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Neurosciences

Hypothalamische Kisspeptin-Neurone als Ziel für Ganzzell-Patch-Clamp-Ableitungen

Published: March 17, 2023
doi:
10.3791/64989
, , ,
1Department of Anatomy, Instituto de Ciencias Biomedicas,Universidade de Sao Paulo

Summary

In dieser Arbeit stellen wir ein Protokoll vor, mit dem eine Ganzzell-Patchklemme auf Hirnschnitten durchgeführt werden kann, die Kisspeptin-Neuronen, den primären Modulator von Gonadotropin-Releasing-Hormon (GnRH)-Zellen, enthalten. Durch das Hinzufügen von Wissen über die Aktivität von Kisspeptin-Neuronen hat dieses elektrophysiologische Werkzeug in den letzten 20 Jahren als Grundlage für bedeutende Fortschritte auf dem Gebiet der Neuroendokrinologie gedient.

Abstract

Kisspeptine sind essentiell für die Reifung der Hypothalamus-Hypophysen-Gonaden-Achse (HPG) und die Fruchtbarkeit. Hypothalamische Kisspeptin-Neuronen, die sich im anteroventralen periventrikulären Kern und rostralen periventrikulären Kern sowie im Nucleus arcuatus des Hypothalamus befinden, projizieren unter anderem auf Neuronen des Gonadotropin-Releasing-Hormons (GnRH). Frühere Studien haben gezeigt, dass der Kisspeptin-Signalweg über den Kiss1-Rezeptor (Kiss1r) erfolgt, was letztendlich die Aktivität des GnRH-Neurons anregt. In Menschen und experimentellen Tiermodellen sind Kisspeptine ausreichend, um die GnRH-Sekretion und damit die Freisetzung des luteinisierenden Hormons (LH) und des follikelstimulierenden Hormons (FSH) zu induzieren. Da Kisspeptine eine wesentliche Rolle bei den Fortpflanzungsfunktionen spielen, arbeiten die Forscher daran, zu untersuchen, wie die intrinsische Aktivität der hypothalamischen Kisspeptin-Neuronen zu reproduktionsbezogenen Aktionen beiträgt, und die primären Neurotransmitter/Neuromodulatoren zu identifizieren, die diese Eigenschaften verändern können. Die Ganzzell-Patch-Clamp-Technik hat sich zu einem wertvollen Werkzeug für die Untersuchung der Aktivität von Kisspeptin-Neuronen in Nagetierzellen entwickelt. Diese experimentelle Technik ermöglicht es den Forschern, spontane erregende und hemmende Ionenströme, das Ruhemembranpotential, das Aktionspotentialfeuer und andere elektrophysiologische Eigenschaften von Zellmembranen aufzuzeichnen und zu messen. In der vorliegenden Arbeit werden entscheidende Aspekte der Ganzzell-Patch-Clamp-Technik, bekannt als elektrophysiologische Messungen, die hypothalamische Kisspeptin-Neurone definieren, und eine Diskussion relevanter Fragen zur Technik besprochen.

Introduction

Hodgkin und Huxley machten den ersten intrazellulären Nachweis eines Aktionspotentials, das in mehreren wissenschaftlichen Studien beschrieben wurde. Diese Aufnahme wurde am Squid-Axon durchgeführt, das einen großen Durchmesser (~500 μm) hat, so dass eine Mikroelektrode im Axon platziert werden kann. Diese Arbeit bot große Möglichkeiten für die wissenschaftliche Forschung, die später in der Schaffung des Spannungszangenmodus gipfelte, der zur Untersuchung der ionischen Grundlagen der Erzeugung von Aktionspotentialenverwendet wurde 1,2,3,4,5,6,7,8. Im Laufe der Jahre wurde die Technik verbessert und in der wissenschaftlichen Forschung weit verbreitet 6,9. Die Erfindung der Patch-Clamp-Technik, die Ende der 1970er Jahre durch Studien von Erwin Neher und Bert Sakmann erfolgte, ermöglichte es den Forschern, einzelne Ionenkanäle und intrazelluläre Membranpotentiale oder -ströme in praktisch jedem Zelltyp mit nur einer einzigen Elektrode aufzuzeichnen 9,10,11,12. Patch-Clamp-Ableitungen können an einer Vielzahl von Gewebepräparaten, wie z. B. kultivierten Zellen oder Gewebeschnitten, entweder im Voltage-Clamp-Modus (Halten der Zellmembran auf einer festgelegten Spannung, was die Aufzeichnung von z. B. spannungsabhängigen Strömen und synaptischen Strömen ermöglicht) oder im Current-Clamp-Modus (der die Aufzeichnung von z. B. Änderungen des Ruhemembranpotentials ermöglicht, die durch Ionenströme induziert werden) durchgeführt werden. Aktionspotentiale und postsynaptische Potentialfrequenz).

Der Einsatz der Patch-Clamp-Technik ermöglichte mehrere bemerkenswerte Entdeckungen. In der Tat sind die bahnbrechenden Erkenntnisse über die elektrophysiologischen Eigenschaften von hypothalamischen Kisspeptin-Neuronen, die sich an den anteroventralen periventrikulären und rostralen periventrikulären Kernen (AVPV/PeN Kisspeptin), auch bekannt als rostraler periventrikulärer Bereich des dritten Ventrikels (RP3V), und dem Nucleus arcuatus des Hypothalamus (ARHKisspeptin) befinden13,14,15 sind von besonderem Interesse. Im Jahr 2010 führten Ducret et al. die ersten Aufnahmen von AVPV/PeN-Kisspeptin-Neuronenin Mäusen mit einem anderen elektrophysiologischen Werkzeug, der Loose-Cell-Patch-Clamp-Technik, durch. Diese Studien lieferten eine elektrische Beschreibung von AVPV/PeN-Kisspeptin-Neuronen und zeigten, dass ihre Feuermuster vom Brunstzyklus abhängen16. Im Jahr 2011 verwendeten Qiu et al. die Ganzzell-Patch-Clamp-Technik, um zu zeigen, dassARH-Kisspeptin-Neuronen endogene Schrittmacherströme exprimieren17. In der Folge zeigten Gottsch et al., dass Kisspeptin-Neuronen spontane Aktivität aufweisen und sowohl h-Typ (Schrittmacher) als auch T-Typ Kalziumströme exprimieren, was darauf hindeutet, dassARH-Kisspeptin-Neuronen elektrophysiologische Eigenschaften mit anderen Schrittmacherneuronen des Zentralnervensystems teilen18. Darüber hinaus konnte gezeigt werden, dass ARH-Kisspeptin-Neurone sexuell dimorphe Feuerraten aufweisen und dass AVPV/PeN-Kisspeptin-Neurone ein bimodales Ruhemembranpotential (RMP) aufweisen, das von ATP-sensitiven Kaliumkanälen (KATP) beeinflusst wird19,20. Des Weiteren konnte festgestellt werden, dass Gonadensteroide die spontane elektrische Aktivität der Kisspeptin-Neuronen in Mäusen positiv beeinflussen 19,20,21. Die ersten Arbeiten, die die elektrophysiologischen Eigenschaften von Kisspeptin-Neuronen untersuchen, werden erwähnt 16,17,18,19,20. Seitdem wurde in vielen Studien die Ganzzell-Patch-Clamp-Technik verwendet, um zu zeigen, welche Faktoren/Neuromodulatoren ausreichen, um die elektrische Aktivität von Kisspeptin-Neuronen zu modulieren (Abbildung 1)17,21,22,23,24,25,26,27,28,29,30,31,32.

Angesichts der Bedeutung dieser Technik für die Untersuchung von Neuronen, die für die Fortpflanzung benötigt werden, neben anderen Zelltypen, die hier nicht behandelt werden, beschreibt dieser Artikel die grundlegenden Schritte für die Entwicklung der Ganzzell-Patch-Clamp-Technik, wie z. B. die Herstellung der Lösungen, das Sezieren und Schneiden des Gehirns und das Versiegeln der Zellmembran für Aufzeichnungen. Darüber hinaus werden relevante Fragen der Technik diskutiert, wie z.B. ihre Vorteile, technischen Einschränkungen und wichtigen Variablen, die für eine optimale experimentelle Leistung kontrolliert werden müssen.

Protocol

Alle Tierverfahren wurden von der Tierethikkommission des Instituts für Biomedizinische Wissenschaften an der Universität von São Paulo genehmigt und gemäß den ethischen Richtlinien des brasilianischen Kollegiums für Tierversuche durchgeführt. 1. Herstellung von Lösungen Herstellung der inneren LösungAnmerkungen: Die interne Lösung füllt die Patch-Clamp-Mikropipette und kommt mit dem Inneren der Zelle in Kontakt (siehe Beispiel in …

Representative Results

Um die möglichen Auswirkungen von humanem rekombinantem Wachstumshormon (hGH) auf die Aktivität von hypothalamischen Kisspeptin-Neuronen zu untersuchen, führten wir Ganzzell-Patch-Clamp-Ableitungen in Hirnschnitten durch und untersuchten, ob dieses Hormon akute Veränderungen in der Aktivität von AVPV/PeN-Kisspeptin- undARH-Kisspeptin-Neuronen verursacht. In dieser Studie wurden adulte weibliche (Diestrus-Stadium) und männliche Kiss1-Cre/GFP-Mäuse36 verwendet. Für die…

Discussion

Die Entwicklung der Ganzzell-Patch-Clamp-Technik hatte einen erheblichen Einfluss auf die wissenschaftliche Gemeinschaft, da sie als von größter Bedeutung für die Entwicklung der wissenschaftlichen Forschung angesehen wurde und mehrere Entdeckungen ermöglichte. Ihr Einfluss auf die Wissenschaft reichte aus, um 1991 mit dem Nobelpreis für Medizin zu kulminieren, da diese Entdeckung die Tür zu einem besseren Verständnis der Funktionsweise von Ionenkanälen unter physiologischen und pathologischen Bedingungen sowie z…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Diese Studie wurde von der São Paulo Research Foundation [FAPESP-Fördernummern: 2021/11551-4 (JNS), 2015/20198-5 (TTZ), 2019/21707/1 (RF); und von der Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) – Finance Code 001″ (HRV) unterstützt.

Materials

Compounds for aCSF, internal and slicing solutions
ATP Sigma Aldrich/various A9187
CaCl2 Sigma Aldrich/various C7902
D-(+)-Glucose Sigma Aldrich/various G7021
EGTA Sigma Aldrich/various O3777
HEPES Sigma Aldrich/various H3375
KCL Sigma Aldrich/various P5405
K-gluconate Sigma Aldrich/various G4500
KOH Sigma Aldrich/various P5958
MgCl2 Sigma Aldrich/various M9272
MgSO4 Sigma Aldrich/various 230391
NaCl Sigma Aldrich/various S5886
NaH2PO4  Sigma Aldrich/various S5011
NaHCO3 Sigma Aldrich/various S5761
nitric acid Sigma Aldrich/various 225711 CAUTION
Sucrose Sigma Aldrich/various S1888
Equipments
Air table TMC 63-534
Amplifier Molecular Devices Multiclamp 700B
Computer various –
DIGIDATA 1440 LOW-NOISE DATA ACQUISITION SYSTEM Molecular Devices DD1440
Digital peristaltic pump Ismatec ISM833C 
Faraday cage TMC 81-333-03
Imaging Camera Leica DFC 365 FX
Micromanipulator Sutter Instruments Roe-200
Micropipette Puller Narishige PC-10
Microscope Leica DM6000 FS
Osteotome Bonther equipamentos & Tecnologia/various 128
Recovery chamber Warner Instruments/Harvard apparatus – can be made in-house
Recording chamber Warner Instruments 640277
Spatula Fisher Scientific /various FISH-14-375-10; FISH-21-401-20
Vibratome  Leica VT1000 S
Water Bath  Fisher Scientific /various Isotemp
Software and systems
AxoScope 10 software Molecular Devices – Commander Software
LAS X wide field system Leica – Image acquisition and analysis
MultiClamp 700B Molecular Devices MULTICLAMP 700B Commander Software
PCLAMP 10 SOFTWARE FOR WINDOWS Molecular Devices Pclamp 10 Standard
Tools
Ag/AgCl electrode, pellet, 1.0 mm Warner Instruments 64-1309
Curved hemostatic forcep various –
cyanoacrylate glue LOCTITE/various –
Decapitation scissors various –
Filter paper various –
Glass capillaries (micropipette) World Precision Instruments, Inc TW150F-4
Iris scissors Bonther equipamentos & Tecnologia/various 65-66
Pasteur glass pipette  Sigma Aldrich/various CLS7095B9-1000EA
Petri dish various –
Polyethylene tubing  Warner Instruments 64-0756
Razor blade for brain dissection TED PELLA TEDP-121-1
Razor blade for the vibratome TED PELLA TEDP-121-9
Scissors Bonther equipamentos & Tecnologia/various 71-72, 48,49; 
silicone teat various –
Slice Anchor  Warner Instruments 64-0246
Syringe filters Merck Millipore Ltda SLGVR13SL Millex-GV 0.22 μm
Tweezers Bonther equipamentos & Tecnologia/various 131, 1518
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References

  1. Bezanilla, F. Single sodium channels from the squid giant axon. Biophysical Journal. 52 (6), 1087-1090 (1987).
  2. Clay, J. R. Potassium current in the squid giant axon. International Review of Neurobiology. 27, 363-384 (1985).
  3. Gandini, M. A., Sandoval, A., Felix, R. Patch-clamp recording of voltage-sensitive Ca2+ channels. Cold Spring Harbor Protocols. 2014 (4), 329-325 (2014).
  4. Hodgkin, A. L., Huxley, A. F. A quantitative description of membrane current and its application to conduction and excitation in nerve. The Journal of Physiology. 117 (4), 500-544 (1952).
  5. Perkins, K. L. Cell-attached voltage-clamp and current-clamp recording and stimulation techniques in brain slices. Journal of Neuroscience Methods. 154 (1-2), 1-18 (2006).
  6. Suk, H. J., Boyden, E. S., van Welie, I. Advances in the automation of whole-cell patch clamp technology. Journal of Neuroscience Methods. 326, 108357 (2019).
  7. Cole, K. S., Curtis, H. J. Electric impedance of the squid giant axon during activity. The Journal of General Physiology. 22 (5), 649-670 (1939).
  8. Bernstein, J. Ueber den zeitlichen Verlauf der negativen Schwankung des Nervenstroms. Pflüger, Archiv für die Gesammte Physiologie des Menschen und der Thiere. 1 (1), 173-207 (1868).
  9. Hamill, O. P., Marty, A., Neher, E., Sakmann, B., Sigworth, F. J. Improved patch-clamp techniques for high-resolution current recording from cells and cell-free membrane patches. Pflugers Archiv. 391 (2), 85-100 (1981).
  10. Hill, C. L., Stephens, G. J. An introduction to patch clamp recording. Methods in Molecular Biology. 2188, 1-19 (2021).
  11. Neher, E., Sakmann, B. Single-channel currents recorded from membrane of denervated frog muscle fibres. Nature. 260 (5554), 799-802 (1976).
  12. Sakmann, B., Neher, E. Patch clamp techniques for studying ionic channels in excitable membranes. Annual Review of Physiology. 46, 455-472 (1984).
  13. Gottsch, M. L., et al. A role for kisspeptins in the regulation of gonadotropin secretion in the mouse. Endocrinology. 145 (9), 4073-4077 (2004).
  14. Smith, J. T., Cunningham, M. J., Rissman, E. F., Clifton, D. K., Steiner, R. A. Regulation of Kiss1 gene expression in the brain of the female mouse. Endocrinology. 146 (9), 3686-3692 (2005).
  15. Smith, J. T., et al. Differential regulation of KiSS-1 mRNA expression by sex steroids in the brain of the male mouse. Endocrinology. 146 (7), 2976-2984 (2005).
  16. Ducret, E., Gaidamaka, G., Herbison, A. E. Electrical and morphological characteristics of anteroventral periventricular nucleus kisspeptin and other neurons in the female mouse. Endocrinology. 151 (5), 2223-2232 (2010).
  17. Qiu, J., Fang, Y., Bosch, M. A., Rønnekleiv, O. K., Kelly, M. J. Guinea pig kisspeptin neurons are depolarized by leptin via activation of TRPC channels. Endocrinology. 152 (4), 1503-1514 (2011).
  18. Gottsch, M. L., et al. Molecular properties of Kiss1 neurons in the arcuate nucleus of the mouse. Endocrinology. 152 (11), 4298-4309 (2011).
  19. de Croft, S., et al. Spontaneous kisspeptin neuron firing in the adult mouse reveals marked sex and brain region differences but no support for a direct role in negative feedback. Endocrinology. 153 (11), 5384-5393 (2012).
  20. Frazão, R., et al. Shift in Kiss1 cell activity requires estrogen receptor alpha. The Journal of Neuroscience. 33 (7), 2807-2820 (2013).
  21. DeFazio, R. A., Elias, C. F., Moenter, S. M. GABAergic transmission to kisspeptin neurons is differentially regulated by time of day and estradiol in female mice. The Journal of Neuroscience. 34 (49), 16296-16308 (2014).
  22. Mansano, N. D. S., et al. Vasoactive intestinal peptide exerts an excitatory effect on hypothalamic kisspeptin neurons during estrogen negative feedback. Molecular and Cellular Endocrinology. 542, 111532 (2022).
  23. Jamieson, B. B., Piet, R. Kisspeptin neuron electrophysiology: Intrinsic properties, hormonal modulation, and regulation of homeostatic circuits. Frontiers in Neuroendocrinology. 66, 101006 (2022).
  24. Silveira, M. A., et al. STAT5 signaling in kisspeptin cells regulates the timing of puberty. Molecular and Cellular Endocrinology. 448, 55-65 (2017).
  25. Silveira, M. A., et al. Acute effects of somatomammotropin hormones on neuronal components of the hypothalamic-pituitary-gonadal axis. Brain Research. 1714, 210-217 (2019).
  26. Cravo, R. M., et al. Leptin signaling in Kiss1 neurons arises after pubertal development. PLoS One. 8 (3), e58698 (2013).
  27. Manfredi-Lozano, M., et al. Defining a novel leptin-melanocortin-kisspeptin pathway involved in the metabolic control of puberty. Molecular Metabolism. 5 (10), 844-857 (2016).
  28. Qiu, J., et al. Insulin excites anorexigenic proopiomelanocortin neurons via activation of canonical transient receptor potential channels. Cell Metabolism. 19 (4), 682-693 (2014).
  29. de Croft, S., Boehm, U., Herbison, A. E. Neurokinin B activates arcuate kisspeptin neurons through multiple tachykinin receptors in the male mouse. Endocrinology. 154 (8), 2750-2760 (2013).
  30. Frazao, R., et al. Estradiol modulates Kiss1 neuronal response to ghrelin. American Journal of Physiology. Endocrinology and Metabolism. 306 (6), E606-E614 (2014).
  31. True, C., Verma, S., Grove, K. L., Smith, M. S. Cocaine- and amphetamine-regulated transcript is a potent stimulator of GnRH and kisspeptin cells and may contribute to negative energy balance-induced reproductive inhibition in females. Endocrinology. 154 (8), 2821-2832 (2013).
  32. Navarro, V. M., et al. Regulation of NKB pathways and their roles in the control of Kiss1 neurons in the arcuate nucleus of the male mouse. Endocrinology. 152 (11), 4265-4275 (2011).
  33. Segev, A., Garcia-Oscos, F., Kourrich, S. Whole-cell patch-clamp recordings in brain slices. Journal of Visualized Experiments. (112), e54024 (2016).
  34. Gibson, A. G., Jaime, J., Burger, L. L., Moenter, S. M. Prenatal androgen treatment does not alter the firing activity of hypothalamic arcuate kisspeptin neurons in female mice. eNeuro. 8 (5), (2021).
  35. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. The Mouse Brain. Stereotaxic Coordinates. 2nd edition. , (2001).
  36. Cravo, R. M., et al. Characterization of Kiss1 neurons using transgenic mouse models. Neurosciences. 173, 37-56 (2011).
  37. Emane, M. N., Delouis, C., Kelly, P. A., Djiane, J. Evolution of prolactin and placental lactogen receptors in ewes during pregnancy and lactation. Endocrinology. 118 (2), 695-700 (1986).
  38. Fuh, G., Colosi, P., Wood, W. I., Wells, J. A. Mechanism-based design of prolactin receptor antagonists. The Journal of Biological Chemistry. 268 (8), 5376-5381 (1993).
  39. Barinaga, M. Ion channel research wins physiology Nobel. Science. 254 (5030), 380 (1991).
  40. Colquhoun, D. Neher and Sakmann win Nobel Prize for patch-clamp work. Trends in Pharmacological Sciences. 12 (12), 449 (1991).
  41. Greger, R. Nobel Prize for Medicine and Physiology 1991. Analysis of the function of single ion channel. Deutsche Medizinische Wochenschrift. 116 (48), 1849-1851 (1991).
  42. Brau, M. E., Vogel, W., Hempelmann, G. Possible applications of the "patch-clamp" method in anesthesiologic research; comment. Anasthesiologie, Intensivmedizin, Notfallmedizin, Schmerztherapie. 31 (9), 537-542 (1996).
  43. Cahalan, M., Neher, E. Patch clamp techniques: an overview. Methods in Enzymology. 207, 3-14 (1992).
  44. Kornreich, B. G. The patch clamp technique: principles and technical considerations. Journal of Veterinary Cardiology. 9 (1), 25-37 (2007).
  45. Neher, E., Sakmann, B. The patch clamp technique. Scientific American. 266 (3), 44-51 (1992).
  46. Sachs, F., Auerbach, A. Single-channel electrophysiology: use of the patch clamp. Methods in Enzymology. 103, 147-176 (1983).
  47. Dallas, M., Bell, D. . Patch Clamp Electrophysiology: Methods and Protocols. 1st edition. , (2021).
  48. Robinson, R. A., Stokes, R. H. . Electrolyte Solutions. 2nd edition. , (1959).
  49. de Souza, G. O., et al. Gap junctions regulate the activity of AgRP neurons and diet-induced obesity in male mice. The Journal of Endocrinology. 255 (2), 75-90 (2022).
  50. Houades, V., Koulakoff, A., Ezan, P., Seif, I., Giaume, C. Gap junction-mediated astrocytic networks in the mouse barrel cortex. The Journal of Neuroscience. 28 (20), 5207-5217 (2008).
  51. Richerson, G. B., Messer, C. Effect of composition of experimental solutions on neuronal survival during rat brain slicing. Experimental Neurology. 131 (1), 133-143 (1995).
  52. Pan, J. T., Li, C. S., Tang, K. C., Lin, J. Y. Low calcium/high magnesium medium increases activities of hypothalamic arcuate and suprachiasmatic neurons in brain tissue slices. Neuroscience Letters. 144 (1-2), 157-160 (1992).
  53. Hamill, O. P., McBride, D. W. Induced membrane hypo/hyper-mechanosensitivity: a limitation of patch-clamp recording. Annual Review of Physiology. 59, 621-631 (1997).
  54. Herbison, A. E., Moenter, S. M. Depolarising and hyperpolarising actions of GABA(A) receptor activation on gonadotrophin-releasing hormone neurones: towards an emerging consensus. Journal of Neuroendocrinology. 23 (7), 557-569 (2011).
  55. Qiu, J., et al. High-frequency stimulation-induced peptide release synchronizes arcuate kisspeptin neurons and excites GnRH neurons. eLife. 5, e16246 (2016).
  56. Chaves, F. M., Mansano, N. S., Frazão, R., Donato, J. Tumor necrosis factor α and interleukin-1β acutely inhibit AgRP neurons in the arcuate nucleus of the hypothalamus. International Journal of Molecular Sciences. 21 (23), 8928 (2020).
  57. Chaves, F. M., et al. Effects of the isolated and combined ablation of growth hormone and IGF-1 receptors in somatostatin neurons. Endocrinology. 163 (5), 045 (2022).
  58. Wasinski, F., et al. Growth hormone receptor in dopaminergic neurones regulates stress-induced prolactin release in male mice. Journal of Neuroendocrinology. 33 (3), e12957 (2021).
  59. Furigo, I. C., Ramos-Lobo, A. M., Frazao, R., Donato, J. Brain STAT5 signaling and behavioral control. Molecular and Cellular Endocrinology. 438, 70-76 (2016).
  60. Zampieri, T. T., et al. Postnatal overnutrition induces changes in synaptic transmission to leptin receptor-expressing neurons in the arcuate nucleus of female mice. Nutrients. 12 (8), 2425 (2020).
  61. Furigo, I. C., et al. Growth hormone regulates neuroendocrine responses to weight loss via AgRP neurons. Nature Communication. 10 (1), 662 (2019).

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Citer Cet Article
Silva, J. d. N., Zampieri, T. T., Vieira, H. R., Frazao, R. Hypothalamic Kisspeptin Neurons as a Target for Whole-Cell Patch-Clamp Recordings. J. Vis. Exp. (193), e64989, doi:10.3791/64989 (2023).
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