JoVE Journal > Neuroscience
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Résultats
Discussion
Divulgations
Acknowledgements
Materials
References
Traduction automatique
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Neurosciences

الخلايا العصبية تحت المهاد كيسبيبتين كهدف لتسجيلات المشبك التصحيحي للخلية الكاملة

Published: March 17, 2023
doi:
10.3791/64989
, , ,
1Department of Anatomy, Instituto de Ciencias Biomedicas,Universidade de Sao Paulo

Summary

هنا ، نقدم بروتوكولا لإجراء مشبك رقعة خلية كاملة على شرائح الدماغ التي تحتوي على خلايا كيسبيبتين العصبية ، المغير الأساسي لخلايا الهرمون المطلق للغدد التناسلية (GnRH). من خلال إضافة المعرفة حول نشاط الخلايا العصبية kisspeptin ، كانت هذه الأداة الكهربية بمثابة الأساس لتطورات كبيرة في مجال الغدد الصماء العصبية على مدى السنوات ال 20 الماضية.

Abstract

Kisspeptins ضرورية لنضوج محور الغدة النخامية والغدد التناسلية (HPG) والخصوبة. الخلايا العصبية تحت المهاد kisspeptin الموجودة في النواة الأمامية البطنية المحيطة بالبطين والنواة حول البطين المنقارية ، وكذلك النواة المقوسة في منطقة ما تحت المهاد ، تسقط على الخلايا العصبية لهرمون إفراز الغدد التناسلية (GnRH) ، من بين خلايا أخرى. أظهرت الدراسات السابقة أن إشارات كيسبيبتين تحدث من خلال مستقبل Kiss1 (Kiss1r) ، مما يؤدي في النهاية إلى إثارة نشاط الخلايا العصبية GnRH. في البشر والنماذج الحيوانية التجريبية ، تكون القبلات كافية للحث على إفراز GnRH ، وبالتالي إطلاق الهرمون اللوتيني (LH) والهرمون المنشط للجريب (FSH). نظرا لأن kisspeptins تلعب دورا أساسيا في الوظائف الإنجابية ، يعمل الباحثون على تقييم كيفية مساهمة النشاط الجوهري للخلايا العصبية تحت المهاد في الإجراءات المتعلقة بالتكاثر وتحديد الناقلات العصبية / المعدلات العصبية الأولية القادرة على تغيير هذه الخصائص. أصبحت تقنية مشبك التصحيح للخلية الكاملة أداة قيمة للتحقيق في نشاط الخلايا العصبية كيسبيبتين في خلايا القوارض. تسمح هذه التقنية التجريبية للباحثين بتسجيل وقياس التيارات الأيونية المثيرة والمثبطة التلقائية ، وإمكانات غشاء الراحة ، وإطلاق جهد الفعل ، وغيرها من الخصائص الكهربية لأغشية الخلايا. في هذه الدراسة ، تتم مراجعة الجوانب الحاسمة لتقنية مشبك التصحيح للخلية بأكملها ، والمعروفة باسم القياسات الكهربية الفسيولوجية التي تحدد الخلايا العصبية تحت المهاد كيسبيبتين ، ومناقشة القضايا ذات الصلة حول هذه التقنية.

Introduction

قام هودجكين وهكسلي بأول سجل داخل الخلايا لجهد الفعل الموصوف في العديد من الدراسات العلمية. تم إجراء هذا التسجيل على محور الحبار ، الذي يبلغ قطره الكبير (~ 500 ميكرومتر) ، مما يسمح بوضع قطب كهربائي دقيق داخل المحور. قدم هذا العمل إمكانيات كبيرة للبحث العلمي ، وبلغت ذروتها لاحقا في إنشاء وضع مشبك الجهد ، والذي تم استخدامه لدراسة الأساس الأيوني لتوليد جهد العمل1،2،3،4،5،6،7،8. على مر السنين ، تم تحسين هذه التقنية ، وأصبحت مطبقة على نطاق واسع في البحث العلمي 6,9. اختراع تقنية التصحيح المشبك، الذي حدث في أواخر سبعينيات القرن العشرين من خلال الدراسات التي بدأها إروين نيهر وبيرت ساكمان، سمح للباحثين لتسجيل القنوات أيون واحد وإمكانات الغشاء داخل الخلايا أو التيارات في كل نوع من الخلايا تقريبا باستخدام قطب كهربائي واحد فقط9،10،11،12. يمكن إجراء تسجيلات المشبك الرقعي على مجموعة متنوعة من مستحضرات الأنسجة ، مثل الخلايا المستزرعة أو شرائح الأنسجة ، إما في وضع مشبك الجهد (تثبيت غشاء الخلية عند جهد محدد يسمح بتسجيل ، على سبيل المثال ، التيارات المعتمدة على الجهد والتيارات المشبكية) أو وضع المشبك الحالي (مما يسمح بتسجيل ، على سبيل المثال ، التغيرات في جهد غشاء الراحة الناجم عن التيارات الأيونية ، إمكانات الفعل ، وتردد جهد ما بعد المشبكي).

جعل استخدام تقنية التصحيح المشبك العديد من الاكتشافات البارزة ممكنة. في الواقع ، فإن النتائج المنوية حول الخصائص الفيزيولوجية الكهربية للخلايا العصبية تحت المهاد kisspeptin الموجودة في النواة المحيطة بالبطين الأمامي البطني والمنقار حول البطين (AVPV / PeN Kisspeptin) ، والمعروفة أيضا باسم المنطقة المحيطة بالبطين المنقاري للبطين الثالث (RP3V) ، والنواة المقوسة لما تحت المهاد (ARH kisspeptin)13،14،15 ذات أهمية خاصة. في عام 2010 ، أجرى Ducret et al. التسجيلات الأولى للخلايا العصبية AVPV /PeN Kisspeptinفي الفئران باستخدام أداة فيزيولوجية كهربية أخرى ، وهي تقنية مشبك التصحيح للخلايا السائبة. قدمت هذه الدراسات وصفا كهربائيا للخلايا العصبية AVPV / PeNKisspeptin وأظهرت أن أنماط إطلاقها تعتمد على الدورة16. في عام 2011 ، استخدم Qiu et al. تقنية مشبك تصحيح الخلية بالكامل لإثبات أن الخلايا العصبية ARHkisspeptin تعبر عن تيارات جهاز تنظيم ضربات القلب الداخلي17. في وقت لاحق ، أظهر Gottsch et al. أن الخلايا العصبية kisspeptin تظهر نشاطا عفويا وتعبر عن كل من تيارات الكالسيوم من النوع h (جهاز تنظيم ضربات القلب) وتيارات الكالسيوم من النوع T ، مما يشير إلى أن الخلايا العصبيةARH kisspeptin تشترك في الخصائص الفيزيولوجية الكهربية مع الخلايا العصبية الأخرى لجهاز تنظيم ضربات القلب في الجهاز العصبي المركزي18. بالإضافة إلى ذلك ، فقد ثبت أن الخلايا العصبية ARH kisspeptin تظهر معدلات إطلاق ثنائية الشكل جنسيا وأن الخلايا العصبية AVPV /PeN Kisspeptin تظهر إمكانات غشاء استراحة ثنائية النمط (RMP) تتأثر بقنوات البوتاسيوم الحساسة ل ATP (KATP) 19,20. علاوة على ذلك ، ثبت أن المنشطات التناسلية تؤثر بشكل إيجابي على النشاط الكهربائي التلقائي للخلايا العصبية kisspeptin في الفئران19،20،21. تم ذكر الأعمال الأولى التي تدرس الخصائص الكهربية للخلايا العصبية كيسبيبتين16،17،18،19،20. منذ ذلك الحين ، استخدمت العديد من الدراسات تقنية مشبك التصحيح للخلية بأكملها لإثبات العوامل / المعدلات العصبية الكافية لتعديل النشاط الكهربائي للخلايا العصبية كيسبيبتين (الشكل 1)17،21،22،23،24،25،26،27،28،29،30، 31,32.

نظرا لأهمية هذه التقنية لدراسة الخلايا العصبية المطلوبة للتكاثر ، من بين أنواع الخلايا الأخرى التي لا يتم تناولها هنا ، تصف هذه المقالة الخطوات الأساسية لتطوير تقنية مشبك التصحيح للخلية بأكملها ، مثل تحضير المحاليل ، وتشريح الدماغ وتقطيعه ، وإجراء ختم غشاء الخلية للتسجيلات. علاوة على ذلك ، تتم مناقشة القضايا ذات الصلة حول التقنية ، مثل مزاياها والقيود الفنية والمتغيرات المهمة التي يجب التحكم فيها للحصول على الأداء التجريبي الأمثل.

Protocol

تمت الموافقة على جميع الإجراءات الحيوانية من قبل لجنة أخلاقيات الحيوانات التابعة لمعهد العلوم الطبية الحيوية في جامعة ساو باولو وتم تنفيذها وفقا للمبادئ التوجيهية الأخلاقية التي اعتمدتها الكلية البرازيلية للتجارب على الحيوانات. 1. إعداد الحلول إعداد الحل ا…

Representative Results

لدراسة الآثار المحتملة لهرمون النمو البشري المؤتلف (hGH) على نشاط الخلايا العصبية تحت المهاد ، أجرينا تسجيلات مشبك رقعة للخلية الكاملة في شرائح الدماغ وقيمنا ما إذا كان هذا الهرمون يسبب تغيرات حادة في نشاط الخلايا العصبية AVPV / PeNKisspeptin و ARHkisspeptin. تم استخدام إناث Kiss1-Cre / GFP البالغة (م…

Discussion

كان لتطوير تقنية المشبك التصحيحي للخلية الكاملة تأثير كبير على المجتمع العلمي ، حيث تعتبر ذات أهمية قصوى لتطوير البحث العلمي وتمكين العديد من الاكتشافات. كان تأثيره على العلم كافيا ليتوج بجائزة نوبل في الطب في عام 1991 ، حيث فتح هذا الاكتشاف الباب أمام فهم أفضل لكيفية عمل القنوات الأيونية ف…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

تم دعم هذه الدراسة من قبل مؤسسة أبحاث ساو باولو [أرقام منح FAPESP: 2021/11551-4 (JNS) ، 2015/20198-5 (TTZ) ، 2019/21707/1 (RF) ؛ ومن قبل Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) – قانون المالية 001″ (HRV).

Materials

Compounds for aCSF, internal and slicing solutions
ATP Sigma Aldrich/various A9187
CaCl2 Sigma Aldrich/various C7902
D-(+)-Glucose Sigma Aldrich/various G7021
EGTA Sigma Aldrich/various O3777
HEPES Sigma Aldrich/various H3375
KCL Sigma Aldrich/various P5405
K-gluconate Sigma Aldrich/various G4500
KOH Sigma Aldrich/various P5958
MgCl2 Sigma Aldrich/various M9272
MgSO4 Sigma Aldrich/various 230391
NaCl Sigma Aldrich/various S5886
NaH2PO4  Sigma Aldrich/various S5011
NaHCO3 Sigma Aldrich/various S5761
nitric acid Sigma Aldrich/various 225711 CAUTION
Sucrose Sigma Aldrich/various S1888
Equipments
Air table TMC 63-534
Amplifier Molecular Devices Multiclamp 700B
Computer various –
DIGIDATA 1440 LOW-NOISE DATA ACQUISITION SYSTEM Molecular Devices DD1440
Digital peristaltic pump Ismatec ISM833C 
Faraday cage TMC 81-333-03
Imaging Camera Leica DFC 365 FX
Micromanipulator Sutter Instruments Roe-200
Micropipette Puller Narishige PC-10
Microscope Leica DM6000 FS
Osteotome Bonther equipamentos & Tecnologia/various 128
Recovery chamber Warner Instruments/Harvard apparatus – can be made in-house
Recording chamber Warner Instruments 640277
Spatula Fisher Scientific /various FISH-14-375-10; FISH-21-401-20
Vibratome  Leica VT1000 S
Water Bath  Fisher Scientific /various Isotemp
Software and systems
AxoScope 10 software Molecular Devices – Commander Software
LAS X wide field system Leica – Image acquisition and analysis
MultiClamp 700B Molecular Devices MULTICLAMP 700B Commander Software
PCLAMP 10 SOFTWARE FOR WINDOWS Molecular Devices Pclamp 10 Standard
Tools
Ag/AgCl electrode, pellet, 1.0 mm Warner Instruments 64-1309
Curved hemostatic forcep various –
cyanoacrylate glue LOCTITE/various –
Decapitation scissors various –
Filter paper various –
Glass capillaries (micropipette) World Precision Instruments, Inc TW150F-4
Iris scissors Bonther equipamentos & Tecnologia/various 65-66
Pasteur glass pipette  Sigma Aldrich/various CLS7095B9-1000EA
Petri dish various –
Polyethylene tubing  Warner Instruments 64-0756
Razor blade for brain dissection TED PELLA TEDP-121-1
Razor blade for the vibratome TED PELLA TEDP-121-9
Scissors Bonther equipamentos & Tecnologia/various 71-72, 48,49; 
silicone teat various –
Slice Anchor  Warner Instruments 64-0246
Syringe filters Merck Millipore Ltda SLGVR13SL Millex-GV 0.22 μm
Tweezers Bonther equipamentos & Tecnologia/various 131, 1518
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bezanilla, F. Single sodium channels from the squid giant axon. Biophysical Journal. 52 (6), 1087-1090 (1987).
  2. Clay, J. R. Potassium current in the squid giant axon. International Review of Neurobiology. 27, 363-384 (1985).
  3. Gandini, M. A., Sandoval, A., Felix, R. Patch-clamp recording of voltage-sensitive Ca2+ channels. Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (4), 329-325 (2014).
  4. Hodgkin, A. L., Huxley, A. F. A quantitative description of membrane current and its application to conduction and excitation in nerve. The Journal of Physiology. 117 (4), 500-544 (1952).
  5. Perkins, K. L. Cell-attached voltage-clamp and current-clamp recording and stimulation techniques in brain slices. Journal of Neuroscience Methods. 154 (1-2), 1-18 (2006).
  6. Suk, H. J., Boyden, E. S., van Welie, I. Advances in the automation of whole-cell patch clamp technology. Journal of Neuroscience Methods. 326, 108357 (2019).
  7. Cole, K. S., Curtis, H. J. Electric impedance of the squid giant axon during activity. The Journal of General Physiology. 22 (5), 649-670 (1939).
  8. Bernstein, J. Ueber den zeitlichen Verlauf der negativen Schwankung des Nervenstroms. Pflüger, Archiv für die Gesammte Physiologie des Menschen und der Thiere. 1 (1), 173-207 (1868).
  9. Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. J. Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches. Pflugers Archiv. 391 (2), 85-100 (1981).
  10. Hill, C. L., Stephens, G. J. An introduction to patch clamp recording. Methods in Molecular Biology. 2188, 1-19 (2021).
  11. Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260 (5554), 799-802 (1976).
  12. Sakmann, B., Neher, E. Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes. Annual Review of Physiology. 46, 455-472 (1984).
  13. Gottsch, M. L., et al. A role for kisspeptins in the regulation of gonadotropin secretion in the mouse. Endocrinology. 145 (9), 4073-4077 (2004).
  14. Smith, J. T., Cunningham, M. J., Rissman, E. F., Clifton, D. K., Steiner, R. A. Regulation of Kiss1 gene expression in the brain of the female mouse. Endocrinology. 146 (9), 3686-3692 (2005).
  15. Smith, J. T., et al. Differential regulation of KiSS-1 mRNA expression by sex steroids in the brain of the male mouse. Endocrinology. 146 (7), 2976-2984 (2005).
  16. Ducret, E., Gaidamaka, G., Herbison, A. E. Electrical and morphological characteristics of anteroventral periventricular nucleus kisspeptin and other neurons in the female mouse. Endocrinology. 151 (5), 2223-2232 (2010).
  17. Qiu, J., Fang, Y., Bosch, M. A., Rønnekleiv, O. K., Kelly, M. J. Guinea pig kisspeptin neurons are depolarized by leptin via activation of TRPC channels. Endocrinology. 152 (4), 1503-1514 (2011).
  18. Gottsch, M. L., et al. Molecular properties of Kiss1 neurons in the arcuate nucleus of the mouse. Endocrinology. 152 (11), 4298-4309 (2011).
  19. de Croft, S., et al. Spontaneous kisspeptin neuron firing in the adult mouse reveals marked sex and brain region differences but no support for a direct role in negative feedback. Endocrinology. 153 (11), 5384-5393 (2012).
  20. Frazão, R., et al. Shift in Kiss1 cell activity requires estrogen receptor alpha. The Journal of Neuroscience. 33 (7), 2807-2820 (2013).
  21. DeFazio, R. A., Elias, C. F., Moenter, S. M. GABAergic transmission to kisspeptin neurons is differentially regulated by time of day and estradiol in female mice. The Journal of Neuroscience. 34 (49), 16296-16308 (2014).
  22. Mansano, N. D. S., et al. Vasoactive intestinal peptide exerts an excitatory effect on hypothalamic kisspeptin neurons during estrogen negative feedback. Molecular and Cellular Endocrinology. 542, 111532 (2022).
  23. Jamieson, B. B., Piet, R. Kisspeptin neuron electrophysiology: Intrinsic properties, hormonal modulation, and regulation of homeostatic circuits. Frontiers in Neuroendocrinology. 66, 101006 (2022).
  24. Silveira, M. A., et al. STAT5 signaling in kisspeptin cells regulates the timing of puberty. Molecular and Cellular Endocrinology. 448, 55-65 (2017).
  25. Silveira, M. A., et al. Acute effects of somatomammotropin hormones on neuronal components of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. Brain Research. 1714, 210-217 (2019).
  26. Cravo, R. M., et al. Leptin signaling in Kiss1 neurons arises after pubertal development. PLoS One. 8 (3), e58698 (2013).
  27. Manfredi-Lozano, M., et al. Defining a novel leptin-melanocortin-kisspeptin pathway involved in the metabolic control of puberty. Molecular Metabolism. 5 (10), 844-857 (2016).
  28. Qiu, J., et al. Insulin excites anorexigenic proopiomelanocortin neurons via activation of canonical transient receptor potential channels. Cell Metabolism. 19 (4), 682-693 (2014).
  29. de Croft, S., Boehm, U., Herbison, A. E. Neurokinin B activates arcuate kisspeptin neurons through multiple tachykinin receptors in the male mouse. Endocrinology. 154 (8), 2750-2760 (2013).
  30. Frazao, R., et al. Estradiol modulates Kiss1 neuronal response to ghrelin. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 306 (6), E606-E614 (2014).
  31. True, C., Verma, S., Grove, K. L., Smith, M. S. Cocaine- and amphetamine-regulated transcript is a potent stimulator of GnRH and kisspeptin cells and may contribute to negative energy balance-induced reproductive inhibition in females. Endocrinology. 154 (8), 2821-2832 (2013).
  32. Navarro, V. M., et al. Regulation of NKB pathways and their roles in the control of Kiss1 neurons in the arcuate nucleus of the male mouse. Endocrinology. 152 (11), 4265-4275 (2011).
  33. Segev, A., Garcia-Oscos, F., Kourrich, S. Whole-cell patch-clamp recordings in brain slices. Journal of Visualized Experiments. (112), e54024 (2016).
  34. Gibson, A. G., Jaime, J., Burger, L. L., Moenter, S. M. Prenatal androgen treatment does not alter the firing activity of hypothalamic arcuate kisspeptin neurons in female mice. eNeuro. 8 (5), (2021).
  35. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain. Stereotaxic Coordinates. 2nd edition. , (2001).
  36. Cravo, R. M., et al. Characterization of Kiss1 neurons using transgenic mouse models. Neurosciences. 173, 37-56 (2011).
  37. Emane, M. N., Delouis, C., Kelly, P. A., Djiane, J. Evolution of prolactin and placental lactogen receptors in ewes during pregnancy and lactation. Endocrinology. 118 (2), 695-700 (1986).
  38. Fuh, G., Colosi, P., Wood, W. I., Wells, J. A. Mechanism-based design of prolactin receptor antagonists. The Journal of Biological Chemistry. 268 (8), 5376-5381 (1993).
  39. Barinaga, M. Ion channel research wins physiology Nobel. Science. 254 (5030), 380 (1991).
  40. Colquhoun, D. Neher and Sakmann win Nobel Prize for patch-clamp work. Trends in Pharmacological Sciences. 12 (12), 449 (1991).
  41. Greger, R. Nobel Prize for Medicine and Physiology 1991. Analysis of the function of single ion channel. Deutsche Medizinische Wochenschrift. 116 (48), 1849-1851 (1991).
  42. Brau, M. E., Vogel, W., Hempelmann, G. Possible applications of the "patch-clamp" method in anesthesiologic research; comment. Anasthesiologie, Intensivmedizin, Notfallmedizin, Schmerztherapie. 31 (9), 537-542 (1996).
  43. Cahalan, M., Neher, E. Patch clamp techniques: an overview. Methods in Enzymology. 207, 3-14 (1992).
  44. Kornreich, B. G. The patch clamp technique: principles and technical considerations. Journal of Veterinary Cardiology. 9 (1), 25-37 (2007).
  45. Neher, E., Sakmann, B. The patch clamp technique. Scientific American. 266 (3), 44-51 (1992).
  46. Sachs, F., Auerbach, A. Single-channel electrophysiology: use of the patch clamp. Methods in Enzymology. 103, 147-176 (1983).
  47. Dallas, M., Bell, D. . Patch Clamp Electrophysiology: Methods and Protocols. 1st edition. , (2021).
  48. Robinson, R. A., Stokes, R. H. . Electrolyte Solutions. 2nd edition. , (1959).
  49. de Souza, G. O., et al. Gap junctions regulate the activity of AgRP neurons and diet-induced obesity in male mice. The Journal of Endocrinology. 255 (2), 75-90 (2022).
  50. Houades, V., Koulakoff, A., Ezan, P., Seif, I., Giaume, C. Gap junction-mediated astrocytic networks in the mouse barrel cortex. The Journal of Neuroscience. 28 (20), 5207-5217 (2008).
  51. Richerson, G. B., Messer, C. Effect of composition of experimental solutions on neuronal survival during rat brain slicing. Experimental Neurology. 131 (1), 133-143 (1995).
  52. Pan, J. T., Li, C. S., Tang, K. C., Lin, J. Y. Low calcium/high magnesium medium increases activities of hypothalamic arcuate and suprachiasmatic neurons in brain tissue slices. Neuroscience Letters. 144 (1-2), 157-160 (1992).
  53. Hamill, O. P., McBride, D. W. Induced membrane hypo/hyper-mechanosensitivity: a limitation of patch-clamp recording. Annual Review of Physiology. 59, 621-631 (1997).
  54. Herbison, A. E., Moenter, S. M. Depolarising and hyperpolarising actions of GABA(A) receptor activation on gonadotrophin-releasing hormone neurones: towards an emerging consensus. Journal of Neuroendocrinology. 23 (7), 557-569 (2011).
  55. Qiu, J., et al. High-frequency stimulation-induced peptide release synchronizes arcuate kisspeptin neurons and excites GnRH neurons. eLife. 5, e16246 (2016).
  56. Chaves, F. M., Mansano, N. S., Frazão, R., Donato, J. Tumor necrosis factor α and interleukin-1β acutely inhibit AgRP neurons in the arcuate nucleus of the hypothalamus. International Journal of Molecular Sciences. 21 (23), 8928 (2020).
  57. Chaves, F. M., et al. Effects of the isolated and combined ablation of growth hormone and IGF-1 receptors in somatostatin neurons. Endocrinology. 163 (5), 045 (2022).
  58. Wasinski, F., et al. Growth hormone receptor in dopaminergic neurones regulates stress-induced prolactin release in male mice. Journal of Neuroendocrinology. 33 (3), e12957 (2021).
  59. Furigo, I. C., Ramos-Lobo, A. M., Frazao, R., Donato, J. Brain STAT5 signaling and behavioral control. Molecular and Cellular Endocrinology. 438, 70-76 (2016).
  60. Zampieri, T. T., et al. Postnatal overnutrition induces changes in synaptic transmission to leptin receptor-expressing neurons in the arcuate nucleus of female mice. Nutrients. 12 (8), 2425 (2020).
  61. Furigo, I. C., et al. Growth hormone regulates neuroendocrine responses to weight loss via AgRP neurons. Nature Communication. 10 (1), 662 (2019).

Tags

Keywords: Whole-cell Patch-clamp RecordingsElectrophysiological PropertiesCell MembranesIonic CurrentsCellular ResponseBrain DissectionHypothalamusOptic NerveVibratomeACSF SolutionMicroscopeAmplifierDigitizerMicromanipulatorPerfusion Pump
check_url/fr/64989?article_type=t

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citer Cet Article
Silva, J. d. N., Zampieri, T. T., Vieira, H. R., Frazao, R. Hypothalamic Kisspeptin Neurons as a Target for Whole-Cell Patch-Clamp Recordings. J. Vis. Exp. (193), e64989, doi:10.3791/64989 (2023).
Télécharger la Citation
Réimpressions et Autorisations

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image