Non invasive Intratrachéal intubation pour étudier la pathologie et la physiologie des souris poumon

L’objectif global de cette procédure est d’utiliser l’intubation intratrachéale pour étudier les effets des traitements expérimentaux sur la physiologie et la pathologie du poumon miroir. Ceci est accompli en mesurant d’abord une souris témoin d’une taille similaire à la souris expérimentale de la bouche au point de bifurcation bronchique du poumon. Ensuite, utilisez le système d’éclairage d’intubation BioLite pour localiser la trachée.

La fibre optique est ensuite rapidement retirée après l’insertion, laissant le cathéter en place. Dans la dernière étape, une solution contenant le traitement expérimental est ajoutée aux poumons par le cathéter. En fin de compte, la propagation uniforme de la molécule d’intérêt peut être visualisée dans tout le poumon grâce à l’utilisation d’un colorant vert d’accompagnement.

Le principal avantage de cette technique par rapport aux autres méthodes d’intubation est qu’avec notre technique, le système d’élimination par fibre optique facilite la localisation du tricycle ainsi que le placement du cathéter, assurant une livraison optimale du matériel d’intérêt dans le poumon. La démonstration de la procédure se fera sur place, un post-OC de mon laboratoire Avant de commencer la procédure, mesurez la longueur entre la bouche et le point bronchique à l’aide d’une souris d’entraînement de taille similaire pour déterminer la longueur appropriée du cathéter à insérer pendant l’intubation. Appliquez ensuite une pommade vétérinaire sur les deux yeux de l’animal de laboratoire anesthésié.

Après quelques minutes, pincez un pied pour confirmer la sédation, puis placez l’animal sur une intubation. Tenez-vous incliné à environ 60 degrés. Accrochez les incisives supérieures sur un petit élastique situé en haut du support pour maintenir l’animal en place, puis utilisez un coton-tige pour rétracter doucement la langue de la souris d’un côté.

L’aspect le plus difficile de cette procédure est de localiser clairement la trachée, qui est séparée de l’asso Fergus et dans laquelle le cathéter doit être inséré. Pour réussir, assurez-vous que le larynx est bien éclairé par la fibre optique, et soyez conscient de la direction dans laquelle le cathéter doit être inséré. Insérez soigneusement le système d’intubation jusqu’à ce que le larynx soit visualisé à l’aide du guide en forme de fibre optique.

Une fois que l’épiglotte et les cartilages hyoïdes sont visualisés, insérez la fibre sur l’épiglotte et entre les cartilages hyoïdes en faisant avancer le système jusqu’à ce que la longueur du cathéter préalablement déterminée ait été insérée. Une fois le cathéter en place, retirez rapidement la fibre optique comme un guide pour permettre à l’animal de respirer Normalement, administrez ensuite la solution d’intérêt dans le cathéter. Une bonne intubation entraînera l’aspiration immédiate de la solution à travers le tube dans les poumons.

Dès que la solution est aspirée dans les poumons, retirez la souris du support et remettez-la dans la cage d’origine. Observez la souris jusqu’à ce qu’elle commence à bouger. Une fois que l’état de santé de l’animal est confirmé, remettez la cage dans son râtelier.

Dans les premières expériences, une solution de colorant vert a été utilisée pour intuber les souris pour s’entraîner. Les poumons ont été immédiatement réséqués après l’intubation pour examiner à quel point la couleur était uniformément répartie. Le colorant a été observé dans la plupart des parties du poumon, ce qui indique une intubation réussie.

La technique a ensuite été appliquée pour étudier la fibrose pulmonaire induite par la bléomycine en utilisant six souris C 57 BL trois semaines après l’intubation intratrachéale avec de la bléomycine ou une solution saline comme contrôle. Les poumons ont été examinés par analyse histologique pour examiner le développement de la fibrose induite par la bléomycine. Aucune fibrose n’était visible à faible ou à fort grossissement dans les poumons des animaux traités au sérum physiologique.

En revanche, les souris intubées à la bléomycine ont développé une fibrose dans tous leurs poumons, comme le montrent les images à faible et à fort grossissement. La teneur en hydroxyproline était plus élevée dans les poumons de souris traités à la bléomycine que dans les poumons de souris traités au sérum physiologique. Démontrant en outre que les souris traitées à la bléomycine développent une fibrose pulmonaire.

La zone endommagée a ensuite été recouverte d’une grille en treillis de 121 points et le nombre d’intersections ou de points tombant sur les zones fibreuses a été compté et exprimé en pourcentage d’un total de 121 points, le pourcentage de zones endommagées ainsi compté était proportionnel à la quantité de bléomycine administrée. Assurez-vous d’avoir une idée à l’avance de la profondeur à laquelle le cathéter doit être inséré dans la trachée et de confirmer que la solution est aspirée par le cathéter dans le poumon dès qu’elle est ajoutée.