الخلايا البطانية التي تشكل مستعمرة السلف (ECFCs) هي أداة واعدة لدراسة التوازن الأوعية الدموية والإصلاح.<sup> 1،2</sup> هذه الورقة بتقديم رواية الحيوان مصل طريقة مجانية للعزلة وتوسيع ECFC من الدم البشري heparinised الكبار الطرفية مع تجمع الصفيحات lysate الإنسان (pHPL) يقلل من مخاطر الألغام المضادة للالبقري التحصين.
Abstract
هذه الورقة بتقديم استراتيجية جديدة لإنعاش الخلايا البطانية السلف تشكيل مستعمرة (ECFCs) من heparinized لكن unmanipulated خلاف الكبار الدم المحيطي الإنسان داخل وسيلة من 12 يوما. ويمكن توسيع نطاق واسع بعد أن حصلت> 1×10 8 ECFCs لاجراء مزيد من الاختبارات. مفيد يمكن باستخدام pHPL استبعاد الاتصال بالخلايا البشرية مع مستضدات المصل البقري. ويمكن من خلال التدفق الخلوي والمناعية تتسم الخلايا المعزولة كما ECFC ويمكن اختبارها في المختبر لتشكيل وظائف الأوعية الدموية مثل الهياكل في مقايسة matrigel. ويمكن كذلك أن تكون هذه الخلايا حقن تحت الجلد في نموذج الفأر لتشكيل وظيفية ، perfused السفن في الجسم الحي. بعد التوسع والانتشار على المدى الطويل الحفظ بالتبريد والوظيفة والاستقرار الجيني يبدو أن الحفاظ عليها. 3،4
هذه العزلة من البروتين الحيواني الحر والأسلوب توسيع ينطبق بسهولة على توليد كمية كبيرة من ECFCs.
Protocol
A.) ECFC ISOLATON DAY 1 : قبل أن تبدأ مع التجربة تحضير مستنبت نمو الخلايا غشائي متوسطة 2 (EGM – 2). تكملة غشائي بصل متوسطة 500ml – 2 مع الهيبارين (1ml يو 1000 / مل) ، والحل 100X 5ml من البنسلين / الستربتوميسين (جم…
Discussion
هذه العزلة رواية وطريقة توسيع عملية بسيطة وفعالة تكون أكثر كفاءة وأقل استهلاكا للوقت من خلال تجنب أي فصل الخلية (أي التدرج الكثافة المطلوبة) ، وأقل كلفة من التقنيات التقليدية. باستخدام اتصال pHPL لمستضدات الأبقار وxenoimmunization اللاحقة المفترضة هي مستبعدة. خلال الفترة من ا…
Acknowledgements
وأشكر الدكتور المؤلف كاتارينا Schallmoser لتوفير pHPL وFrühwirth مارغريتا وثالر دانييلا للحصول على مساعدة فنية ممتازة.
Hofmann, N. A., Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells. J. Vis. Exp. (32), e1524, doi:10.3791/1524 (2009).