CFSEは共有結合蛍光色素、カルボキシで長寿命の細胞内分子にラベルを付けます。このように、CFSE標識細胞が分裂するときに、その子孫は、それによって細胞分裂を評価するために使用できる蛍光の半分の量を、持っている。この資料では、通常CFSEでマウスのリンパ球を標識するために使用される手続きを説明します。
カルボキシフルオレセインスクシンイミジルエステル(CFSE)はリンパ球分裂1-3を監視するために効果的で人気のある手段です。 CFSEは共有結合蛍光色素、カルボキシで長寿命の細胞内分子にラベルを付けます。このように、CFSE標識細胞が分裂するときに、その子孫は、カルボキシタグ付き分子の数の半分とを授けられており、したがって、各細胞分裂は、フローサイトメトリーを介して細胞の蛍光に対応する減少を測定することにより評価することができます。その低い細胞毒性と相まって非常に低分散の高い蛍光強度を持つリンパ球集団を、ラベルを付けるCFSEの容量は、その細胞分裂を測定するために理想的な色素こと。それは、フルオレセイン系染料なのでそれはまた、マルチカラーフローサイトメトリーにそれが適用されること、他の蛍光色素の広い範囲と互換性があります。この記事では、通常8細胞分裂にまで監視の目的のためにマウスのリンパ球を標識するために使用される手続きを説明します。これらの標識された細胞は、in vitroおよびin vivo試験の両方を使用することができます。
CFSEの仕組みと、なぜ急速な標識方法に感謝するために、増殖の解析での使用に必要な、それはCFSE細胞標識の分子基盤を理解しておくと便利です。これは二つのフェーズ、1)セルのエントリ、2)タンパク質の標識(図3)に分けることができます。 1)セルのエントリ:セルへの染料のエントリーは、染料のジアセチル形、カルボキシフルオレセインジアセテートスクシンイミジルエステル(CFDA、SE)によって媒介される。酢酸塩は、原形質膜を介してその迅速なフラックスを可能に色素性の高い膜透過性を作る。細胞内に存在するエステラーゼ、、それによって切断するCFDA、SEから酢酸とはるかに少ない膜透過性である染料のCFSEの形態を生じさせるには、このように細胞内の色素を集中。 2)タンパク質標識:CFDA、SEとCFSEの両方がアミノ反応性スクシンイミジル側鎖を持っているが、唯一のCFSEの蛍光灯です。 CFSEの高い細胞内濃度は、タンパク質を迅速かつ高いレベルの細胞内ラベリングを容易にします。細胞のCFSE標識は、代表的な結果(図1および2)に示すようにいくつかの部門を受けた細胞を解決するために重要である細胞の均一に標識された人口を、得るために迅速に実行する必要があります。
The authors have nothing to disclose.
この記事で報告された作品は、国立保健オーストラリアプログラムグラント(CRP)とNHMRCプロジェクト無償(CRPとBJCQ)の医学研究評議会(NHMRC)によってサポートされていました。またBJCQはNHMRCピータードハティー博士研究員です。
Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
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CFDA,SE | Molecular Probes | |||
DMSO | Cambridge Isotope Laboratories Inc. | |||
Lymphocytes | eg mouse or human | |||
RPMI | Gibco | |||
FCS | SAFC Biosciences | |||
10-15ml conical tubes | Falcon, Becton Dickinson | |||
PBS | Gibco | |||
Aluminium foil | Capral Aluminium | |||
Vortex | Scientific Industries | |||
Centrifuge | Eppendorf (5810 R) | |||
Flow cytometer | LSR-II (BD Biosciences) |