Nöral Kök Hücre Motilite değerlendirilmesi Agaroz Jel tabanlı mikroakışkan Cihaz Kullanımı
Summary
Biz yeni bir agaroz jel tabanlı mikroakışkan cihaz kullanarak nöral kök hücreler (NSC'lerde) motilite epidermal büyüme faktörü reseptörleri (EGFR) aşırı ifade artırdığını göstermektedir. Bu teknoloji, insan sinir kök hücreleri gibi hücre kaynakları kıt olan diğer memeli hücre sistemleri, kolayca adapte olabilir ve zaman etrafında dönüş kritik öneme sahiptir.
Abstract
Mikroakışkan teknolojisi makromoleküler deneyleri için yeni bir olgunluk seviyesine ulaşırken, hücre tabanlı deneyleri, hala bir bebek evre 1 . Bu bir hücre uyumlu ve istikrarlı bir mikroçevresinin geleneksel imalat teknikleri ve malzemeleri kullanarak oluşturabilirsiniz zorluk büyük ölçüde. Mikroakışkan cihaz için temel malzemesi olarak, bir roman mikroimalat malzeme, agaroz jel giriş ile bu sorunu çözmek. Agaroz jel, hücre tabanlı deneyleri için ideal bir malzemedir bu nedenle son derece uysal ve gaz geçirgen ve hücrenin hayatta kalabilmesi için gerekli besin ve. Agaroz jel tabanlı cihazlar bakteriyel ve nötrofil hücre göçü 2 okuyan başarılı olduğunu daha önce göstermiştir. Bu raporda, üç paralel mikroakışkan kanalları hakkında 1mm kalınlığında bir agaroz jel membran desenli. Medya / tampon Sabit akımları peristaltik bir pompa kullanarak her iki yan kanallar tutulur. Hücreler için gözlem merkezi kanal tutulur. Yan kanallar besin ve kimyasal madde yandan merkezi kanal, merkezi kanal kimyasal ortamı sürekli difüzyon olduğundan, yan kanallar boyunca akışını kolayca üzerinden kontrol edilir. Bu cihazı kullanırken, biz nöral kök hücre hareketi ile optik çeşitli kimyasal şartlar altında kolay takip edilebilir göstermek ve deney sonuçları, epidermal büyüme faktörü reseptörleri (EGFR) aşırı ifade, sinir kök hücrelerin motilite artırdığını göstermektedir. Nöral kök hücrelerin Motilite, böylece tümörojenik faktörü 3 hücreleri saldırganlık değerlendirmek için önemli bir biyomarker. MGK motilite altında yatan mekanizma Deşifre her iki nöral gelişim bozuklukları ve beyin kanseri kök hücre invazyonu içine içine fikir verecektir.
Protocol
Discussion
Şekil 1 üç MGK suşları, ebeveyn hücreler, wtEGFR ve ΔEGFR (kontrol) yörüngeleri gösterir. Yörüngeleri Her set 5 saat uzunluğunda bir film elde edildi. EGF konsantrasyonu ~ 10 ng ebeveyn hücreler için, hücre motilitesi doruğa ulaştı; wtEGFR hücrelerin, hücre motilite zirve 100ng/ml veya üzeri kaymıştır; beklendiği gibi ΔEGFR hücrelerin, hücre motilite EGF konsantrasyon bağımsız oldu.
100ng/ml wtEGF hücreleri en hareketli hücreler, yaklaşık 1,5 kat, 10 ng ile ebeveyn hücrelerden daha hızlı taşı…
Acknowledgements
Bu çalışma, New York Eyaleti Office Bilim, Teknoloji ve Akademik Araştırma (NYSTAR) (form, İleri Teknoloji hibe Merkezi), ve Nanobiyoteknoloji Merkezi (NBTC) Ulusal bir STC Programı hibeleri ile desteklenen Anlaşması No ECS-9876771 altında Bilim Vakfı ve Amerikan Beyin Tümörü Derneği ve New York Tıp Akademisi (JAB).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) (1X) | Reagent | Invitrogen | 11971-025 | |
| CO2-independent media | Reagent | Invitrogen | 18045-088 | A non-HEPES proprietary medium suitable for supporting cell growth for a variety of epithelial, fibroblast, and lymphoid cell lines in atmospheric conditions, contains no L-glutamine |
| Trypsin-EDTA | Reagent | Invitrogen | 25200-072 | |
| PBS | Reagent | Invitrogen | 14190-144 | Phosphate-buffered saline, without calcium or magnesium |
| Pen/Strep | Reagent | Invitrogen | 15140-122 | Contains 10,000 units of penicillin (base) and 10,000 g of streptomycin (base)/ml utilizing penicillin G (sodium salt) and streptomycin sulfate in 0.85% saline |
| FBS | Reagent | Invitrogen | 10437-028 | Fetal Bovine Serum, Qualified |
| Horse Serum | Reagent | Invitrogen | 16050-130 | Horse Serum, EIA tested (negative) serum |
| Fibronectin | Reagent | Sigma-Aldrich | F0895 | Fibronectin from human plasma, also called cold insoluble globulin |
| EGF | Reagent | Sigma-Aldrich | E4127 | Epidermal Growth Factor from murine submaxillary gland, lyophilized |
| Agarose | Reagent | FisherScientific | BP1356-500 |
References
- Blow, N. Microfluidics: in search of a killer application. Nature Methods. 4, 665-670 (2007).
- Shing-Yi Cheng, S. H., Wassweman, M. a. x., Archer, S. h. i. v. a. u. n., Shuler, M. i. c. h. a. e. l. . L., Wu, M. i. n. g. m. i. n. g. A hydrogel-based microfluidic device for the studies of directed cell migration. Lab-on-a-chip. 7, 763-769 (2007).
- Pedersen, M. W., Tkach, V., Pedersen, N., Berezin, V., Poulsen, H. S. Expression of a naturally occurring constitutively active variant of the epidermal growth factor receptor in mouse fibroblasts increases motility. Int J Cancer. 108, 643-653 (2004).
- Ayuso-Sacido, A., Graham, C., Greenfield, J. P., Boockvar, J. A. The duality of EGFR signaling and neural stem cell phenotype: Cell enhancer or cell transformer. Current Stem Cell Research and Therapy. 1, 231-238 (2006).
- Eisenbach, M., Constantinou, C., Aloni, H., Shinitzky, M. Repellents for Escherichia coli operate neither by changing membrane fluidity nor by being sensed by periplasmic receptors during chemotaxis. J Bacteriol. 172, 5218-5224 (1990).
- Snyder, E. Y., Deitcher, D. L., Walsh, C., Arnold-Aldea, S., Hartwieg, E. A., Cepko, C. L. Multipotent neural cell lines can engraft and participate in development of mouse cerebellum. Cell. 68, 33-51 (1992).
- Snyder, E. Y., Yoon, C., Flax, J. D., Macklis, J. D. Multipotent neural precursors can differentiate toward replacement of neurons undergoing targeted apoptotic degeneration in adult mouse neocortex. Proc Natl Acad Sci U S A. 94, 11663-11668 (1997).
