Cultivo primario de neuronas del hipocampo de ratas recién nacidas P0

Summary

La disección y el crecimiento de las células de un área del cerebro individuales facilita la investigación de los parámetros celulares y fisiológicos. Se describe un método para el cultivo de células primarias que produce neuronas enriquecido las culturas en un ambiente libre de suero.

Abstract

Las propiedades fisiológicas de las neuronas del hipocampo son comúnmente investigados, sobre todo debido a la participación del hipocampo en la memoria y el aprendizaje. Cultivo de células primarias del hipocampo permite neurocientíficos para examinar la actividad y las propiedades de las neuronas en la celda individual y el nivel de sinapsis individuales. En este video, vamos a demostrar cómo aislar y cultivar células primarias del hipocampo de ratas recién nacidas. El hipocampo puede ser aislado de cada animal recién nacido en tan corto como 2 a 3 minutos, y los cultivos se pueden mantener hasta por dos semanas. También vamos a demostrar brevemente cómo utilizar estas neuronas del hipocampo de imágenes de calcio radiométrica. Aunque este protocolo describe el proceso para el hipocampo, con poca o ninguna modificación, se puede aplicar a otras regiones del cerebro.

Protocol

Antes del aislamiento del hipocampo Antes de comenzar el aislamiento del hipocampo, asegúrese de que todas las herramientas que son estériles. Aerosol por la campana de la cultura con el 70% de etanol, y el lugar de las herramientas dentro de la campana. Usted tendrá 6 – y 10 cm de placas de Petri estériles de poli-L cubreobjetos de vidrio recubierto, pipetas y puntas, pipetas desechables, y una pipeta de electricidad. A partir de ahora, no olvides utilizar una técnica estéril correcta. <…

Discussion

Este protocolo fue desarrollado como una modificación de los trabajos seminales de Gary Banker y Kim Goslin ^1. Este libro es un recurso esencial para cualquier persona interesada en el cultivo de células – no sólo los cultivos de neuronas enriquecido se describe en el protocolo actual.

Los tres factores más importantes en el cultivo de la célula son: la esterilidad, la velocidad, la elección del medio utilizado.

Esterilidad – un flujo laminar / campana estéril, las condiciones de asepsia, y…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Antibiotic antimitotic		Invitrogen	15240062
B-27 Supplement		Invitrogen	17504044	Serum free
Boric Acid		Sigma	B6768
Dnase I		Sigma	DN25
Fura-2, AM cell permeant		Molecular Probes	F1221
Glucose		Sigma	G7528
HBSS (10X)		Invitrogen	14185052
HEPES		Invitrogen	15630080
L-Glutamine		Sigma	G7513
MEM		Invitrogen	51200038
Neurobasal		Invitrogen	12348017	Without phenol red
Poly-L-Lysine Hydrobromide		Sigma	P6282
Pyruvic Acid		Sigma	P2256
Sodium Pyruvate		Sigma	P2256
Sodium Tetraborate		Sigma
Trypsin, 2.5% (10X)		Invitrogen	15090046