심한 난소 기능 장애 환자에서 불 임 보존

Summary

우리는 심각한 난소 기능 장애를 가진 환자를 위한 난소 여포의 약물 없는 체외 활성화 (IVA)를 위한 실험실 절차의 세부 사항을 제시합니다. 이 방법은 난소 과잉 자극 당 회수 가능한 난모세포의 수를 증가시키고 그 환자를 위한 불임 보존을 유익할 수 있었습니다.

Abstract

난소 기능은 노화 중 및 karyotype 이상, 자가 면역 질환, 화학 및 방사선 요법뿐만 아니라 난소 수술을 포함한 일부 병리학 적 조건에서 점진적으로 감소합니다. 심한 난소 기능 장애를 가진 미혼 여성의 경우, 불임 보존은 미래의 임신에 중요합니다. 난소 극저온 보존은 불임 보존을 위한 확립된 방법이지만, 이 환자들은 난소 과잉 자극 후에도 제한된 수의 난소세포만 보존할 수 있어 향후 임신을 보장하기에 충분한 난피세포를 보장하기 위해 반복된 자극으로 이어질 수 있습니다. 이 문제를 해결하기 위해, 우리는 최근에 우리가 preantral 여포 단계로 발전하기 위하여 난소 여포의 초기 단계를 자극하는 가능하게 하는 시험관 내 활성화 (IVA) 절차를 개발했습니다. 이 preantral 여포는 고나돌비틴 자극의 독특한 프로토콜에 반응할 수 있고, 그 결과 극저온 보존을 위한 난소 자극 당 회수된 난소 자극의 증가수의 결과로. 약물없는 IVA는 외과 적 접근법과 난소 자극으로 구성되었습니다. 우리는 복강경 수술하에 환자에게서 하나 또는 둘 다 난소에서 피질의 부분을 제거했습니다. 난소 피질 조직은 하마 신호 통로를 중단하고 초기 단계 여포의 발달을 자극하기 위하여 작은 큐브로 절단되었습니다. 이 큐브는 남은 난소뿐만 아니라 나팔관의 세로사 아래에 정형소로 이식되었습니다. 우리는 이미 약물없는 IVA의 수술 절차와 후속 난소 자극의 프로토콜을 발표했지만, 여기에서 우리는 약물없는 IVA에 필요한 실험실 방법의 세부 사항을 제시합니다.

Introduction

난소 기능은 노화 와 karyotype 이상, 자가 면역 질환, 화학 요법 및 방사선 요법 및 난소 수술을 포함한 일부 병리학 조건 동안 점진적으로 감소합니다. 불임 보존은 심각한 난소 기능 장애를 가진 미혼 여성이 미래의 임신에 대한 잠재력을 보존하는 가장 좋은 옵션 중 하나입니다. 불임 보존을 위해, 현재 두 가지 방법은 주로 온코 불임 분야에서 사용할 수 있습니다. 오낭 극저온 보존은 불임 보존을 위한 잘 확립된 절차이며 많은 성공적인 사례가^1,2로보고되었다. 한편, 난소조직 냉동보존도 암 환자의 불임 보존을 위해 설립되었지만 여전히 실험전략^3,4이다. 두 방법 모두에서 임신이 발생하기 위해서는 여러 가지 성숙한 난모세포가 필요합니다. 일반적으로, 40세 이전에 무생물이 되는 조기 난소 부족(POI)을 가진 환자, 그리고 난소 예비가 낮은 중년 여성은 성숙한 난소 자극에 대한 난소 반응(POR)을^5,6,7로나타낸 것으로 나타났다. 더욱이, 적은 수의 개미 여포를 가진 젊은 환자는 또한 난소 자극^7에POR를 보였다. 이 환자는 적당한 난소 hypers자극 후에조차 회수 가능한 난모세포의 아주 한정된 수를 가지고, 따라서 임신을 위한 난모세포의 충분한 수를 지키기 위하여 다중 비싼 절차가 요구됩니다.

남편의 정자와 배아 전이(ET)를 가진 체외 수정(IVF)에 이어 온구체 기증은 자신의 난소를 얻는 데 어려움을 겪는 POI 및 POR 환자에게 유일한 옵션이다^8,9,10. 그러나, 난소세포 기증은 윤리적인 문제뿐만 아니라 자기면역 및 임신 합병증^{11,12,13,14에}의해 복잡하다. 이러한 문제를 해결하기 위해 환자 고유의 난모를 사용하여 불임 치료의 설립이 필요합니다. POI 환자를 위해, 우리는 성공적인 여포 성장 및 성숙한 난모세포의 생성을 허용하기 위하여 체외 활성화 (IVA) 접근을 개발했습니다, 많은 임신 및 납품을 지도하는^15. IVA에서, 우리는 복강경 수술에서 난소 피질을 단편화하고 Akt 자극 약물에 의해 여포를 활성화하고 두 번째 복강경 수술^15에서나팔관의 세로사 아래에 만든 인공 파우치로 다시 이식이 수행하기 위해 이틀 동안 배양. 이 절차는 난소 피질 단편화 후 원시, 기본 및 이차 여포의 성장을 촉진 하 여 하마 신호 중단을 촉진^16,Akt 신호 자극기와 2 일 문화^{다음 17.}

가혹한 POI 케이스와는 대조적으로, 감소된 난소 예비를 가진 POR 환자는 다중 이차 여포가 있습니다. 하마 신호 중단만으로는 이차 여포 성장 촉진에 효과적이기 때문에^16,우리는 최근에 Akt 자극 약물의 처리 없이 피질 단편화 및 직교 이식을 포함하는 약 없는 IVA 절차를 사용하여 POR 환자를 위한 성공적인 임신 및 납품을 보여주었습니다. 약물 없는 IVA는 난소 여포의 초기 단계를 자극하여 단 하나의 수술 후 전형 여포 단계로 발전시키고 IVF-배아 전달을 위한 회수된 난귀세포의 수를^증가15,18. 약물 없는 IVA 접근법은 원래 IVA와 비교하여 1) 문화 중 잠재적 인 여포 손실을 피하고, 2) 두 번째 수술의 침습성과 비용을 최소화하고, 3) 단기 수술 후 침대 휴식과 4) 직교 성 이식으로 인한 자발적 임신의 잠재력을 포함합니다. 우리는 최근에 약물없는 IVA^19의 외과 적 절차와 수술 후 난소 자극의 상세한 프로토콜을 보여주는 비디오 기사를 발표했다^20. 여기서, 우리는 약물없는 IVA에 필요한 실험실 방법의 세부 사항을 제시한다.

Protocol

약물 없는 IVA 치료에 등록한 난소 예비군이 감소하는 각 POR 환자로부터 서면 통보 동의를 얻었습니다. 이 연구는 국제 보건 복지 대학의 윤리위원회에 의해 승인되었다 (제 17-S-21). 임상시험은 UMIN000034464에 따라 등록되었으며 세계의학협회 윤리강령(헬싱키 선언)에 따라 시행되었습니다. 1. 난소 피질 추출 전설명19,20과 같이 복강경 수술을 통해 전신 ?…

Representative Results

IVA접근법(15)의첫 번째 간행물에서, 우리는 복강경수술(그림 1A)의밑에 이식 부위로 하나씩 난소 피질 큐브를 이식했습니다. 100-150 난소 큐브가 사용되었기 때문에 복강경 수술에서 조직 이식에 3-4 시간이 걸렸습니다. 또한, 일부 난소 큐브는 접목 하기 전에 손실 되었다. IVA 캐뉼라는 20-30큐브를 한 번에 접목 부위로 옮길 수 있기때문에(그림 …

Discussion

이 원고에서, 우리는 약물없는 IVA에 대한 상세한 실험실 프로토콜을 보여 주었다. 약물 없는 IVA는 난소 의 성장을 촉진하기 위해 난소 예비를 감소시키는 POR 환자를위한 불임 치료의 새로운 접근법으로, 난소 자극 후 더 성숙한 난모를 산출하고 성공적인 임신^20에서증가합니다. 감소하는 난소 예비를 가진 15명의 POR 환자에서, 이 접근법은 1개의 자발적인 임신을 달성했습니다, 체…

Materials

4.5 onz specimen container	FALCON	354013	Other products may also be suitable
60mm dish	FALCON	351007	Other products may also be suitable
50 x 50 cm sterile drape	HOGY Medical	SR-823	Any type of sterile produsts may also be suitable
Disposable pippete	FALCON	357575	Other products may also be suitable
Fine scissors, Curved	WPI	#14224-G	Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products
Hot plate	TOKAI HIT	TPiE-SP	Use at operation room to maintain the temperature of dishes containing ovarian tissue before transplantation
Human Serum Albumin Solution	Irvine Scientific	9988	Medium for handling ovarian tissue
IVA cannule	KITAZATO	446030 IVA-6030E	Specific cannula for tissue autografting
KAI medical Disposable scalpel	WPI	#5 10-A	Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products
Micro scissors, Curved	WPI	#503364	Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products
Modified HTF Medium-HEPES	Irvine Scientific	90126	Medium for handling ovarian tissue
Sterile gauze	Osaki Medical	15004	Any type of sterile produsts may also be suitable
Swiss Tweezers, Curved Tips	KAI	#504505	Although other products may also be suitable, we strongly recommend use this products