ゼブラフィッシュ胚性神経上皮の透水性に関するアッセイ
Summary
我々は、ゼブラフィッシュ胚の脳の透磁率のためのライブ全体の動物定量的な測定について説明します。技術は神経管管腔内に異なる分子量の脳脊髄液や分子を保持する能力を分析し、心室の彼らの動きを定量化します。この方法では、開発や病気時の上皮透過性と成熟の違いを判別するのに役立ちます。
Abstract
脳室系は、脊椎動物間で保存されていると脳の発達の初期段階で形成し、その動物の生涯にわたって維持されている脳室と呼ばれる相互接続された空洞のシリーズで構成されています。脳室系は、脊椎動物で発見され、心室は中央の管腔は脳脊髄液（CSF）の1,2を満たすと、神経管形成後に開発されています。 CSFは、正常な脳の発達と機能3-6必須であるタンパク質に富む流体である。
神経管が閉じられた後、ゼブラフィッシュでは、脳室のインフレ率は、約18時間後に受精（HPF）で始まる。複数のプロセスを透磁率とCSF産生を調節する神経上皮、タイトジャンクション形成の形成を含む脳室形成、関連付けられています。我々は、Na、K-ATPaseのこれらのすべてのプロセスに影響を与える、脳室のインフレのために必要であることを示したクロー5aはタイトジャンクションの形成9のために必要である間ES 7,8、。さらに、当社は、ミオシンの阻害を介して、胚性神経上皮のその "緩和"を示した脳室のインフレ率に関連付けられています。
ゼブラフィッシュの脳室の膨張時に透過性の調節を調べるために、我々は、心室色素保持アッセイを開発した。この方法では、蛍光脳脊髄液を標識するために、生きているゼブラフィッシュ胚、以前に我々の研究室で開発された10の技術で脳室注入を使用しています。胚は、その後、脳室と神経上皮を通して蛍光染料が移動すると時間をかけて結像される。染料前面が離れて時間をかけて神経上皮の基底（非管腔）側から移動する距離を定量化して、神経上皮透過性（ 図1）の尺度である。我々は染料70 kDaと小さいが、神経上皮を通って移動することを観察し、detecteすることができます24 HPF（ 図2）で、ゼブラフィッシュ胚の脳の外側D。
この色素保持アッセイを開発中に、異なる時間に、異なる遺伝的背景の様々な神経上皮透過性を分析するために使用され、環境変動の後にすることができます。また、CSFの病的集積を検討する上で役に立つかもしれません。全体的に、この手法は、研究者が開発と疾患の間に透磁率の役割と規制を分析することができます。
Protocol
Discussion
私たちは、与えられた分子量が注入された色素に決定されるように生きている胚ゼブラフィッシュの脳の透過性を定量化する能力を示す。ゼブラフィッシュ胚性神経上皮は分子量の異なる染料の差動透過性であるという我々の観察は、色素が傍細胞透過性を介して移動していることを示唆している。しかし、我々は、観測された透過性に経貢献の可能性を排除することはできません。この手?…
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国立精神衛生研究所、国立科学財団によってサポートされていました。専門家の魚の飼育のために多くの有益な議論や建設的な批判のためのSive研究室のメンバーに、オリヴィエPaugois氏に感謝します。
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue number |
| Dextran, Fluorescein, Anionic, Lysine Fixable | Invitrogen | D7136, D7137, D1822, D1820, D1845 |
| Tricaine powder | Sigma | A5040 |
| Capillary Tubes | FHC Inc. | 30-30-1 |
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