Dit artikel beschrijft de procedures van een experimentele metastase test die wordt gebruikt om de metastatisch potentieel van kanker bij de mens cellijnen te bepalen.
Abstract
Metastase is de belangrijkste oorzaak van overlijden bij patiënten met kanker. Om te begrijpen van het mechanisme van metastase, was een experimenteel metastase assay bepaald aan de hand immunodeficiënte muizen. Dit artikel schetst de procedures die in deze test, inclusief monstervoorbereiding, intraveneuze injectie, en het kweken cellen van longmetastasen. In het kort werden een vooraf bepaald aantal van menselijke kankercellen voorbereid<em> In vitro</em> En direct ingespoten in de circulatie van immunodeficiënte muizen door middel van hun staart aderen. Een klein aantal cellen overleven de turbulentie in de circulatie en te groeien als uitzaaiingen in de interne organen, zoals de long. De geïnjecteerde muizen zijn ontleed na een bepaalde periode. Het weefsel verspreiding van metastasen is bepaald volgens een dissectie microscoop. Het aantal metastasen in een specifiek weefsel is geteld en het rechtstreeks correleert met de metastatische vermogen van de geïnjecteerde kankercellen. De ontstane metastasen worden geïsoleerd en gekweekt<em> In vitro</em> Als cellijnen, die vaak versterkt gemetastaseerde mogelijkheden dan de ouderlijke lijn wanneer weer geïnjecteerd in immunodeficiënte muizen. Deze zeer gemetastaseerde derivaten worden nuttige instrumenten voor het identificeren van genen of moleculaire pathways die metastatische progressie reguleren.
Protocol
1. Monstervoorbereiding Grow cellen ~ 70% confluent in hun specifieke media met groeifactoren of FBS (bijvoorbeeld DMEM met 10% FBS voor de MC-1-cellen). Aspireren media van plaat-en voorzichtig een paar keer wassen met 1 x PBS (8 g / L NaCl, 0,2 g / L KCl, 1,15 g / L van Na 2 HPO 4 0.7 H 2 O, 0,2 g / L van KH 2 PO 4, pH 7,3). Aspireren PBS en voeg 2 ml van 0,05% trypsine in Versene (0,014 g / L van fenol rood en 0,2 g / L EDTA-Na in 1 x PBS, pH…
Discussion
Metastase is de belangrijkste oorzaak van overlijden bij patiënten met kanker. Het gaat om vier belangrijke stappen: losmaken van kankercellen uit hun primaire loci, in het verkeer brengen (intravasation), hun exit uit de circulatie (extravasatie), en overleving en de groei in een verre orgaan. Metastasen in de mens wordt beschouwd als een langzaam proces en vaak gemanifesteerd na jaren van latentie. Het bestuderen van de progressie in een tijdig, was de bovenstaande relatief snel experimentele test opgericht in immuno…
Acknowledgements
Dit protocol werd getest en geoptimaliseerd in eerste instantie in het laboratorium van Dr Richard Hynes (MIT). De financiering wordt verstrekt door de NYSTEM IDEA Award (voor LX) en Ruth L. Kirschstein National Research Service Award (voor LX).