Effetti del Desmodium caudatum sugli ormoni gastrointestinali e sulla flora intestinale nei ratti con gastrite
Summary
Il presente protocollo descrive il metodo per l’analisi della flora intestinale utilizzando il sequenziamento del gene rRNA 16S basato su Illumina e fornisce un quadro per valutare l’efficacia dei decotti a base di erbe.
Abstract
Al fine di esplorare preliminarmente gli effetti del Desmodium caudatum sulla gastrite e sulla flora intestinale nei ratti, è stato stabilito un modello di ratto con gastrite cronica utilizzando il classico metodo del salicilato di sodio. Diciotto ratti SPF sono stati divisi in tre gruppi: il gruppo di controllo (Gruppo C), il gruppo modello (Gruppo M) e il gruppo di trattamento (Gruppo T). Sezioni patologiche della parete gastrica sono state prelevate dai ratti di ciascun gruppo. Inoltre, le concentrazioni di gastrina e malondialdeide nel siero dei ratti di ciascun gruppo sono state determinate mediante ELISA. Inoltre, gli effetti di D. caudatum sulla flora intestinale dei ratti con gastrite sono stati esplorati attraverso un confronto dettagliato delle comunità batteriche intestinali nei tre gruppi, impiegando il sequenziamento del gene rRNA 16S basato su Illumina. I risultati hanno indicato che il decotto di D. caudatum potrebbe ridurre il contenuto di malondialdeide e aumentare il contenuto di gastrina. Inoltre, è stato scoperto che il decotto di D. caudatum migliora la diversità e l’abbondanza della flora intestinale, esercitando un impatto positivo sul trattamento della gastrite regolando e ripristinando la flora intestinale.
Introduction
La gastrite cronica (CG), una delle malattie cliniche più comuni, è caratterizzata da alterazioni infiammatorie croniche e persistenti dell’epitelio della mucosa gastrica, che viene frequentemente e ripetutamente attaccato da vari fattori patogeni1. Il tasso di incidenza della CG è al primo posto tra tutti i tipi di malattie dello stomaco, rappresentando dal 40% al 60% del tasso di servizio ambulatoriale nel Dipartimento di Gastroenterologia2. Inoltre, il tasso di incidenza aumenta generalmente con l’età, soprattutto nei soggetti di mezza età e più anziani3. Indubbiamente, la CG riduce significativamente la qualità della vita delle persone, sottolineando la necessità critica di scoprire nuovi agenti terapeutici.
Numerosi studi hanno riportato che l’insorgenza e lo sviluppo di CG sono legati alla secrezione di ormoni gastrointestinali, come la gastrina (GAS)4,5. Il GAS, un comune ormone peptidico gastrointestinale nel tratto digestivo, stimola le cellule a secernere acido gastrico promuovendo il rilascio di istamina dagli eosinofili. Inoltre, migliora la nutrizione e l’afflusso di sangue della mucosa gastrica, favorendo la proliferazione della mucosa gastrica e delle cellule parietali6. Pertanto, la gastrina può essere utilizzata come indicatore per valutare il livello di sviluppo della CG. Inoltre, i prodotti di perossidazione lipidica innescati dagli ossidi reattivi possono attivare le cellule infiammatorie, portando alla CG. La malondialdeide (MDA), un marcatore della perossidazione lipidica, è un indicatore comunemente usato per misurare il grado di stress ossidativo. Riflette in una certa misura il livello di radicali liberi nella mucosa gastrica. Il livello di MDA può indicare l’attacco di acidi grassi insaturi nella mucosa gastrica locale causato dai radicali liberi 7,8.
La microecologia intestinale è costituita da milioni di microrganismi che risiedono nell’intestino dell’ospite, svolgendo un ruolo fondamentale nel mantenimento della salute dell’ospite e nella regolazione dell’immunità dell’ospite. Una flora intestinale sana, caratterizzata da un’elevata ricchezza, diversità e funzione stabile del microbiota, funge da barriera protettiva contro l’invasione di microrganismi patogeni partecipando al metabolismo. I disturbi della flora intestinale rendono gli individui più suscettibili alle malattie gastrointestinali acute e croniche 9,10. Negli ultimi anni, la terapia del microbiota per le malattie gastrointestinali è progredita rapidamente e ha dimostrato un’efficacia significativa11. In sintesi, la considerazione della flora intestinale è fondamentale per comprendere e affrontare le malattie gastrointestinali.
Come componente indispensabile del tesoro della medicina tradizionale cinese, i materiali medicinali popolari hanno un grande significato per la pratica clinica e la modernizzazione della medicina nazionale. Le radici e le parti intere di Desmodium caudatum (Thunb.) DC. è stato ampiamente utilizzato per alleviare il disagio allo stomaco nell’area di Beichuan Qiang della città di Mianyang per un periodo prolungato. Alcuni articoli indicano le basi scientifiche per il trattamento delle malattie gastrointestinali con D. caudatum, citando i suoi effetti come l’emostasi, l’antiossidazione e la protezione gastrointestinale 12,13,14. Tuttavia, a causa della mancanza di ricerche approfondite, non è stato stabilito alcun meccanismo di farmacodinamica clinica. Questo articolo si propone di studiare gli effetti di D. caudatum nel trattamento della gastrite sulla base degli ormoni gastrointestinali e della flora intestinale, fornendo una base per la sua applicazione clinica razionale.
Protocol
Representative Results
Discussion
D. caudatum, una medicina popolare comunemente usata dalla nazionalità Qiang12, ha mostrato un’efficacia significativa nel trattamento delle malattie gastrointestinali. Con il progresso della moderna ricerca farmacologica, lo squilibrio della flora derivante dallo squilibrio della microecologia gastrointestinale è identificato come un fattore chiave nelle malattie gastrointestinali acute e croniche22,23. Alcuni microrganismi nel…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato finanziato dai progetti chiave di ricerca e sviluppo del Dipartimento di scienza e tecnologia della provincia di Sichuan (2020YFS0539).
Materials
| Alpha diversity analysis | Mothur 1.30.2 | ||
| AxyPrep deoxyribonucleic acid (DNA) gel extraction kit | Axygen Biosciences | AP-GX-50 | |
| Beta diversity analysis | Qiime 1.9.1 | ||
| Cryogenic refrigerator | Forma-86C ULT freezer | ||
| Desmodium caudatum | The Traditional Chinese Medicine Hospital of Beichuan Qiang Autonomous County | ||
| E.Z.N.A. soil kit | Omega Bio-tek | D5625-01 | |
| Illumina MiSeq Platform | Illumina Miseq PE300/NovaSeq PE250 | ||
| Multiskan Spectrum | spectraMax i3 | ||
| OTU clustering | Uparse 7.0.1090 | ||
| OTU statistics | Usearch 7.0 | ||
| PCR instrument | TransGen AP221-02 | ||
| PCR instrument | ABI GeneAmp 9700 | ||
| QuantiFluor-ST double-stranded DNA (dsDNA) system | Promega Corp. | ||
| Sequence classification annotation | RDP Classifier 2.11 | ||
| Sodium salicylate | Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd | 54-21-7 | |
| SPF rats | Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd | ||
| SPSS 18.0 | IBM |
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