Intraperitoneal injektion: En metode til løsning levering i bughulen af en voksen zebrafisk

- Spol en voksen fisk i 24 timer før injektion for at tømme mave-tarmkanalen og skabe ekstra plads i maven. På dagen for proceduren bedøver fisken med tricain og læg den i en slot i en våd svamp med ventralsiden vendt op.

Derefter pipettes den ønskede mængde injektionsopløsning på et stykke laboratoriefilm og trækker den ind i en insulinnål. Placer nålen mellem bækkenfinnerne i en 45 graders vinkel fra den forreste bageste kropsakse og skub den forsigtigt ind ved midterlinjen.

Efter injektion skal du hurtigt overføre fisken til en genopretningstank, der indeholder ferskvand. Hvis fisken ikke begynder at svømme med det samme, skal du hvirvle vandet nær gællerne for at hjælpe den med at komme sig efter anæstesi. I eksempelprotokollen injicerer vi en mycobacterium marinumopløsning i RAG1 mutantfisk for at studere infektion.

- Først rør ud af 5 mikroliter dråbe af fortyndet bakteriel opløsning på et stykke paraffin film. Derefter trække dråben ind i en 30 gauge insulin nål. Brug en fem til otte måneder gammel fisk til dette eksperiment, med den ene er en vild-type fisk og den anden er en RAG mutant fisk.

Placer disse fisk ventral side op i slidserne af et stykke fugtig skummet plast. Injicere insulin nål mellem bækken finnerne i en 45 graders vinkel. Hold nålen åbning opad for at sikre, at hele åbningen er inde i bughulen. Derefter langsomt injicere bakteriel opløsning. Efter dette, forsigtigt fjerne nålen og straks overføre fisken til en nyttiggørelse tank fyldt med frisk tank vand.

Tag prøver fra bakterielle aliquot i brug hvert 15. minut på 7H10 plader. Inkuber disse prøver ved 29 grader Celsius i fem dage for at kontrollere infektionsdosis. Kontroller fiskens trivsel regelmæssigt, og sørg for at aflive enhver fisk med infektionssymptomer ved at inkubere dem i vand med mere end 0,02% af 3-aminobenzoinsyre ethylester.