Drosophila 애벌레 NMJ Immunohistochemistry
Summary
이 프로토콜은 해부 Drosophila의 유충에 immunohistochemistry을 수행하는 방법을 보여줍니다.
Abstract
<em> Drosophila</em> 신경근육학 교차점 (NMJ)은 시냅스 개발 및 소성 연구에 사용되는 기존 모델 시스템입니다. 의 널리 사용<em> Drosophila</em> 모터 시스템은 높은 접근성 때문입니다. 이것은 단일 셀 해상도 분석하실 수 있습니다. 그의 배열 주변 본문 벽 내에 알려져 있습니다 hemisegment 30 근육이 있습니다. 31 모터 뉴런의 총 높은 충실도를 가진 패턴 이러한 근육을 첨부합니다. 분자 생물학과 유전학을 사용, 하나는 유전자 변형 동물이나 돌연변이를 만들 수 있습니다. 그런 다음, 하나는 NMJ의 형태와 기능의 발달 결과를 공부할 수 있습니다. Immunohistochemistry 분명 이미지 NMJ의 구성 요소를 사용할 수 있습니다. 이 문서에서는, 우리는을 시각화하기 위해 항체 염색법을 사용하는 방법<em> Drosophila</em> 애벌레 NMJ.
Protocol
Discussion
그것은 NMJ의 시각화를 가능하게하기 때문에 Immunohistochemistry (IHC)는 NMJ 생물학 연구를위한 중요합니다. 이것은의 연결 멤브레인 (예 : HRP), presynapse (예 : CSP, SYT), 및 / 또는 postsynapse (예 : DLG)를 인식 항체를 사용하여 수행됩니다. 신호 분자, 구조 단백질, 또는 관심있는 소설 단백질도 얼룩 수 있습니다. 그렇다면 유전자가 변이된 또는 missexpressed하고, IHC는 시냅스 구조 및 / 또는의 연결 신호의 섭동?…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 000000-1063-181 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | ||
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | ||
| Adams™ Nutator Mixer | Becton, Dickinson and Company | 421105 | ||
| No.1 Precision knife | X-Acto | 3201 | ||
| No. 16 Blades | X-Acto | 216 | ||
| ProLong Gold Antifade reagent | Invitrogen Corporation | 36930 |
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Drosophila. Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35-42 (2007).
