Este protocolo muestra cómo realizar técnicas de inmunohistoquímica sobre disecados larvas de Drosophila.
Abstract
La<em> Drosophila</em> Unión neuromuscular (UNM) es un sistema modelo establecido utilizado para el estudio del desarrollo sináptico y su plasticidad. El uso generalizado de la<em> Drosophila</em> Motor del sistema se debe a su gran accesibilidad. Se puede analizar con una sola célula de resolución. Hay 30 músculos por hemisegment cuya disposición dentro de la pared del cuerpo periférico se conocen. Un total de 31 neuronas motoras se adhieren a estos músculos en un patrón que tiene una alta fidelidad. Utilizando la biología molecular y la genética, se puede crear animales transgénicos o mutantes. Entonces, se puede estudiar las consecuencias del desarrollo sobre la morfología y función de la UNM. La inmunohistoquímica puede ser usado para la imagen con claridad los componentes de la UNM. En este artículo se muestra cómo utilizar la tinción de anticuerpos para visualizar el<em> Drosophila</em> Larval NMJ.
Protocol
Antes de empezar Prepare las siguientes soluciones: PBT (0,1% Triton X100 en PBS 1X), PBTB (0,2% de BSA en PBT), y PBTN (NGS 2% en PBTB). Diseccionar las larvas de Drosophila. Por favor vea las larvas de Drosophila disección NMJ. Inmunohistoquímica Mueva las larvas de un tubo de 1.5 ml contiene PBT. Lavado de las larvas de dos veces durante 15 minutos en el PBT. Nota: para lavar, se coloca el tubo de 1.5 ml en un mezclador nut…
Discussion
Inmunohistoquímica (IHC) es de vital importancia para el estudio de la biología MNJ, ya que permite la visualización de la UNM. Esto se logra mediante el uso de anticuerpos que reconocen la membrana neuronal (por ejemplo, HRP), la presynapse (por ejemplo, CSP, SYT), y / o la postsynapse (por ejemplo, DLG). Moléculas de señalización, las proteínas estructurales, o de nuevas proteínas de interés también puede ser manchada. Entonces, los genes pueden mutar o missexpressed y IHC puede detectar la perturbación de …