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Articolo metodologico
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30 aprile 2023
Fonte: Germania, E. M., et al. Isolamento di popolazioni di neuroni specifici dal nematode Caenorhabditis elegans. J. Vis. Exp. (2019).
Questo video descrive un metodo per dissociare vermi interi in una sospensione a singola cellula adatta per FACS o immunoprecipitazione di cellule intatte.
Questo protocollo è un estratto da Germany et al, Isolation of Specific Neuron Populations from Roundworm Caenorhabditis elegans, J. Vis. Exp.(2019).
1. Preparazione e raccolta di vermi invecchiati per l'isolamento cellulare
NOTA: Spiegato di seguito è l'isolamento dei neuroni colinergici dal ceppo transgenico unc-17::GFP (OH13083) ottenuto dal deposito del ceppo Caenorhabditis Genetics Center (CGC) presso l'Uni....
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| Nome | Azienda | Numero di catalogo | Commenti |
|---|---|---|---|
| Agar, Grado di Biologia Molecolare | VWR | A0930 | |
| CaCl2 | sigma | Codice: C5670 | |
| Contacellule Automatizzato Contess | Invitrogen | Z359629 | |
| DTT | USBiologico | D8070 | |
| FBS | Omega Scientifico | FB-02 | |
| Fluorodesossiuridina | sigma | F0503 | |
| HEPES | sigma | H3375 | |
| KCl | Amresco | O395 | |
| KH2PO4 | USBiologico | P5110 | |
| L-15 Medium di Leibovitz | Gibco | 21083027 | |
| MgCl2 | sigma | Codice: M8266 | |
| MgSO4 | USBiologico | Visualizzazione del materiale M2090 | |
| Na2HPO4·7H2O | USBiologico | S5199 | |
| NaCl | VWR | X190 | |
| NaOCl (Candeggina) | Clorox | ||
| Penicillina-Streptomicen | Fisher Scientifico | 15140122 | |
| Pronasi E | sigma | Codice: 7433 | Miscela di proteasi da Streptomyces griseus |
| SDS | Amresco | O227 | |
| Stereomicroscopio a fluorescenza SMT1-FLQC | Ricerca Tritech | ||
| Saccarosio | USBiologico | S8010 |
