Simple Drosophile Dissection ommatidie et imagerie

Summary

Le facteur limitant dans l'utilisation de l'adulte<em> Drosophile</emOeil> pour étudier la neurodégénérescence et de biologie cellulaire est l'imagerie difficile de processus intracellulaires. Nous décrivons la dissection des ommatidies simple pour générer un bona fide culture primaire de cellules neuronales, qui peut être soumis à un traitement médicamenteux et d'imagerie de pointe.

Abstract

La mouche des fruits Drosophila melanogaster a apporté une contribution inestimable à la recherche en neurosciences et a été largement utilisée comme modèle pour les maladies neurodégénératives en raison de sa puissante génétique ^1. L'œil de la mouche en particulier, a été l'organe de choix pour la recherche neurodégénérescence, étant la partie la plus accessible et la vie-dispensable de la drosophile système nerveux. Cependant la mise en garde importante des yeux intacts, c'est la difficulté, à cause de l'autofluorescence intense du pigment, dans les événements d'imagerie intracellulaire, telles que l'autophagie dynamiques ^2, qui sont primordiales pour la compréhension de la neurodégénérescence.

Nous avons récemment utilisé la dissection et la culture du seul ommatidies ³ qui a été essentielle pour notre compréhension des dysfonctionnements autophagie dans un modèle de vol du Dentatorubro-pallido Atrophie (DRPLA) ^{3, 4.}

Nous avons maintenant le rapport une description complète de cette technique (fig. 1), adapté de ⁵ études électrophysiologiques, qui est susceptible d'augmenter considérablement la possibilité de voler pour les modèles neurodégénérescence. Cette méthode peut être adaptée aux images en direct des événements subcellulaire et de surveiller l'administration de médicaments efficaces sur les cellules photoréceptrices (Fig. 2). Si elle est utilisée en combinaison avec ^6-8 techniques de mosaïque, les réponses des cellules génétiquement différentes peuvent être dosés en parallèle (Fig. 2).

Protocol

1. Dissection de la rétine chez la drosophile Remplir un puits d'une lame de verre 3 puits avec du tampon phosphate salin (PBS 1X), puis par les mouches anesthésier CO 2. Les mâles et les femelles peuvent être utilisés pour cette expérience. Une fois que les mouches sont anesthésiés, ramasser une seule mouche à l'aide de pinces et le déposer dans le petit plat de PBS. Sous un microscope à dissection, pincez la trompe avec une pince, puis détacher la …

Discussion

La dissection ommatidie seule présentée ici permet de collecter des informations plus profondes sur les processus biologiques cellulaires, comme la neurodégénérescence, quand modélisés dans l'œil de drosophile. Les neurones photorécepteurs sont plus facilement accessibles que d'autres neurones et ils cytoplasme est particulièrement importante, et donc adapté pour étudier la dynamique des vésicules, dans les cellules mêmes utilisé avec compétence dans de nombreux modèles pour quantifier …

Materials

Name of the reagent	Company	Catalogue number	Comments (optional)
Portable CO2 Dispenser	Flystuff	59-150	Refills also available
DUMONT Tweezer No 5	AGAR Scientific	T5034
3-Well Glass Slide	EMS	71561-01
Micro scissors	VWR	HAMMHSB516-09
Schneider’s Medium	VWR	733-1663
LysoTracker Red DND-99	Invitrogen	L7528
Superfrost Slides	VWR	631-0108
Vectashield with Dapi	Vector Labs	H-1200
Coverslips	VWR	631-1336