Questo protocollo illustra come eseguire immunoistochimica su sezionato larva di Drosophila.
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Articolo metodologico
Drosophila larvali NMJ Immunoistochimica
In questo articolo
Sommario
Protocollo
Prima di iniziare
- Preparare le seguenti soluzioni: PBT (0,1% Triton X100 in PBS 1X), PBTB (0,2% BSA in PBT), e PBTN (2% in PBTB NGS).
- Sezionare larve di Drosophila. Si prega di consultare Drosophila larvale Dissection NMJ.
Immunoistochimica
- Spostare le larve in una provetta contenente 1,5 ml PBT. Lavare le larve due volte per 15 minuti in PBT. Nota: per lavare, posizionare il tubo di 1,5 ml di un mixer nutator. Asportare il liquido con un pippetor e sostituirlo con il liquido fresco.
- Rimuovere il PBT. Lavare in PBTB due volte per 30 minuti.
- Rimuovere il PB....
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Discussione
Immunoistochimica (IHC) è di vitale importanza per lo studio della biologia NMJ perché consente la visualizzazione delle NMJ. Questo è ottenuto utilizzando anticorpi che riconoscono la membrana neuronale (ad esempio, HRP), il presynapse (ad esempio, CSP, SYT), e / o il postsynapse (ad esempio, DLG). Molecole di segnalazione, proteine strutturali, nuove proteine o di interesse possono anche essere colorati. Poi, i geni possono essere mutati o missexpressed e IHC in grado di rilevare perturbazione di struttura sinapti.......
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Materiali
| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Stereomicroscopio “Stemi” 2000 | Carl Zeiss, Inc. | 495101-9804-000 | |
| Sorgente luminosa KL 1500 LCD | Carl Zeiss, Inc. | 000000-1063-181 | |
| Pinzette Dumont SS | Fine Science Tools | 11200-33 | |
| Pinzette Dumont n. 5 | Fine Science Tools | 11252-20 | |
| Mixer nutatore Adams™ | BD Biosciences | 421105 | |
| Taglierino di precisione n. 1 | X-Acto | 3201 | |
| Lame n. 16 | X-Acto | 216 | |
| Reagente anti-sfalsamento ProLong Gold | Invitrogen | 36930 |
Riferimenti
- Jan, L. Y., Jan, Y. N. Properties of the larval neuromuscular junction in Drosophila Melanogaster. J. Physiol. 262, 189-214 (1976).
- Johansen, J., Halpern, M. E., Johansen, K. M., Keshishian, H. Stereotypic morphology of glutamatergic synapses on ident....
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Ristampe e permessi
