Dissezione della ghiandola linfatica larvale: isolamento dell'organo produttore di emociti Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Reimels, T. A. e Pfleger, C.M. Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae. J. Vis. Exp. (2016).
Questo video descrive la ghiandola linfaca drosofila – il sito primario dell’ematopoiesi nella larva della mosca – e mostra un protocollo di esempio per sezionare e montare l’organo per l’immunoistochimica e l’imaging fluorescente.
Protocol
Questo protocollo è un estratto da Reimels e Pfleger, Methods to Examine the Lymph Gland and Hemocytes in Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. 1. Immunoistochimica della ghiandola linfale larvale NOTA: La ghiandola linfatico si trova a circa un terzo di lunghezza dall’estremità anteriore di una larva leggermente sotto il cervello sul lato dorsale. (Vedere freccia nella figura 1B</strong…
Representative Results
Figura 1: Melanizzazione in vivo delle cellule di cristallo. A) Le larve sono state posizionate singolarmente in tubi PCR prima del riscaldamento. Le frecce rosse indicano larve che non si trovano nella parte inferiore dei tubi. B) Un tipico modello di melanizzazione delle cellule cristalline dopo il riscaldamento, che a volte rivela la ghiandola linfaca (freccia; lato dorsale mo…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
Citazione di questo articolo
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).