Experimentelle Metastasierung und CTL adoptiven Transfer Immuntherapie Maus-Modell

Summary

Eine experimentelle Lungenmetastasen und CTL Immuntherapie Mausmodell für die Analyse von Tumorzellen-T-Zell-Interaktion<em> In vivo</em>.

Abstract

Experimentelle Metastasen Mausmodell ist eine einfache und dennoch physiologisch relevanten Metastasen-Modell. Die Tumorzellen werden intravenös (iv) in Maus-tail Venen gespritzt und besiedeln in der Lunge und damit, ähnlich wie die letzten Schritte der Metastasierung von Tumorzellen spontan: Überleben in der Zirkulation, Extravasation und Kolonialisierung in den distalen Organen. Aus therapeutischer Sicht ist die experimentelle Metastasierung Modell die einfachste und ideale Modell, da das Ziel der Therapien ist oft der Endpunkt der Metastasierung: etablierte metastasierten Tumor in der distalen Orgel. In diesem Modell werden Tumorzellen iv injiziert Maus Schwanzvenen und erlaubt zu kolonisieren und in der Lunge wachsen. Tumor-spezifische CTLs werden dann iv in den Metastasen tragenden Maus injiziert. Die Anzahl und Größe der Lungenmetastasen kann durch die Anzahl der Tumorzellen injiziert werden und die Zeit des Tumorwachstums gesteuert werden. Deshalb verschiedenen Stadien der Metastasierung, von minimal Metastasen zu ausgedehnter Metastasierung, werden modelliert. Lungenmetastasen werden durch die Inflation mit Tinte analysiert, so dass einfacher visueller Beobachtung und Quantifizierung.

Protocol

1. Experimentelle Metastasen Maus-Modell Am Tag vor der Tumorzelle Injektionen, Saatgut ein T75 Kolben mit bis zu 1 x 10 7 CMS4-Met-Zellen in 10 ml RPMI-Medium mit 10% Serum zu den schnell wachsenden Tumorzellen zu erhalten. Inkubieren über Nacht bei 37 ° C. Am Tag der Injektion, entfernen Sie das Medium und spülen Sie die Zellen einmal mit PBS, dann ernten die Tumorzellen mit 0,05% Trypsin-EDTA bei 37 ° C für 5 Minuten. Stoppen der Reaktion mit 10 ml RPMI-Medium mit 10% Serum. Trans…

Materials

Solutions:

India Ink Solution (17):

1. Pour 150 ml of distilled water into a 250 ml flask.
2. Add 4 drops ammonium hydroxide to the distilled water.
3. Add 30 ml India Ink stock (i.e. Sanford Black Magic Waterproof Drawing Ink 4465 Item 44011) to the ammonia and water mixture.
4. Top off with distilled water to a volume of 200 ml. Solution is ready for injection.

Fekete’s Solution (17):

Fekete’s solution is used to bleach India ink-inflated tumor-bearing lungs to distinguish white tumor nodules from the black background of normal tissues.

1. Add 350ml 95% EtOH to 1L glass bottle.
2. Add 150ml distilled water
3. Add 50ml formaldehyde
4. Add 25ml glacial acidic acid