Overview
Videon beskriver undvikande och thigmotaxis analys av zebrafisk larver. Videon undersöker zebrafisklarvernas beteende som svar på visuell aversiv stimulans.
Protocol
1. Bildinspelning
- Upp till 20 larver kan placeras i varje körfält på plattorna. Vanligtvis används 5 larver per körfält för att underlätta den mest exakta spårningen av simhastigheten och för att minska antalet larver som behövs per experiment. Körfälten kan fyllas med äggvatten med eller utan läkemedel eller toxiska medel beroende på experimentet. Körfälten bör dock inte fyllas på hela vägen förrän de placeras i bildskåpen. detta förhindrar spill. För konsistens bör larverna ha en acklimatiseringsperiod på tio minuter efter att de placerats i agarosaformarna och placeras ovanpå den bärbara skärmen. Att effektivt flytta larverna från Petri-skålen till agarose lane hjälper till att minska larvernas stress. Detta är lättast när larverna är inrymda i grunda tankar eller petriskålar.
- Bildskåpen inkluderar en Canon digitalkamera som används för timelapse fotografering och en bärbar dator. Kameran ska placeras högst upp i skåpet och riktas mot botten av skåpet där en 15,6 tums skärmdator ska placeras med skärmen uppåt (Bild 1). Fyra plattor ska placeras för hand direkt ovanpå den bärbara skärmen. Vid denna tidpunkt kan körfälten toppas med äggvatten eller kemisk behandling så att det är i nivå med toppen av körfältet (för att eliminera skuggor på kanterna på körfälten i bilderna).
- En PowerPoint-presentation används som en aversiv stimulans för larverna. Tidigare visades rörliga röda bollar för zebrafisklarver i 6 eller 12 multi-well plattor. Den aktuella PowerPoint börjar med en tom vit bakgrund i 15 minuter, följt av 15 minuter av en rörlig röd stapel på den övre halvan av plattan (bild 2). För att eliminera överhettning av larverna är det bäst att köpa en bärbar dator med en skärmtemperatur som inte går över 28 °C. För att undvika avdunstning av vätskan i agarosebanorna bör den maximala avbildningstiden hållas under en timme.
- Digitalkameran ska programmeras för timelapse fotografering, ta bilder var 6: e sekund för totalt 300 bilder per experiment. Frekvensen och längden kan dock justeras beroende på experiment och beteende kvantifiering. Tidigare användes förlängda bildtider med längre intervall mellan varje bild. Kameran kan ställas in med lägre upplösning för avbildning med videohastighet (30 bilder per sekund). Medan den lägre upplösningen begränsar inspelningarna till en enda multiwell-platta, är videoinspelningarna lämpliga för att avbilda snabba simhändelser.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 1. Bildskåp. Bildskåp byggdes speciellt i vårt laboratorium och användes för beteendeanalyser med hög genomströmning. En digitalkamera på 15 megapixel var fäst på toppen av skåpet vänd nedåt för att samla tidsfördröjningsbilder av larverna i multilaneplattor placerade ovanpå skärmen på en bärbar dator. Mellan plattorna och skärmen finns en plastspridare som används för att förhindra moirémönster i de bilder som samlas in.
Figur 2. Tom bakgrund och aversiv stimulans i PowerPoint. Detta är den aktuella PowerPoint som används för att framkalla beteendeförändringar i zebrafisklarver. Det ger robusta beteendemässiga skillnader mellan A) den tomma bakgrunden och B) den rörliga röda stapeln.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Imaging Cabinets | WoodCraft Towers | ||
| Agarose | Fisher | BP1356-100 | |
| Digital camera | Canon EOS | Rebel T1i | |
| Laptops | Acer Aspire | Any is good as long as it has a 15.6 in. LCD screen with 1366 x 768 pixel resolution and a brightness of 220 cd/m2. | |
| One well plates | Fisher | 12-565-493 | |
| PowerPoint 2010 | Microsoft | ||
| Plastic diffuser | Pendaflex | 52345 |
