モルフォリノ注射:ゼブラフィッシュの機能を研究する遺伝子発現をノックダウンする方法

-遺伝子の機能を決定する1つのアプローチは、その発現をノックダウンし、その効果を観察することです。モルフォリノオリゴマーは、ゼブラフィッシュのノックダウン研究でよく使用されます。

モルフォリノ治療のために、部分的に切断されたテールフィンを注射プレートに置き、プレートをステレオ顕微鏡の下に置く。

第二に、それはプレmRNA上のイントロンエキソン接合部に結合し、適切なスプライシングを防ぎ、細胞によって分解される欠陥のある転写産物を生じさせる。

- モルフォリノ注射の前日、 井戸の一端にノッチを切り取った2%のアガロースを持つ注射プレートを作り、注射手順のために魚を安定させるのに役立ちます。注入する直前に、RNAaseとDNAaseのフルモルコリノのフルオロセインタグ付きモルフォリノを適切な濃度に希釈し、65°Cの水浴で5分間インキュベートします。

次に、魚を麻酔して注入プレートに置きます。余分な液体をすべて取り除き、ステレオ顕微鏡のステージにプレートを置きます。

針を回生組織に穏やかに挿入し、各骨線に遠位し、芽腫に位置するまで遠回しに押します。針が正しく局在化したら、マイクロインジェクションシステムの指示に従い、注射ごとにモルフォリノの5ナノリットルの滴を注入する。注射ごとにモルフォリノ溶液の黄色いパフが見られ、ブタルゼマへの注射を局所化するのに役立ちます。