Drosophila Larvernas NMJ Immunohistokemi
Summary
Detta protokoll visar hur du utför immunohistokemi på dissekeras Drosophila larv.
Abstract
Den<em> Drosophila</em> Neuromuskulära förbindelsen (NMJ) är en etablerad modell som används för studier av synaptiska utveckling och plasticitet. Den utbredda användningen av<em> Drosophila</em> Motorn är på grund av sin höga tillgänglighet. Den kan analyseras med encelliga upplösning. Det finns 30 muskler per hemisegment vars arrangemang inom det perifera kroppen väggen är kända. Sammanlagt 31 motoriska nervceller fäster dessa muskler i ett mönster som har hög trohet. Använda molekylärbiologi och genetik, kan man skapa transgena djur eller mutanter. Sedan kan man studera utveckling konsekvenser på morfologi och funktion NMJ. Immunohistokemi kan användas för att tydligt bild komponenterna i NMJ. I den här artikeln visar vi hur man använder antikroppar färgning att visualisera<em> Drosophila</em> Larver NMJ.
Protocol
Discussion
Immunohistokemi (IHC) är avgörande för studier av NMJ biologi, eftersom det möjliggör visualisering av NMJ. Detta sker med hjälp av antikroppar som känner igen den neuronala membran (t.ex. HRP), den presynapse (t.ex. CSP, SYT), och / eller postsynapse (t.ex. DLG). Signalmolekyler, strukturella proteiner, eller nya proteiner av intresse kan också färgas. Sedan kan gener vara muterade eller missexpressed, och IHC kan upptäcka störning av synaptiska struktur och / eller neuronal signalering.
<p class="jove_c…Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Stereomicroscope “Stemi” 2000 | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 495101-9804-000 | ||
| Light Source KL 1500 LCD | Carl Zeiss MicroImaging Inc. | 000000-1063-181 | ||
| Dumont SS Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11200-33 | ||
| Dumont #5 Forceps | Fine Science Tools Inc. | 11252-20 | ||
| Adams™ Nutator Mixer | Becton, Dickinson and Company | 421105 | ||
| No.1 Precision knife | X-Acto | 3201 | ||
| No. 16 Blades | X-Acto | 216 | ||
| ProLong Gold Antifade reagent | Invitrogen Corporation | 36930 |
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on identified muscle cells of Drosophila larvae. J Neurosci. 9, 710-725 (1989).
- Kesheshian, H., Broadie, K., Chiba, A., Bate, M. The Drosophila neuromuscular junction: a model system for studying synaptic development and function. Annu Rev Neurosci. 19, 545-575 (1996).
- Collins, C. A., DiAntonio, A. Synaptic development: insights from Drosophila. Curr Opin Neurobiol. 17 (1), 35-42 (2007).
