Primaire Cultuur van hippocampale neuronen van P0 pasgeboren ratten

Summary

De dissectie en de groei van cellen van een persoon hersengebied vergemakkelijkt onderzoek van cellulaire en fysiologische parameters. We beschrijven een methode voor primaire celcultuur dat neuron verrijkte culturen produceert in een serum-vrije omgeving.

Abstract

De fysiologische eigenschappen van de hippocampus neuronen worden vaak onderzocht, met name vanwege de betrokkenheid van de hippocampus bij leren en geheugen. Primaire hippocampus cel kweken laat neurowetenschappers te onderzoeken van de activiteit en de eigenschappen van neuronen in de individuele cel en enkele synaps niveau. In deze video, zullen we zien hoe te isoleren en te groeien primaire hippocampus cellen van pasgeboren ratten. De hippocampus kan worden geïsoleerd van elk pasgeboren dier in zo kort als 2 tot 3 minuten, en de culturen kan worden gehandhaafd voor maximaal twee weken. We zullen ook kort laten zien hoe je deze hippocampale neuronen voor ratiometrische calcium beeldvorming te gebruiken. Hoewel dit protocol beschrijft het proces voor de hippocampus, met weinig tot geen wijzigingen, kan deze worden toegepast op andere gebieden van de hersenen.

Protocol

Voorafgaand aan de hippocampus isolatie Voor het begin van de hippocampus isolatie, zorg ervoor dat alle tools steriel zijn. Spray beneden de cultuur kap met 70% ethanol, en zet de tools in de kap. U moet 6 – en 10-cm Petrischalen, steriele poly-L gecoat glas dekglaasjes, Pipetten en tips, wegwerp pipetten, en een elektrische pipet. Vanaf dit punt, denk om de juiste steriele techniek te gebruiken. Zet het waterbad en zorg ervoor dat het wordt verwarmd tot 37 ° C. De volg…

Discussion

Dit protocol werd ontwikkeld als een wijziging van het baanbrekende werk van Gary Banker en Kim Goslin ^1. Dit boek is een essentiële bron voor iedereen die geïnteresseerd is in het kweken van cellen – niet alleen de neuron-verrijkte culturen beschreven in het huidige protocol.

De drie meest kritische factoren in cel kweken zijn: steriliteit, snelheid, de keuze van de gebruikte medium.

Steriliteit – een laminaire flow / steriele kap, aseptische omstandigheden, en een steriele incubator zijn verpl…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Antibiotic antimitotic		Invitrogen	15240062
B-27 Supplement		Invitrogen	17504044	Serum free
Boric Acid		Sigma	B6768
Dnase I		Sigma	DN25
Fura-2, AM cell permeant		Molecular Probes	F1221
Glucose		Sigma	G7528
HBSS (10X)		Invitrogen	14185052
HEPES		Invitrogen	15630080
L-Glutamine		Sigma	G7513
MEM		Invitrogen	51200038
Neurobasal		Invitrogen	12348017	Without phenol red
Poly-L-Lysine Hydrobromide		Sigma	P6282
Pyruvic Acid		Sigma	P2256
Sodium Pyruvate		Sigma	P2256
Sodium Tetraborate		Sigma
Trypsin, 2.5% (10X)		Invitrogen	15090046