Summary
Este protocolo descreve um novo método para administrar medicamentos antirretrovirais combinacionais orais que suprimem com sucesso a replicação do RNA do HIV-1 em camundongos humanizados.
Abstract
A pandemia do vírus da imunodeficiência humana (HIV-1) continua a se espalhar incessantemente em todo o mundo e, atualmente, não há vacina disponível contra o HIV. Embora a terapia antirretroviral combinacional (cTARV) tenha sido bem-sucedida na supressão da replicação viral, ela não pode erradicar completamente o reservatório de indivíduos infectados pelo HIV. Uma estratégia de cura segura e eficaz para a infecção pelo HIV exigirá métodos multifacetados e, portanto, os avanços dos modelos animais para a infecção pelo HIV-1 são fundamentais para o desenvolvimento da pesquisa de cura do HIV. Camundongos humanizados recapitulam as principais características da infecção pelo HIV-1. O modelo de camundongo humanizado pode ser infectado pelo HIV-1 e a replicação viral pode ser controlada com regimes de cTARV. Além disso, a interrupção da cART resulta em um rápido rebote viral em camundongos humanizados. No entanto, a administração de cART ao animal pode ser ineficaz, difícil ou tóxica, e muitos regimes de cART clinicamente relevantes não podem ser utilizados de forma ideal. Além de ser potencialmente insegura para os pesquisadores, a administração de cART por um procedimento de injeção diária intensiva comumente usado induz o estresse pela contenção física do animal. O novo método de cART oral para tratar camundongos humanizados infectados pelo HIV-1 descrito neste artigo resultou na supressão da viremia abaixo do nível de detecção, aumento da taxa de restauração CD4+ e melhoria da saúde geral em camundongos humanizados infectados pelo HIV-1.
Introduction
A expectativa de vida de indivíduos infectados pelo vírus da imunodeficiência humana crônica (HIV) melhorou significativamente com o tratamento antirretroviral combinatório (cTARV)1,2. A cTARV reduz com sucesso a replicação do HIV-1 e aumenta a contagem de células T CD4+ para a normalidade na maioria dos participantes cronicamente infectados pelo HIV-13, resultando em melhora da saúde geral e redução drástica da progressão da doença4. No entanto, o reservatório latente do HIV-1 é estabelecido mesmo quando a TARV é iniciada durante a infecção aguda 5,6,7. Os reservatórios persistem ao longo dos anos durante a TARV e o rápido rebote viral após a interrupção da TARV está bem documentado 8,9. Pessoas vivendo com HIV em TARV também estão predispostas a um maior risco de comorbidades como doenças cardiovasculares, câncer e distúrbios neurológicos10,11,12. Portanto, uma cura funcional para o HIV é necessária. Modelos animais para a infecção pelo HIV-1 oferecem vantagens óbvias no desenvolvimento e validação de novas estratégias de cura do HIV13,14,15. Camundongos humanizados, como modelo animal de pequeno porte, podem proporcionar reconstituição de células imunes humanas multilinhagem em diferentes tecidos, o que permite o estudo minucioso da infecção pelo HIV16,17,18,19. Dentre os modelos humanizados, o modelo humanizado de medula óssea-fígado-timo (BLT) recapitula com sucesso a infecção crônica pelo HIV-1, bem como as respostas imunes humanas funcionais à infecção pelo HIV-1 20,21,22,23,24. Portanto, o modelo humanizado de camundongo BLT tem sido amplamente utilizado para investigar diversos aspectos no campo da pesquisa sobre HIV. Camundongos BLT humanizados não são apenas modelos bem estabelecidos para a recapitulação da infecção persistente pelo HIV-1 e patogênese, mas também ferramentas consequentes para a avaliação de estratégias de intervenção baseadas em terapia celular. Os autores atuais e outros demonstraram que o modelo humanizado de camundongos BLT recapitula a infecção persistente pelo HIV-1 e a patogênese 25,26,27 e fornece ferramentas para avaliar estratégias de intervenção baseadas em terapia celular 28,29,30,31,32,33 .
Os esquemas de cTARV que consistem em combinações de medicamentos antirretrovirais que são tomados diariamente suprimem a replicação do HIV-1 a ponto de a carga viral em indivíduos tratados com sucesso permanecer indetectável a longo prazo34. Os resultados do tratamento de camundongos humanizados infectados pelo HIV com regimes de TARV clinicamente relevantes assemelham-se aos observados em indivíduos infectados pelo HIV-1 tratados com TARV22: os níveis de HIV-1 são suprimidos abaixo dos limites de detecção e interrupção dos resultados da cART em um rebote da replicação do HIV do reservatório latente35. A injeção subcutânea (SC)27,36,37 ou intraperitoneal (IP)37,38,39 é a via comumente utilizada para o tratamento da cART em camundongos humanizados. No entanto, a injeção diária intensiva induz estresse aos animais pela contenção física40. Também é trabalhoso e potencialmente inseguro para os pesquisadores devido ao aumento da exposição ao HIV durante o uso de objetos cortantes. A administração oral é ideal para imitar a absorção, distribuição e excreção de medicamentos cART que são tomados por indivíduos infectados pelo HIV-1. A administração oral geralmente envolve procedimentos personalizados e muitas vezes trabalhosos para colocar os medicamentos antirretrovirais em alimentos esterilizados (necessários devido à imunodeficiência dos camundongos) 24,37,41 ou água 42,43,44,45,46 , que pode ou não ser quimicamente compatível com muitos medicamentos antirretrovirais, ou resultar em algo que os ratos não comeriam ou beberiam prontamente (o que afetaria a dose e os níveis de drogas no corpo). O novo método de administração de cART peroral proposto aqui supera as tentativas de parto anteriores devido à sua compatibilidade com diferentes tipos de medicamentos antirretrovirais, segurança e facilidade de preparação e administração, e redução do estresse e ansiedade animal resultantes da injeção diária.
Tenofovir disoproxil fumarato (TDF), Elvitegravir (ELV) e Raltegravir (RAL) são drogas pouco solúveis em água. Curiosamente, o aumento da biodisponibilidade do TDF é observado com alimentos gordurosos, sugerindo que a inibição competitiva das lipases por alimentos gordurosos pode fornecer certa proteção para o TDF47. Portanto, os copos DietGel Boost foram selecionados para substituir a ração regular de roedores como método de entrega com base em seu modesto teor de gordura (20,3 g por 100 g) em comparação com a ração regular de roedores (10 g por 100 g) e uma dieta típica rica em gordura de camundongo (40-60 g por 100 g)48. O peso total de um copo é de 75 g; assim, cada xícara conterá a quantidade de alimento e, portanto, droga, suficiente para cinco ratos ao longo de 3 dias.
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Protocol
O tecido fetal humano anonimizado foi adquirido comercialmente. A pesquisa em animais foi realizada de acordo com protocolos aprovados pela Universidade da Califórnia, Los Angeles, e pelo Comitê de Pesquisa Animal (ARC) (UCLA), de acordo com todas as diretrizes federais, estaduais e locais. Especificamente, todos os experimentos foram realizados de acordo com as recomendações e diretrizes para alojamento e cuidado de animais de laboratório dos Institutos Nacionais de Saúde (NIH) e da Associação para a Avaliação e Acreditação de Cuidados com Animais de Laboratório (AALAC) Internacional sob o Número de Protocolo UCLA ARC 2010-038-02B. Todas as cirurgias foram realizadas sob anestesia com cetamina (100 mg/kg)/xilazina (5 mg/kg) e isoflurano (2-3 vol%) e todos os esforços foram feitos para minimizar a dor e o desconforto dos animais.
1. Camundongos humanizados infectados com HIV-1
NOTA: Camundongos humanizados foram construídos conforme descrito anteriormente em30,31,49. O protocolo é brevemente descrito abaixo.
- Purificar as células progenitoras hematopoiéticas CD34+ do fígado fetal humano através de microesferas anti-CD34 de acordo com o protocolo do fabricante.
- Anestesiar camundongos machos e fêmeas NOD/SCID/IL2Rγ−/− (NSG) de 6-8 semanas de idade e irradiar subletalmente (2,7 Gy) antes da cirurgia.
- Implante timo, derivado do mesmo doador que o fígado fetal, sob a cápsula renal junto com o fígado.
- Após a implantação, injete camundongos com 0,5 milhão a um milhão de células CD34+, por via intravenosa.
- Após 8-10 semanas, recolher 100 μL de sangue de rato através de sangria retro-orbital50 em tubos de microcentrífuga contendo 5 μL de EDTA e centrífuga a 350 x g durante 3 min.
- Armazenar o plasma a -80 °C para monitorizar a carga viral após o rato ter sido infectado com o VIH-1. Adicione 2 mL de solução de NH4C a 83% e incube por 5 minutos à temperatura ambiente para lisar os glóbulos vermelhos.
- Adicione 10 mL de RPMI com 10% de soro fetal bovino (FBS) para interromper a lise. Gire a 300 x g por 5 min.
- Aspirar sobrenadante. Células corantes com painel de anticorpos (ver Tabela de Materiais) e analisar por citometria de fluxo para verificar o enxerto de células imunes humanas.
- Infectar camundongos que exibem mais de 50% das células CD45+ circulantes por injeção de veia retroorbital51,52 com pelo menos 200 ng de p24 de uma cepa HIV-1 (ou seja, NFNSXSL9 30,53,54) usando uma seringa de insulina. Coletar sangue quinzenalmente para análise de citometria de fluxo e para medir a carga viral.
2. Preparação de medicamentos antirretrovirais
- Pesar drogas individuais; por exemplo, para fazer 10 copos de alimentos com cART, use raspadores de células estéreis para pesar 250 mg de FTC (Emtricitabina), 375 mg de TDF e 500 mg de RAL ou ELV em tubos de centrífuga estéril de 15 mL individuais em um gabinete de biossegurança.
- Adicionar 1 mL de DMSO em tubo FTC de 250 mg (concentração final de 250 mg/mL), adicionar 1,5 mL de DMSO em tubo de TDF de 375 mg (concentração final de 250 mg/mL) e adicionar 1mL de DMSO em tubo de 500 mg de RAL ou ELV (concentração final de 500 mg/mL). Mexa ou pipete a mistura de drogas até que esteja totalmente dissolvida e uma solução clara seja obtida.
- Use um filtro de membrana PVDF hidrofílico de tamanho de poro de 0,22 μM para esterilizar soluções com uma seringa estéril. Soluções medicamentosas individuais podem ser armazenadas a -20 °C por 12 semanas.
- Quando estiver pronto a utilizar, descongelar recentemente uma alíquota de cada solução medicamentosa a 37 °C até que a solução se torne límpida. Misture bem usando uma pipeta.
- Combine drogas e misture bem para compor a mistura mestre: 1 mL de FTC em DMSO, 1,5 mL de TDF em DMSO e 1 mL de ELV ou RAL em DMSO.
NOTA: Esta quantidade fará 10 xícaras de comida. - Adicione 350 μL de solução de mistura master cART em um copo para fazer um copo cART DietGel Boost.
- Adicionar 0,75 ml de Sulfametoxazol-Trimetoprima (concentração final de 0,48 mg/ml) ao copo.
- Mexa bem usando 1 mL de pontas de pipeta estéreis.
- Aliquote o copo de comida contendo cART do copo original com uma microespátula em uma placa de Petri de 60 mm, conforme necessário. Pese o alimento em uma balança para calcular a quantidade de copo de alimento contendo cART para cada gaiola de acordo com o número de camundongos.
3. Administração de medicamentos antirretrovirais em camundongos infectados pelo HIV-1
- Remova a ração regular da gaiola e substitua-a por um copo de comida contendo cART.
NOTA: Em média, um rato vai comer até 5 g de comida por dia. Aproximadamente um copo de comida pode ser administrado a cinco ratos por 2 dias. - Atualize a comida cART três vezes por semana.
- Pesar copos usados para monitorar a ingestão. Pese os ratos semanalmente para confirmar o consumo.
4. Monitore a carga viral por PCR em tempo real
- Avaliar as células imunes humanas (níveis de células T CD4 e CD8) e a replicação do HIV-1 em camundongos BLT a cada 2 semanas por sangramento retroorbital. Colha o plasma seguindo as instruções nas etapas 1.5-1.8.
- Monitore as cargas virais plasmáticas de camundongos infectados com HIV-1 antes e durante a administração oral de cART por 8 semanas. Extrair o RNA viral plasmático do plasma usando um kit de extração de RNA viral e quantificá-lo por PCR em tempo real usando os primers e sondas (ver Tabela de Materiais) conforme descrito anteriormente 27,30,31. Use o seguinte protocolo de ciclismo: 48 °C (15 min), 95 °C (10 min), depois pedale 95 °C (15 s), 60 °C (1 min) por 45 ciclos.
5. Avaliar as relações CD4/CD8 por citometria de fluxo
- Prepare suspensões unicelulares do sangue periférico de hemorragias quinzenais seguindo os passos 1.5-1.8.
- Células corantes com marcadores de superfície e analisadas por citometria de fluxo. Utilizar os seguintes anticorpos marcadores de superfície 27,30,43,49 na citometria de fluxo: CD45 (clone HI30), CD8 (clone SK1), CD3 (clone OKT3), CD4 (clone RPA-T4)27,30,42,49.
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Representative Results
Supondo que um rato médio pesando 25 g consuma 4 g de alimento por dia, a dose diária do medicamento através da ingestão oral corresponde a 2,88 mg/kg TFV, 83 mg/kg FTC e 768 mg/kg RAL. Para testar se o regime alimentar otimizado é tóxico e influencia a saúde geral em comparação com a injeção diária de cART, o peso dos ratos foi monitorado semanalmente antes e durante a cART através de injeção oral ou subcutânea. Não houve diferenças significativas de peso antes da administração da TARV em cada grupo (Figura 1). No entanto, o peso do rato diminuiu continuamente durante a injeção diária de cART SC. Em contraste, FTC/TDF/ELV ou FTC/TDF/RAL no DietGel restauraram os pesos dos ratos aos níveis de iniciação pré-TARV após 5 semanas de administração oral de TARV. Além disso, não foram observadas alterações significativas de peso entre os grupos Raltegravir ou Elvitegravir.
Para testar se a administração oral de cART suprime a carga viral de forma tão eficaz quanto uma injeção diária, as cargas virais plasmáticas quinzenais foram avaliadas usando RT-PCR. A Figura 2 mostra que o regime alimentar FTC/TDF/ELV ART suprimiu 100% eficientemente a replicação viral para níveis indetectáveis dentro de 4 semanas; O regime alimentar FTC/TDF/RAL ART pode suprimir 80% dos ratos a níveis indetectáveis dentro de 4 semanas, enquanto apenas 70% dos ratos que receberam injeção de SC atingiram níveis indetectáveis após 4 semanas de tratamento. Os resultados demonstraram que a administração oral suprime a replicação viral de forma mais rápida e eficiente do que a injeção de SC. Além disso, o regime alimentar de cART impediu o declínio adicional das relações CD4/CD8 no sangue periférico antes da injeção diária de SC (Figura 3). Esses resultados sugeriram que o regime de cART oral proposto pode suprimir com sucesso a viremia plasmática abaixo do nível de detecção, restaurar rapidamente os níveis de células T CD4 e melhorar a saúde geral dos animais em camundongos humanizados infectados pelo HIV-1.
Figura 1: O peso corporal do rato muda antes e durante o tratamento com cART após a infecção pelo HIV-1 em diferentes grupos. Camundongos humanizados foram infectados com HIVNFNSXSL9 após reconstituição imunológica. Após 4 semanas de infecção pelo HIV-1, os camundongos foram tratados por mais 7,5 semanas com o regime FTC/TDF/RAL através de injeção subcutânea (SC) ou pela administração oral de FTC/TDF/RAL ou FTC/TDF/ELV. Os pesos corporais dos ratos foram medidos a partir de 1 semana antes da infecção pelo HIV. Todas as comparações estatísticas foram realizadas utilizando-se o teste de Mann-Whitney, relatando a média dos grupos (± S.E.). As estrelas de asterisco verde mostram diferenças estatísticas entre o grupo oral alimentar FTC/TDF/ELV e o grupo de injeção FTC/TDF/RAL SC. *P < 0,05, **P < 0,01, ***P < 0,001. n=6-7 em cada grupo. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: A administração oral de cART alimentar mostra supressão viral mais rápida. Conforme descrito na Figura 1, os camundongos não foram tratados ou tratados com o regime FTC/TDF/RAL por meio de injeção subcutânea e pela administração oral de esquemas alimentares simulados, FTC/TDF/RAL ou FTC/TDF/ELV por mais 7,5 semanas. (A) Carga viral plasmática ao longo do tempo após a infecção pelo HIV-1 em diferentes grupos. (B) Resumo da carga viral ao longo do tempo após a infecção pelo HIV-1 em diferentes grupos, relatando média geométrica do grupo com intervalo de confiança (IC) de 95%. Setas pretas indicam o tempo de início da cART para os grupos tratados com cTARV. (C) Análise da sobrevida do tempo pós-tratamento da TARV à carga viral indetectável para cada grupo. n= 6-7 em cada grupo. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: As administrações orais de alimentos ART mostram restauração mais rápida da relação CD4/CD8. Relação CD4/CD8 no sangue periférico ao longo do tempo após a infecção pelo HIV-1 para cada grupo. Todas as comparações estatísticas foram realizadas por meio do teste de Mann-Whitney, relatando a média dos grupos (± S.E.). As estrelas de asterisco vermelho mostram diferenças estatísticas entre o grupo oral de alimentos FTC/TDF/RAL e o grupo de injeção de FTC/TDF/RAL SC. *P < 0,05. n=6-7 em cada grupo. Por favor, clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
Um método de administração oral de cART é desenvolvido aqui para camundongos humanizados infectados pelo HIV-1, combinando três medicamentos antirretrovirais em alimentos ricos em nutrientes. Em comparação com a administração por injeções diárias, o parto oral é mais fácil de usar, limita a frequência de administração, reduz o manuseio dos animais, minimiza o estresse e melhora a segurança55. Até este ponto, apenas alguns estudos em camundongos humanizados 24,37,41 utilizaram pellets de alimentos contendo drogas antirretroviral esmagadas para o tratamento de camundongos. No entanto, este método é um desafio para aplicar amplamente devido ao acesso limitado à fabricação de pellets de alimentos especiais. Outros estudos 42,43,44,45,46 utilizaram água potável como sistema de entrega de TARV. No entanto, a composição de um medicamento em água potável pode alterar a estabilidade, pureza ou mesmo potência dos ingredientes ativos. Além disso, muitos medicamentos antirretrovirais, incluindo TDF, RAL e ELV, são pouco solúveis em água. Estudos têm demonstrado que a biodisponibilidade oral do TDF foi aumentada em 40% após uma refeição rica em gordura56, sugerindo que a inibição competitiva das lipases pelos alimentos pode fornecer certa proteção para o TDF57. DietGel Boost é um suplemento alimentar que fornece produtos de hidratação, nutrição e enriquecimento que melhoram o bem-estar geral dos animais de pesquisa58. O gel fortificado com nutrientes consiste em 25% a 30% de água pura com adição de carboidratos, proteínas, gorduras, minerais e eletrólitos, e é certificado livre de fitoestrógenos e nitrosaminas58. Ele fornece uma alternativa econômica, eficaz e eficiente em termos de trabalho para dietas de purê58. Uma vez que 20,3% da gordura total foi incluída no copo Boost, propomos que altos níveis de nutrientes podem dissolver melhor o TDF e, portanto, aumentar sua biodisponibilidade oral. Portanto, uma alta suspensão alimentar de nutrientes foi utilizada para administrar os medicamentos cART para imitar a entrega peroral de medicamentos cART que os indivíduos infectados pelo HIV-1 usam atualmente.
Os camundongos têm um metabolismo maior do que os humanos e, assim, a dose dos compostos distintos foi convertida e utilizada por uma fórmula descrita na referência59. Doses humanas de 0,4 mg (dose total) de RAL, 0,1 mg (dose total) de FTC e 2,14 mg (dose total) de TDF foram convertidas com base no fator de correção (Km, estimado dividindo o peso corporal médio (kg) da espécie pela sua área de superfície corporal (m2)) para estimar os valores de dose equivalente do rato de 37 (Km) e 3 (Km) para humanos e ratinhos59, respectivamente. Considerando a solubilidade relativamente baixa de TDF, RAL e ELV em água, o DMSO foi usado aqui como solvente para drogas cART. A concentração final de DMSO contida no alimento cART oral é de 0,0059% (v/v). A concentração de DMSO é muito baixa e relativamente segura como solvente de fármaco60,61,62,63. É importante ressaltar que nenhuma perda de pelo ou quaisquer mudanças de comportamento em camundongos foram observadas nesses estudos.
O procedimento descrito acima é um método de entrega de cART altamente robusto e repetível para o tratamento de camundongos humanizados infectados pelo HIV-1. Este protocolo pode ser seguido facilmente. As etapas críticas no protocolo são 1) manter estéril todo o processo de qualquer material envolvido no protocolo relacionado ao alimento DietGel considerando a imunodeficiência dos camundongos humanizados, e 2) evitar múltiplas soluções de estoque de cART de descongelamento / congelamento e alíquota de medicamentos cART adequadamente de acordo com o número e grupos de camundongos. Os dados sugerem que a administração oral de cART de três drogas (ETFD, FCT e RAL ou ELV) pré-misturadas dentro do copo de alimentos suprime eficientemente a replicação do HIV-1 e reduz a carga viral no plasma para níveis indetectáveis dentro de 4 semanas de tratamento. A administração oral de alimentos cART não só impediu um declínio adicional nas células T CD4, mas também resultou em um aumento da porcentagem de células T CD4 no sangue periférico. Além disso, o método de administração oral de cART restaurou o peso do rato mais rapidamente do que a injeção diária e melhorou a saúde geral.
É importante ressaltar que esse método removeu o risco de exposição do pesquisador a objetos perfurocortantes durante a injeção diária de drogas cART em camundongos humanizados infectados pelo HIV-1. O método proposto que suprime com sucesso a replicação do RNA do HIV-1 em camundongos humanizados será altamente valioso para estudos pré-clínicos de prova de conceito para o desenvolvimento de novos tratamentos de cura que imitam de perto a administração de medicamentos em indivíduos infectados crônicos pelo HIV-1 tratados com cART.
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Disclosures
A SK é fundadora da CDR3 Inc. Os demais autores declaram que a pesquisa foi realizada na ausência de quaisquer relações comerciais ou financeiras que pudessem ser interpretadas como um potencial conflito de interesses.
Acknowledgments
Gostaríamos de agradecer aos Drs. Romas Geleziunas e Jeff Murry e ao pessoal da Gilead por fornecerem os medicamentos antirretrovirais utilizados neste estudo. Este trabalho foi financiado pelo NCI 1R01CA239261-01 (to Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core e Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PIs: Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (para Zhen), NIAID R2120200174 (PIs: Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). Este trabalho também foi apoiado pelo UCLA AIDS Institute, o James B. Pendleton Charitable Trust e a McCarthy Family Foundation.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
60 mm petri dish | Thermo Scientific Nunc | 150288 | For aliquoting ART food |
APC anti-human CD8 Antibody | Biolegend | 344722 | For flow cytometry |
BD LSRFortessa | BD biosciences | For flow data collection | |
CD34 microbeads | Miltenyi Biotec | 130-046-702 | For NSG-BLT mice generation |
Centrifuge tubes | Falcon | 14-432-22 | For dissolving ART |
DietGel Boost | ClearH2O | 72-04-5022 | For making ART food |
Elvitegravir | Gilead | Gifted from Gilead | |
Emtricitabine | Gilead | Gifted from Gilead | |
FITC anti-human CD3 Antibody | Biolegend | 317306 | For flow cytometry |
Flowjo software | FlowJo | For flow cytometry data analysis | |
HIV-1 forward primer: 5′-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3′; | IDT | Customized | For viral load RT-PCR |
HIV-1 probe: 5′-[6-FAM]CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q]-3′; |
IDT | Customized | For viral load RT-PCR |
HIV-1 reverse primer: 5′-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3′; | IDT | Customized | For viral load RT-PCR |
Human fetal tissue | Advanced Bioscience Resources, Inc | ||
Mice, strain NOD.Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ | The Jackson Laboratory | 5557 | For constructing the humanized mice |
Pacific Blue anti-human CD45 | Biolegend | 304022 | For flow cytometry |
PerCP anti-human CD4 Antibody | Biolegend | 300528 | For flow cytometry |
QIAamp Viral RNA Kits | Qiagen | 52904 | For measuring viral load |
Raltegravir | Merck | Gifted from Merck | |
Sterile cell scrapers | Thermo Scientific | 179693 | For aliquoting ART food |
TaqMan RNA-To-Ct 1-Step Kit | Applied Biosystems | 4392653 | For plasma viral load detection |
Tenofovir disoproxil fumarate | Gilead | Gifted from Gilead | |
Trimethoprim-Sulfamethoxazole | Pharmaceutical Associates | NDC 0121-0854-16 | For keeping ART food sterile. Each 5mL teaspoon contains 200 mg Sulfamethoxazole, USP 40 mg Trimethoprim, USP NMT 0.5% Alcohol |
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