Zebrafiskundvikande och Thigmotaxis-analys: En metod med hög genomströmning för att undersöka larvbeteende som svar på aversiv visuell stimulans

- Till att börja med, placera fem larver i varje körfält på en sexfilig agarosaplatta. Lägg till ytterligare äggvatten, men överfyll inte körfälten.

Placera nu brunnsplattan i en bildkammare över en bärbar datorskärm.

Spela sedan in beteendet hos larverna som placeras på den tomma bakgrunden genom att ta timelapse-bilder.

Den röda formen uppfattas som ett hot, en aversiv stimulans, och orsakar larvernas stress. Som svar undviker de baren och visar positiv thigmotaxis. Positiv thigmotaxis är fiskens svar på stimulansen som söker kontakt med väggen och simmar vid kanten av körfältet.

I exempelprotokollet kommer vi att analysera undvikande och tiogmotactic svar av zebrafisk larver behandlade med farmaceutiska föreningar eller miljögifter.

- För att börja bildfångst, flytta försiktigt larverna från Petri-skålen till agarosabanan för att minska larvernas stress. Upp till 20 larver kan placeras i varje körfält, men fem larver per körfält används vanligtvis för att underlätta den mest exakta spårningen av simhastigheten och för att minska antalet larver som behövs per experiment.

Fyll banorna med äggvatten med eller utan läkemedel eller toxiska ämnen beroende på experimentet. Fyll inte banorna hela vägen förrän de är placerade i bildskåpen för att förhindra spill.

Vid denna tidpunkt kan körfälten toppas med äggvatten eller kemisk behandling så att det är i nivå med toppen av körfältet, för att eliminera skuggor på kanterna på körfälten i bilderna.

Programmera datorn för tidsfördröjningsfotografering, ta bilder var sjätte sekund för totalt 300 bilder per experiment. Ställ in kameran med en lägre upplösning för avbildning med videohastighet.

Använd en PowerPoint-presentation som en aversiv stimulans för larverna. I den här demonstrationen börjar PowerPoint med en tom vit bakgrund i 15 minuter, följt av 15 minuter av en rörlig röd stapel på den övre halvan av plattan.