Single Drosophila Ommatidium Dissection en Imaging

Summary

De beperkende factor in het gebruik van de volwassen<em> Drosophila</em> Oog voor neurodegeneratie en celbiologie onderzoek is het moeilijk beeldvorming van intracellulaire processen. We beschrijven de ontleding van enkele ommatidia om een ​​bonafide primaire neuronale cel-cultuur, die kan worden onderworpen aan medicamenteuze behandeling en geavanceerde imaging te genereren.

Abstract

De fruitvlieg Drosophila melanogaster heeft waardevolle bijdragen aan neurowetenschappelijk onderzoek en is op grote schaal gebruikt als een model voor neurodegeneratieve ziekten als gevolg van de krachtige genetica ^1. De vlieg oog in het bijzonder is het orgaan van de keuze voor neurodegeneratie onderzoek, zijnde de meest toegankelijke en leven overbodig onderdeel van het Drosophila zenuwstelsel. Maar de belangrijkste waarschuwing van intacte ogen is de moeilijkheid, vanwege de intense autofluorescentie van het pigment, in beeldvorming intracellulaire evenementen, zoals autofagie dynamiek ^2, die van cruciaal belang voor het begrijpen van neurodegeneratie.

We hebben recent gebruikte de dissectie en de cultuur van enkele ommatidia ^3, dat is van essentieel belang geweest voor ons begrip van Autofagie disfuncties in een vlieg model van Dentatorubro-Pallidoluysian Atrofie (DRPLA) ^{3, 4.}

We hebben nu rapport een uitgebreide beschrijving van deze techniek (figuur 1), aangepast van elektrofysiologische studies ^5, die waarschijnlijk drastisch uit te breiden de mogelijkheid van vliegen modellen voor neurodegeneratie. Deze methode kan worden aangepast om de afbeelding te leven subcellulaire evenementen en effectieve toediening van het geneesmiddel te controleren op fotoreceptorcellen (afb. 2). Indien gebruikt in combinatie met mozaïek technieken ^6-8, kunnen de reacties van genetisch verschillende cellen worden getest in parallel (afb. 2).

Protocol

1. Dissectie van de Drosophila netvlies Vul een een goed van een 3-Well glasplaatje met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS 1X) en vervolgens vliegt verdoven door CO 2. Zowel mannen als vrouwen kan worden gebruikt voor dit experiment. Zodra de vliegen worden verdoofd, pick-up een enkel vliegen met behulp van een tang en zet het in de kleine schotel van PBS. Onder een ontleding scope, neem de snuit met een tang, en dan maak de kop van het lichaam door de nek doorsnijde…

Discussion

De single ommatidium dissectie hier gepresenteerde maakt collectie van diepere celbiologische informatie over processen, zoals neurodegeneratie, toen gemodelleerd in het Drosophila oog. De fotoreceptor neuronen zijn gemakkelijker toegankelijk dan andere neuronen en ze cytoplasma is bijzonder groot, en dus geschikt om blaasje dynamiek studie, in de zeer bekwaam dezelfde cellen gebruikt in tal van modellen om neurodegeneratie in vivo te kwantificeren. De kritische aspect van de dissectie is vooral de mog…

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Portable CO2 Dispenser	Flystuff	59-150	Refills also available
DUMONT Tweezer No 5	AGAR Scientific	T5034
3-Well Glass Slide	EMS	71561-01
Micro scissors	VWR	HAMMHSB516-09
Schneider’s Medium	VWR	733-1663
LysoTracker Red DND-99	Invitrogen	L7528
Superfrost Slides	VWR	631-0108
Vectashield with Dapi	Vector Labs	H-1200
Coverslips	VWR	631-1336