Metastasi di analisi sperimentale

Summary

In questo articolo vengono descritte le procedure di un test metastasi sperimentale che viene utilizzato per determinare il potenziale metastatico di linee cellulari tumorali umane.

Abstract

Metastasi è la principale causa di morte nei pazienti oncologici. Per capire il meccanismo di metastasi, un test sperimentale metastasi è stata stabilita utilizzando topi immunodeficienti. Questo articolo delinea le procedure coinvolte in questo test, compresa la preparazione del campione, l'iniezione endovenosa, coltura e le cellule di metastasi polmonari. In breve, un pre-determinato numero di cellule tumorali umane sono state preparate<em> In vitro</em> E iniettato direttamente nella circolazione di topi immunodeficienti attraverso le loro vene coda. Un piccolo numero di cellule di sopravvivere alle turbolenze nella circolazione e crescere come metastasi in organi interni, come quello al polmone. I topi iniettati vengono sezionati dopo un certo periodo. La distribuzione tissutale delle metastasi è determinato sotto un microscopio da dissezione. Il numero di metastasi in un tessuto specifico è contato e si correla direttamente con la capacità metastatica delle cellule tumorali iniettate. Le metastasi sono sorti isolate e coltivate<em> In vitro</em> Come linee cellulari, che spesso mostrano una maggiore capacità metastatica rispetto alla linea parentale quando iniettato nuovamente in topi immunodeficienti. Questi derivati ​​altamente metastatico diventare strumenti utili per identificare geni o pathway molecolari che regolano la progressione metastatica.

Protocol

1. Preparazione del campione Crescere le cellule a confluenti ~ 70% nelle loro supporto specifico con fattori di crescita o FBS (ad esempio, con DMEM 10% FBS per MC-1 le cellule). Aspirare multimediali da piastra e lavare delicatamente più volte con 1 x PBS (8 g / L di NaCl, 0,2 g / L di KCl, 1,15 g / L di Na 2 HPO 4 0,7 H 2 O, 0,2 g / L di KH 2 PO 4, pH 7,3). Aspirare il PBS e aggiungere 2 ml di tripsina 0,05% a versene (0,014 g / L di rosso f…

Discussion

Metastasi è la principale causa di morte nei pazienti oncologici. Si tratta di quattro fasi principali: il distacco delle cellule tumorali dal loro loci primaria, la loro entrata in circolazione (intravasation), la loro uscita dalla circolazione (stravaso), e la sopravvivenza e la crescita in un organo lontano. Metastasi in umano è considerato un processo lento e spesso si manifesta dopo anni di latenza. Per studiare la sua progressione in modo tempestivo, quanto sopra relativamente rapido test sperimentale è stato s…

Materials

Material Name	Tipo	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Invitrogen	10313-021
FBS		Hyclone	SH30088.03
HBSS		Invitrogen	14175-095
NaCl		Sigma-Aldrich	S9888
KCl		Mallinckrodt Chemicals	6838-04
Na2 HPO4.7H2O		Mallinckrodt Chemicals	7896-04
KH2PO4		Mallinckrodt Chemicals	7100-12
Phenol red		Sigma-Aldrich	P3532
EDTA-Na		EMD Biosciences	4010
Trypan Blue		Invitrogen	15250-061
Trypsin 2.5%		Invitrogen	15090-046
Ethanol		Ultrapure	200-CSGP
50 ml Falcon Tube		VWR	89039-656
Microcentrifuge Tubes		Axygen Scientific	MCT-175-C
Falcon 70µm Cell Strainer		BD Biosciences	352350
5ml Falcon Culture Tube		VWR	60818-576
Hemacytometer		Hausser Scientific	15170-208
1 ml syringe		BD Biosciences	329650
30 ½ gauge needle		BD Biosciences	305106
Mouse restrainer		Plas Labs Inc.	551-BSRR
Surgical scissors		Fisher Scientific	08-940
Forceps		Fisher Scientific	08-902
Dissecting Microscope		Nikon	SMZ1500
Benchtop Centrifuge		Thermoscientific	75003491