidt, J., Lewandrowsi, K., Warshaw, A. L., Compton, C. C., Rattner, D. W. Morphometric characteristics and homogeneity of a new model of acute pancreatitis in the rat. International Journal of Pancreatology. 12 (1), 41-51 (1992).
- Chui, C. J., McArdle, A. H., Brown, R., Scott, H. J., Gurd, F. N. Intestinal mucosal lesion in low-flow states. I. A morphological, hemodynamic, and metabolic reappraisal. Archives of Surgery. 101 (4), 478-483 (1970).
- Kozian, A., et al. One-lung ventilation induces hyperfusion and alveolar damage in the ventilated lung:an experimental study. British Journal of Anaesthesia. 100 (4), 549-559 (2008).
- Shimada, S., et al. Heavy water (D2O) containing preservation solution reduces hepatic cold preservation and reperfusion injury in an isolated perfused rat liver (IPRL) model. Journal of Clinical Medicine. 8 (11), 1818 (2019).
- Nakamura, K. Sirtuin 1 attenuates inflammation and hepatocellular damage in liver transplant ischemia/reperfusion: from mouse to human. Liver Transplantation. 23 (10), 1282-1293 (2017).
- Blaire, A., et al.
