单果蝇 Ommatidium解剖和影像
Summary
在成人使用的限制因素<em>果蝇</em>眼来研究神经退行性疾病和细胞生物学，细胞内过程的困难成像。我们描述了单小眼的解剖，产生一个真正的初级神经细胞培养，可药物治疗和先进的成像。
Abstract
果蝇神经科学的研究取得了宝贵的贡献，并已被广泛用作一种神经退行性疾病，因为其强大的遗传学1的模型。尤其是飞眼睛已选择的器官，神经退行性疾病的研究果蝇的神经系统是最方便和生活可有可无的部分。但是完整的眼睛主要需要注意的是难度，因为强烈的自体荧光的色素，在成像的细胞内事件，如自体吞噬动态 2，这是最重要的的神经退行性疾病的认识。
我们最近使用过的3单小眼的解剖和文化已经为我们的自噬功能障碍的认识中最重要的一个飞行模型Dentatorubro – Pallidoluysian萎缩 （ DRPLA）3，4。
现在，我们的报告全面描述了这种技术（图1），改编自电生理研究，这是有可能大幅扩大，神经退行性疾病的飞行模型的可能性。这种方法可适应图像活细胞内的事件，并监测到感光细胞的有效药物管理局（图2）。如果使用与镶嵌技法6-8相结合，可检测基因不同细胞的反应（图2）并行。
Protocol
1。 果蝇视网膜的解剖填写一个3井载玻片，用磷酸盐缓冲液（PBS 1X），然后麻醉苍蝇的CO 2 。男性和女性都可以用于本次实验。 苍蝇是麻醉后，拿起一个单一的飞行，使用镊子放入小碟的PBS。 根据解剖范围，捏钳的长鼻，然后从身体分离的头撞断了脖子，使用产钳的第二套。 控股的长鼻苍蝇头，沿左/右中线microscissors揭示大脑的飞头减少了一半。 <l…
Discussion
这里介绍的单ommatidium夹层使更深细胞像神经退行性疾病的进程， 在果蝇的眼睛为蓝本时的生物信息的收集。感光神经细胞更容易比其他神经元的访问和他们细胞质是非常相同的细胞在许多模型， 熟练使用量化体内的神经退行性疾病，特别大，因而适用于研究囊泡动力学。剥离的一个重要方面是主要的能力来执行它不固定的组织，绝不能暴露在空气中或干。这一基本的技术扩张的可?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢伯纳德沙鲁讨论。这项工作是由KCL的生物医学学院。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| Portable CO2 Dispenser | Flystuff | 59-150 | Refills also available |
| DUMONT Tweezer No 5 | AGAR Scientific | T5034 | |
| 3-Well Glass Slide | EMS | 71561-01 | |
| Micro scissors | VWR | HAMMHSB516-09 | |
| Schneider’s Medium | VWR | 733-1663 | |
| LysoTracker Red DND-99 | Invitrogen | L7528 | |
| Superfrost Slides | VWR | 631-0108 | |
| Vectashield with Dapi | Vector Labs | H-1200 | |
| Coverslips | VWR | 631-1336 |
Riferimenti
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Citazione di questo articolo
Volpi, V., Mackay, D., Fanto, M. Single Drosophila Ommatidium Dissection and Imaging. J. Vis. Exp. (54), e2882, doi:10.3791/2882 (2011).