Первичные культуры нейронов гиппокампа от P0 новорожденных крыс
Summary
Рассечение и роста клеток от отдельной области мозга облегчает исследование клеточных и физиологических параметров. Мы опишем метод культивирования первичных клетка, которая производит нейрона обогащенного культур в свободной от сыворотки среде.
Abstract
Физиологических свойств нейронов гиппокампа, как правило, изучения, в особенности из-за участия гиппокампа в процессе обучения и памяти. Первичная гиппокампа культивирования клеток позволяет неврологи изучить деятельность и свойств нейронов на отдельные клетки и одного уровня синапс. В этом видео мы продемонстрируем, как изолировать и выращивать первичные клетки гиппокампа новорожденных крыс. Гиппокампе может быть изолированы друг от новорожденных животных в максимально короткий от 2 до 3 минут, и культуры могут быть сохранены на срок до двух недель. Мы также вкратце показать, как использовать эти нейроны гиппокампа для логометрических изображений кальция. Хотя этот протокол описывает процесс гиппокампа, с практически никаких изменений, он может быть применен в других регионах мозга.
Protocol
Discussion
Этот протокол был разработан как модификация оригинальной работе Гэри Банкир и Ким Гослин 1. Эта книга является важнейшим ресурсом для всех, кто интересуется культивирования клеток – не только нейрон обогащенного культур описаны в текущем протоколе.
Три наиболее важных факторов культи?…
Acknowledgements
JLN была поддержана MH 68347.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Antibiotic antimitotic | Invitrogen | 15240062 | ||
| B-27 Supplement | Invitrogen | 17504044 | Serum free | |
| Boric Acid | Sigma | B6768 | ||
| Dnase I | Sigma | DN25 | ||
| Fura-2, AM cell permeant | Molecular Probes | F1221 | ||
| Glucose | Sigma | G7528 | ||
| HBSS (10X) | Invitrogen | 14185052 | ||
| HEPES | Invitrogen | 15630080 | ||
| L-Glutamine | Sigma | G7513 | ||
| MEM | Invitrogen | 51200038 | ||
| Neurobasal | Invitrogen | 12348017 | Without phenol red | |
| Poly-L-Lysine Hydrobromide | Sigma | P6282 | ||
| Pyruvic Acid | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Pyruvate | Sigma | P2256 | ||
| Sodium Tetraborate | Sigma | |||
| Trypsin, 2.5% (10X) | Invitrogen | 15090046 |
