카테고리의 감지 세균성 병원균에 대한 '발광 생물'리포터 파지
Summary
우선 세균성 병원균의 식별을위한 간단한 방법은 유전자 조작 기자 파지를 사용하는 것입니다. 자신의 특정 호스트 수종와 관련된 이러한 기자의 파지는 빠르게 호스트 세포에 발광 생물 신호 응답을 transducing 수 있습니다. 여기에, 우리는의 검출에 대한 기자의 파지의 사용을 설명<em> Yersinia pestis</em>.
Abstract
Yersinia pestis의 및 바실러스 anthracis는 각각 1, 역병과 탄저병의 원인이되는 대리인하는 세균성 병원균 카테고리입니다. 두 질환 '의 자연 발생 지금은 비교적 드문이지만, 분류된 생물학 무기 이러한 병원균을 사용하는 테러 집단의 가능성은 현실입니다. 질병의 고유한 communicability, 신속한 임상 과정, 높은 사망률 때문에 그것은 확산이 빠르게 감지하는 것이 중요합니다. 따라서 빠른 감지 및 진단을 제공하는 방법은 공중 보건 조치 및 위기 관리의 활성화의 즉각적인 이행을 보장하기 위해 필수적입니다.
재조합 기자 파지는 Y.의 검색에 대한 신속하고 구체적인 접근 방식을 제공할 수 있습니다 pestis와 B. anthracis가. 질병 통제 예방 센터 (CDC)는 현재 이러한 세균 병원균 2-4 확인 식별에 대한 고전적인 파지의 용해 assays를 사용합니다. 이러한 assays는 자연스럽게 자신의 세균 호스트에 대한 구체적이고 lytic 아르 파지를 발생 활용합니다. 특정 파지의 존재에 재배 세균의 하룻밤 성장 후, plaques (세균 용해)의 형성은 박테리아 타겟의 긍정적인 식별을 제공합니다. 이러한 assays는 강력한 있지만, 그들은 세 가지 결점으로 고통 : 1) 그들은 실험실을 기반으로, 2) 그들이 의심되는 시료에서 세균 분리 및 배양을 필요로하고, 3) 그들은 완료하는 데 24-36 H 가져가라. 이러한 문제를 해결하기 위해 재조합 "빛을 태그"기자 파지는 유전자 Y.의 게놈에 장염 harveyi luxAB의 유전자를 통합하여 설계되었습니다 pestis와 B. anthracis 특정 파지 5-8. 그 결과 luxAB 기자의 파지는 빠르게하여 특정 목표를 감지할 수 있었다 (분 이내) 및 sensitively받는 세포에 발광 생물 표현형를 부여. 중요한 것은 감지 재배받는 세포 또는 모의에 감염된 임상 표본 7 중 얻은 것입니다.
데모를 위해, 우리가 알려진 Y.의 파지 – 중재 검출하는 방법을 설명 pestis는 CDC 전염병 진단 파지 ΦA1122 6,7 (그림 1)에서 만들어진 luxAB 기자 파지를 사용하여 분리. 사소한 수정 (성장 온도와 미디어 예 변화)와 유사한 방법, B.의 검색에 사용할 수 있습니다 anthracis은 B.를 사용하여 분리 anthracis 기자의 파지의 Wβ : luxAB 8. 방법은 재배 Y까지 biolumescent 표현형의 파지 – 중재 전달을 설명합니다 이후 microplate의 luminometer를 사용하여 측정 pestis 세포. 전통적인 파지의 용해 assays를 통해이 방법의 주요 장점은 사용, 빠른 결과를, 그리고 96 – 웰 플레이트 microtiter 형식으로 동시에 여러 샘플을 테스트하는 기능의 용이성이다.
그림 1. 검색 설계도. 파지를 예제와 함께 혼합되어, 파지는 세포, luxAB가 표현되며, 세포를 감염 bioluminesces. 샘플 처리가 필요하지 않습니다, 파지와 세포가 혼합되고 이후 신호를 측정.
Protocol
Discussion
이 방법은 빠르게 Y.을 감지하기 위해 기자 파지의 능력을 보여줍니다 기자 파지 이후 pestis는 교양 Y까지 발광 생물 신호 응답을 transduce 수 파지 추가 후 20 분 이내에 pestis 세포. 기자 파지도 직접 Y. 검출이 가능합니다 절연 이후 재배 7 전제 조건없이 임상 매트릭스에 pestis. 일반적으로 완료 48 H를 필요로하는 표준 파지의 용해 assays에 비해, 이것은 …
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 국립 보건원의 중소 기업 혁신 연구 프로그램 (NIAID, 1R43AI082698 – 01)과 식량 농업의 국립 연구소 USDA (NIFA, 2009-33610-20028)에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
|---|---|---|
| Difco LB agar, Miller | VWR | 90003-346 |
| Difco LB broth, Miller | VWR | 90003-350 |
| 17 x 100 mm culture tubes | USA Scientific | 1485-0810 |
| n-Decanal | Sigma | D7384 |
| Veritas microplate luminometer | Turner Biosystems | 9100-001 |
| Microlite microtiter 96-well plate | VWR | 62402-984 |
Riferimenti
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