Metástase experimental e CTL Adoptive Transferência Modelo rato Imunoterapia

Summary

Uma metástase pulmonar experimental e modelo de rato CTL imunoterapia para a análise da interação de células tumorais de células-T<em> In vivo</em>.

Abstract

Modelo de camundongo experimental de metástase é um modelo simples e metástase ainda fisiologicamente relevantes. As células tumorais são injetadas por via intravenosa (iv) nas veias da cauda do rato e colonizar nos pulmões, assim, assemelhando-se os últimos passos de metástase de células tumorais espontânea: a sobrevivência na circulação extravasamento, e colonização nos órgãos distal. Do ponto de vista terapêutico, o modelo experimental de metástase é o modelo mais simples e ideal uma vez que o alvo das terapias é freqüentemente o ponto final de metástase: estabelecida tumor metastático no órgão distal. Neste modelo, as células tumorais são injetadas nas veias da cauda iv mouse e permitido para colonizar e crescer nos pulmões. Tumor-específico CTLs são injetados iv no mouse metástases de rolamento. O número eo tamanho das metástases de pulmão pode ser controlada pelo número de células tumorais para ser injetada eo tempo de crescimento do tumor. Portanto, vários estágios de metástase, metástase do mínimo para metástases extensas, pode ser modelada. Metástases pulmonares são analisados ​​pela inflação com tinta, permitindo fácil observação visual e quantificação.

Protocol

1. Modelo Experimental rato Metástase No dia antes da injeção das células tumorais, uma semente T75 frasco com até 1 x 10 7 CMS4-Met células em 10 mL de meio RPMI contendo 10% de soro para obter rápido crescimento de células tumorais. Incubar durante a 37 ° C. No dia da injeção, remova a mídia e lave as células uma vez com PBS, em seguida, colher as células tumorais com 0,05% de tripsina-EDTA a 37 ° C por 5 minutos. Parar a reação com 10 mL de meio RPMI contendo 10% de so…

Materials

Solutions:

India Ink Solution (17):

1. Pour 150 ml of distilled water into a 250 ml flask.
2. Add 4 drops ammonium hydroxide to the distilled water.
3. Add 30 ml India Ink stock (i.e. Sanford Black Magic Waterproof Drawing Ink 4465 Item 44011) to the ammonia and water mixture.
4. Top off with distilled water to a volume of 200 ml. Solution is ready for injection.

Fekete’s Solution (17):

Fekete’s solution is used to bleach India ink-inflated tumor-bearing lungs to distinguish white tumor nodules from the black background of normal tissues.

1. Add 350ml 95% EtOH to 1L glass bottle.
2. Add 150ml distilled water
3. Add 50ml formaldehyde
4. Add 25ml glacial acidic acid