Ensaio Metástase Experimental

Summary

Este artigo descreve os procedimentos de um ensaio de metástase experimental que é usado para determinar o potencial metastático de linhagens de células humanas de câncer.

Abstract

Metástase é a principal causa de morte em pacientes com câncer. Para entender o mecanismo de metástases, um ensaio de metástase experimental foi estabelecida usando camundongos imunodeficientes. Este artigo delineia os procedimentos envolvidos neste ensaio, incluindo a preparação da amostra, injeção intravenosa, e a cultura de células de metástases pulmonares. Resumidamente, um número pré-determinado de células humanas de câncer foram preparados<em> In vitro</em> E injetado diretamente na circulação de camundongos imunodeficientes através das veias sua cauda. Um pequeno número de células sobreviver à turbulência na circulação e crescer como metástases em órgãos internos, como pulmão. Os ratos injetados são dissecados após um certo período. A distribuição do tecido de metástases é determinada sob um microscópio de dissecação. O número de metástases em um determinado tecido é contado e que se correlaciona diretamente com a capacidade metastática das células cancerosas injetadas. As metástases surgido são isoladas e cultivadas<em> In vitro</em> Como linhas celulares, que freqüentemente mostram maior capacidade metastática do que a linha dos pais quando injetado novamente em camundongos imunodeficientes. Esses derivativos altamente metastáticas se tornar ferramentas úteis para a identificação de genes ou as vias moleculares que regulam a progressão metastática.

Protocol

1. Preparação da Amostra Cultivar células confluentes para ~ 70% em seus meios específicos, com fatores de crescimento ou FBS (por exemplo, DMEM com SFB 10% para MC-1 células). Aspirar a mídia da placa e lavar cuidadosamente várias vezes com um x PBS (8 g / L de NaCl, 0,2 g / L de KCl, 1,15 g / L de Na 2 HPO 4 .7 H 2 O, 0,2 g / L de KH 2 PO 4, pH 7,3). Aspirar PBS e adicionar 2 ml de tripsina 0,05% em versene (0,014 g / L de vermelho de f…

Discussion

Metástase é a principal causa de morte em pacientes com câncer. Trata-se de quatro etapas principais: separação de células de câncer de seus loci primários, sua entrada em circulação (intravasation), sua saída de circulação (extravasamento), e sobrevivência e crescimento em um órgão distante. Metástase em humanos é considerada um processo lento e muitas vezes se manifesta após anos de latência. Para estudar a sua progressão em tempo hábil, o ensaio relativamente rápido acima experimental foi estab…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Invitrogen	10313-021
FBS		Hyclone	SH30088.03
HBSS		Invitrogen	14175-095
NaCl		Sigma-Aldrich	S9888
KCl		Mallinckrodt Chemicals	6838-04
Na2 HPO4.7H2O		Mallinckrodt Chemicals	7896-04
KH2PO4		Mallinckrodt Chemicals	7100-12
Phenol red		Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na		EMD Biosciences	4010
Trypan Blue		Invitrogen	15250-061
Trypsin 2.5%		Invitrogen	15090-046
Ethanol		Ultrapure	200-CSGP
50 ml Falcon Tube		VWR	89039-656
Microcentrifuge Tubes		Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70µm Cell Strainer		BD Biosciences	352350
5ml Falcon Culture Tube		VWR	60818-576
Hemacytometer		Hausser Scientific	15170-208
1 ml syringe		BD Biosciences	329650
30 ½ gauge needle		BD Biosciences	305106
Mouse restrainer		Plas Labs Inc.	551-BSRR
Surgical scissors		Fisher Scientific	08-940
Forceps		Fisher Scientific	08-902
Dissecting Microscope		Nikon	SMZ1500
Benchtop Centrifuge		Thermoscientific	75003491