小鼠神经嵴干细胞的培养鸡胚提取物的生产
Summary
要在体外培养的神经嵴干细胞（NCSC），一种特殊的介质（NCSCM）是必需的。 NCSCM的重要组成部分，是鸡胚提取物（CEE）。在这里，我们描述准确的技术，生产的纯正和高品质的中欧和东欧的最大数额，包括隔离，浸渍，离心，过滤过程的详细信息。
Abstract
来自神经外胚层神经嵴的胚胎发育过程中，仍然存在只是暂时的。早期的实验已经隔音多潜能的祖细胞，神经嵴1是一个不可分割的一部分。表型，神经嵴干细胞（NCSC）的定义，同时表示在他们从神经嵴迁移 2,3,4,5的P75（低仿射神经生长因子受体，LNGFR）和SOX10。这些祖细胞，能分化成平滑肌细胞，嗜铬细胞，神经元和神经胶质细胞，以及黑色素细胞，软骨和骨6,7,8,9。要培养非公务员合约雇员在体外实验中 ，一个特殊的神经嵴干细胞的培养基（NCSCM）是必需的10。 NCSCM最复杂的部分是编制鸡胚提取物（CEE）的代表的非公务员合约雇员，以及其他类型的神经植生长因子的重要来源。旁边的中欧和东欧的其他NCSCM成分均为市售。生产的CCE使用实验室标准的设备，它的高度重视是了解隔离，浸渍，离心，过滤过程中具有挑战性的细节。在这个协议中，我们描述了准确的技术，生产的纯正和高品质的中欧和东欧的最大数额。
Protocol
作者状态，对动物的实验是根据欧洲共同体理事会指令（86/609/EEC），美国国立卫生研究院的机构动物所规定的实验程序和法规的动物护理和使用准则保养和使用委员会（IACUC）在杜伊斯堡 – 埃森大学（德国）。 第1部分：设置（视频所示） 准备材料和解决方案（前鸡蛋孵化器） 鸡蛋必须在培养箱培养11天，于37℃（100℉）。 70％的乙醇喷雾?…
Discussion
该协议是基于已在过去的10,11中所述的程序进行修改。除了前出版物，我们在这里展示个人更加扩大的过程中不同步骤。支持重要的细节，确保正确的程序和可靠的结果，实验者。此外，由于解剖过程是中欧和东欧提取的重要组成部分，我们描述蛋黄麻袋的胚胎中的每一个细节的过程。有几个重要的点要注意下面讨论。
解剖鸡胚孵化结束后应尽快开始。胚胎死到清扫?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
马库斯Pajtler和罗伯特Bohrer的支持和意见，对本议定书的可视化，是具有非常重要的价值。
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 11 days incubated chicken eggs | Sörries-Trockels Vermehrungszucht GmbH & Co.KG | |||
| Alcoholic disinfection spray | Schülke & Mayr GmbH | |||
| DMEMGlutamax | GIBCO Invitrogen | |||
| Syringe sterile (60 ml) | BD Biosciences | |||
| Tubes sterile (50; 15 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Pipet tips sterile | Starlab GmbH | |||
| Hyaluronidase typeIV-S | Sigma-Aldrich | |||
| Milipore stericups sterile (0.45; 0.22 μl) | Fisher Scientific AG | |||
| Pipettes sterile (25; 10; 5 ml) | Greiner Bio-One GmbH | |||
| Centrifuge L5-50 | Rotor type Ti-45 |
Riferimenti
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Tags
Chick Embryo ExtractMurine Neural Crest Stem CellsNeuro-ectodermPluripotent Progenitor CellsP75SOX10MigrationSmooth Muscle CellsChromaffin CellsNeuronsGlial CellsMelanocytesCartilageBoneNeural Crest Stem Cell Medium (NCSCM)Growth FactorsChick Embryo Extract PreparationIsolationMacerationCentrifugationFiltration Processes
Citazione di questo articolo
Pajtler, K., Bohrer, A., Maurer, J., Schorle, H., Schramm, A., Eggert, A., Schulte, J. H. Production of Chick Embryo Extract for the Cultivation of Murine Neural Crest Stem Cells. J. Vis. Exp. (45), e2380, doi:10.3791/2380 (2010).