Bu makalede, biyomekanik ve mechanobiological çalışmalar için sıçan kuyruğu tendonları hazırlamak için kullanılan deneysel prosedürleri açıklamaktadır. Biyoreaktör odasına durulama ve yükleme, çıkarma, kesit alanı ölçümü ile başlayan hazırlık olarak önemli adımlar çeşitli özellikleri göstermiştir.
Abstract
Sıçan kuyruk tendon (RTTs) tendon fizyolojisi ve tendinopathy alanlarında in vitro çalışmalarda deneysel olarak kullanılan ortak bir biyolojik model. Bu dokuları ile çalışmak çok kırılgan olduğu için, zor ve şimdiye kadar kendi izolasyonu için herhangi bir titizlikle ayrıntılı bir protokol vardı.
Bu zorlukları ile karşı karşıya kalan, biz RTTs manipülasyon ve kontrol doku canlılığı, kısırlık ve bütünlüğünü kolaylaştırmak için yöntemler ve araçlar geliştirdik. Bu makale, biyomekanik ve mechanobiological çalışmalar için RTTs hazırlamak için kullanılan deneysel prosedürleri açıklamaktadır. Ekstraksiyon, kesit alanı ölçümü, durulama ve biyoreaktör odasına yükleme: Çalışmalarımız dört ana adımları ayrılır.
Her adımda, kolaylıkla çoğaltılabilir böylece tüm prosedürleri, malzeme ve manipülasyon detaylı olarak sunulmaktadır. Ayrıca, geliştirilen özel araçların sunulmuştur: RTTs ayırmak için kullanılan bir manipülasyon plaka, kesit alanı ölçüm ve ankraj sistemi sırasında doku konumlandırmak için bir optik mikrometre RTTs biyoreaktör üzerine takmak için.
Son olarak, biz yöntemleri doğrulamak için birden fazla testlerinden sonra elde edilen sonuçlar açıklanmaktadır. Canlılığı, kısırlık ve bütünlüğünü değerlendirmeler prosedürleri gibi sıçan kuyruğu tendonları gibi hassas dokuların manipülasyonlar için yeterince titiz olduğunu göstermektedir.
Protocol
Önceden herhangi bir manipülasyon, tendonların grup yapıyorlar deney ve cihazı kendi eğilim bağlı olarak kullanılmak üzere tanımlamanız gerekir. Bizim amaçlarımız için, ventral tendonları kesit alanı ölçüm ve biyoreaktör odasına takarken işlemek için böylece daha kolay çünkü daha küçük seçilen ve. Tüm aletler otoklava veya% 70 etanol ile sterilize olduğunu lütfen unutmayınız. Ayrıca,% 70 etanol içeren bir sprey şişesine her operasyon öncesi de…
Discussion
Bu deneysel yöntemler uygulanarak, biz bu tür dokuların geniş bir yelpazede in vitro çalışmalar yapabilirler. Örneğin, doku dejenerasyonu üzerine bir çalışma, on günlük bir süre için RTTs altında stimülasyon uygulama tarafından gerçekleştirildi. Her gün, tahribatsız stres gevşeme testleri doku mekanik özellikleri değerlendirildi. Sonunda, biz RTT stres değişimi gözlemlemek ve böylece mekanik özellikleri ilerlemesini analiz etmek mümkün.
<img src="/fi…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu makalede, M. Cyr bir lisans öğrencisi araştırma ödülü olarak G. Ebeveyn ve FRSQ için burslu olarak NSERC Hibe # 299.280, IRSST tarafından desteklenmiştir. Yoan Lemieux-Laneville video kaydedildi manipülasyonlar yapmak için teşekkür ederiz.
Dupuis, D. .Déshydratation de matrices collagéniques reconstruites in vitro: effets sur les propriétés mécaniques et histologiques [dissertation]. , 114-114 (1981).
Bruneau, A., Champagne, N., Cousineau-Pelletier, P., Parent, G., Langelier, E. Preparation of Rat Tail Tendons for Biomechanical and Mechanobiological Studies. J. Vis. Exp. (41), e2176, doi:10.3791/2176 (2010).