Настоящий протокол описывает метод анализа кишечной флоры с помощью секвенирования гена 16S рРНК на основе Illumina и обеспечивает основу для оценки эффективности травяных отваров.
С целью предварительного изучения влияния Desmodium caudatum на гастрит и кишечную флору у крыс была создана модель хронического гастрита крыс с использованием классического метода салицилата натрия. Восемнадцать крыс с SPF были разделены на три группы: контрольную группу (группа С), модельную группу (группа М) и группу лечения (группа Т). Патологические срезы стенки желудка были взяты у крыс в каждой группе. Кроме того, концентрации гастрина и малонового диальдегида в сыворотке крови крыс в каждой группе определяли методом ИФА. Кроме того, влияние D. caudatum на кишечную флору крыс с гастритом было изучено путем детального сравнения бактериальных сообществ кишечника в трех группах с использованием секвенирования гена 16S рРНК на основе Illumina. Результаты показали, что отвар D. caudatum может снизить содержание малонового диальдегида и увеличить содержание гастрина. Кроме того, было обнаружено, что отвар D. caudatum усиливает разнообразие и обилие кишечной флоры, оказывая положительное влияние на лечение гастрита, регулируя и восстанавливая кишечную флору.
Хронический гастрит (ХГ), одно из наиболее распространенных клинических заболеваний, характеризуется хроническими и стойкими воспалительными изменениями эпителия слизистой оболочки желудка, который часто и многократно атакуется различными патогеннымифакторами1. Уровень заболеваемости ХГ занимает первое место среди всех видов заболеваний желудка, составляя от 40% до 60% от общего объема амбулаторного обслуживания в отделении гастроэнтерологии2. Более того, уровень заболеваемости, как правило, увеличивается с возрастом, особенно у лиц среднегои старшего возраста. Несомненно, компьютерная графика значительно снижает качество жизни людей, подчеркивая острую необходимость открытия новых терапевтических агентов.
Многочисленные исследования показали, что возникновение и развитие ХГ связано с секрецией желудочно-кишечных гормонов, таких как гастрин (ГАС)4,5. GAS, распространенный пептидный гормон желудочно-кишечного тракта в пищеварительном тракте, стимулирует клетки к секреции желудочной кислоты, способствуя высвобождению гистамина из эозинофилов. Кроме того, он улучшает питание и кровоснабжение слизистой оболочки желудка, способствуя пролиферации слизистой оболочки желудка и париетальных клеток6. Таким образом, гастрин может быть использован в качестве индикатора для оценки уровня развития ХГ. Кроме того, продукты перекисного окисления липидов, вызванные реактивными оксидами, могут активировать воспалительные клетки, что приводит к ХГ. Малоновый диальдегид (МДА), маркер перекисного окисления липидов, является широко используемым индикатором для измерения степени окислительного стресса. Он в определенной степени отражает уровень свободных радикалов в слизистой оболочке желудка. Уровень MDA может свидетельствовать о атаке ненасыщенных жирных кислот в местной слизистой оболочке желудка, вызванной свободными радикалами 7,8.
Микроэкология кишечника состоит из миллионов микроорганизмов, живущих в кишечнике хозяина, играющих жизненно важную роль в поддержании здоровья хозяина и регулировании иммунитета хозяина. Здоровая кишечная флора, отличающаяся высоким богатством, разнообразием и стабильной функцией микробиоты, действует как защитный барьер от вторжения патогенных микроорганизмов, участвуя в обмене веществ. Нарушения кишечной флоры делают людей более восприимчивыми к острым и хроническим заболеваниям желудочно-кишечного тракта 9,10. В последние годы терапия микробиотой при заболеваниях желудочно-кишечного тракта быстро прогрессировала и продемонстрировала значительную эффективность11. Таким образом, учет кишечной флоры имеет решающее значение для понимания и лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта.
Являясь неотъемлемым компонентом сокровищницы традиционной китайской медицины, народные лекарственные материалы имеют большое значение для клинической практики и модернизации национальной медицины. Корни и целые части Desmodium caudatum (Thunb.) DC. широко используется для облегчения дискомфорта в желудке в районе Бэйчуань Цян города Мяньян в течение длительного периода времени. В некоторых статьях указывается научная основа лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта с помощью D. caudatum, приводятся его эффекты, такие как гемостаз, антиоксидантное действие и защита желудочно-кишечного тракта 12,13,14. Однако из-за отсутствия глубоких исследований механизм клинической фармакодинамики не установлен. Целью данной статьи является изучение эффектов D. caudatum в лечении гастрита на основе гормонов желудочно-кишечного тракта и кишечной флоры, обеспечение основы для его рационального клинического применения.
D. caudatum, широко используемая народной медициной народности цян12, показала значительную эффективность в лечении желудочно-кишечных заболеваний. С развитием современных фармакологических исследований дисбаланс флоры, возникающий в результате дисбаланса микроэкологи…
The authors have nothing to disclose.
Эта работа была профинансирована в рамках ключевых научно-исследовательских проектов Департамента науки и технологий провинции Сычуань (2020YFS0539).
Alpha diversity analysis | Mothur 1.30.2 | ||
AxyPrep deoxyribonucleic acid (DNA) gel extraction kit | Axygen Biosciences | AP-GX-50 | |
Beta diversity analysis | Qiime 1.9.1 | ||
Cryogenic refrigerator | Forma-86C ULT freezer | ||
Desmodium caudatum | The Traditional Chinese Medicine Hospital of Beichuan Qiang Autonomous County | ||
E.Z.N.A. soil kit | Omega Bio-tek | D5625-01 | |
Illumina MiSeq Platform | Illumina Miseq PE300/NovaSeq PE250 | ||
Multiskan Spectrum | spectraMax i3 | ||
OTU clustering | Uparse 7.0.1090 | ||
OTU statistics | Usearch 7.0 | ||
PCR instrument | TransGen AP221-02 | ||
PCR instrument | ABI GeneAmp 9700 | ||
QuantiFluor-ST double-stranded DNA (dsDNA) system | Promega Corp. | ||
Sequence classification annotation | RDP Classifier 2.11 | ||
Sodium salicylate | Sichuan Xilong Chemical Co., Ltd | 54-21-7 | |
SPF rats | Chengdu Dashuo Experimental Animal Co., Ltd | ||
SPSS 18.0 | IBM |