Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 从漂白的成年蠕虫分离的卵子开始。确保此程序的每一步都无菌进行,以避免培养细胞受到污染。 将颗粒悬浮在辣椒酶溶液中,奇蒂纳酶是一种分解甲壳素的酶,是蛋壳结构成分的一种大型多糖。
经过适当的消化期后,轻轻离心卵子,用细胞培养介质代替超母体,以阻止消化。 然后,通过一个18口径的针头将胚胎通过机械地分离出单个细胞。 接下来,过滤溶液,去除蛋壳或分离细胞团的碎屑。 将培养皿中的细胞涂上花生胶质素,这是一种通过结合细胞表面碳水化合物帮助细胞附着在盖子上的果胶。
在示例协议中,我们将为体外形态分化和分析准备胚胎细胞。
-在层流罩下工作以避免引入细菌污染时,将盆栽鸡蛋以每毫升两毫克的一毫升糖中补充,并将其转移到新鲜的15毫升圆锥管中。 根据酶的新鲜度,在室温下将管子摇动10至30分钟。当大约80%的蛋壳被消化时,将鸡蛋在900克下离心3分钟。
在小心地去除超细剂后,加入三毫升L15介质。 将鸡蛋转移到直径为六厘米的盘子中,然后用10毫升无菌注射器和18根针头开始手动分离。为了监测分离程度,将一滴悬浮液放入新鲜的培养皿中,并在显微镜下查看。继续,直到大约 80% 的细胞分离。
要去除细胞团,未消化的鸡蛋, 并孵化幼虫,通过5微米过滤器轻轻过滤悬架,并通过过滤器再运行4至5毫升L15中等,以恢复细胞。为了在离心后将过滤液在900克处培养细胞3分钟,将细胞重新悬浮在完整的L15介质中。每口井板1毫升,并在环境空气中将盘子存放在20摄氏度的潮湿密封室中。