Questo protocollo illustra come eseguire immunoistochimica su sezionato larva di Drosophila.
Abstract
Il<em> Drosophila</em> Giunzione neuromuscolare (NMJ) è stabilito un sistema modello utilizzato per lo studio dello sviluppo e della plasticità sinaptica. L'uso diffuso del<em> Drosophila</em> Motore del sistema è dovuta alla sua alta accessibilità. Può essere analizzati con cella singola risoluzione. Ci sono 30 muscoli per hemisegment la cui disposizione all'interno delle mura organo periferico sono noti. Un totale di 31 neuroni motori attribuiscono a questi muscoli in un modello che ha alta fedeltà. Utilizzando biologia molecolare e della genetica, si possono creare animali transgenici o mutanti. Poi, si può studiare le conseguenze dello sviluppo sulla morfologia e la funzione del NMJ. Immunoistochimica può essere usato per l'immagine chiaramente i componenti del NMJ. In questo articolo mostriamo come utilizzare colorazione anticorpi per visualizzare le<em> Drosophila</em> Larvale NMJ.
Protocol
Prima di iniziare Preparare le seguenti soluzioni: PBT (0,1% Triton X100 in PBS 1X), PBTB (0,2% BSA in PBT), e PBTN (2% in PBTB NGS). Sezionare larve di Drosophila. Si prega di consultare Drosophila larvale Dissection NMJ. Immunoistochimica Spostare le larve in una provetta contenente 1,5 ml PBT. Lavare le larve due volte per 15 minuti in PBT. Nota: per lavare, posizionare il tubo di 1,5 ml di un mixer nutator. Asportare il liqu…
Discussion
Immunoistochimica (IHC) è di vitale importanza per lo studio della biologia NMJ perché consente la visualizzazione delle NMJ. Questo è ottenuto utilizzando anticorpi che riconoscono la membrana neuronale (ad esempio, HRP), il presynapse (ad esempio, CSP, SYT), e / o il postsynapse (ad esempio, DLG). Molecole di segnalazione, proteine strutturali, nuove proteine o di interesse possono anche essere colorati. Poi, i geni possono essere mutati o missexpressed e IHC in grado di rilevare perturbazione di strutt…